1、高效液相色谱法测定琥珀酸美托洛尔缓释胶囊的含量王英（陕西博森生物制药股份集团有限公司，陕西 西安 710118）摘要：目的 建立以高效液相色谱法测定琥珀酸美托洛尔缓释胶囊含量的测定方法。方法 用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以醋酸铵缓冲液（3.9g 醋酸铵，加水至 810 ml，加三乙胺 3.0 ml，加冰醋酸 10 ml，加磷酸 3.0 ml）-乙腈， （8515）为流动相，流速为 1.0 mLmin-1，检测波长为 280nm，进样量为 10L。结果 琥珀酸美托洛尔进样量在0.32081.2832g 范围内与峰面积呈良好的线性关系（r= 0.999 2） ；平均加样回收率为100.1%（RS
2、D=1.2%，n=6） 。结论 本方法简单、快速、准确，稳定，重现性好。关键词：琥珀酸美托洛尔缓释胶囊；高效液相色谱法；含量美托洛尔为全球首个选择性的 1 受体阻滞剂，于 1969 年在瑞典的 Hassle 实验室研发成功，已经广泛应用于高血压和缺血性心脏病、慢性稳定性心力衰竭、心律失常等多种心血管疾病患者的治疗中。琥珀酸美托洛尔缓释胶囊是根据缓释片改剂型开发的品种，琥珀酸美托洛尔及其制剂收载于各国药典 1 2 4的含量测定方法为高效液相色谱法，但各方法不能完全排除有关物质的干扰。本文对现有的 HPLC 法进行优化，用以测定琥珀酸美托洛尔缓释胶囊的含量。此方法简单、快速、方便、准确度高。1 仪
3、器与试药1.1 仪器 日本岛津 LC-20A 高效液相色谱仪；ZORBAX Eclipse XDB-C8 柱（4.6mm150mm, 5m） 。1.2 试药 琥珀酸美托洛尔对照品购自英国 LGC 标准品（批号：21603） ；琥珀酸美托洛尔缓释胶囊样品（自制，批号：20140615，20140618，20140621） ；乙腈为色谱纯，实验试剂均为分析纯、实验用水为注射用水。2 方法与结果2.1 色谱条件 色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C8 柱（4.6mm150mm, 5m ） ；流动相：醋酸铵缓冲液（3.9g 醋酸铵，加水至 810 ml，加三乙胺 3.0 ml，加冰醋酸 1
4、0 ml，加磷酸3.0 ml）-乙腈（8515） ；检测波长：280nm；柱温：30；流速：1.0mLmin -1；进样量：10L。2.2 检测波长的选择 取琥珀酸美托洛尔对照品适量，加流动相溶解，以流动相为空白，在 400200nm 波长范围内扫描，结果表明琥珀酸美托洛尔在 280nm 的波长处有最大吸收，故选择 280nm 作为本品的检测波长。2.3 溶液的制备对照品溶液 精密量取琥珀酸美托洛尔对照品适量，精密称定，加流动相制成每 1mL约含 80g 的溶液。供试品溶液 取供试品 10 粒，倒出内容物（白色缓释微丸） ，研细，精密称取细粉适量（约相当于琥珀酸美托洛尔 100mg） ，置 2
5、50mL 量瓶中，加流动相适量，超声处理 30min，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液 5mL 置 25mL 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。2.4 方法学考察2.4.1 精密度测定 精密量取琥珀酸美托洛尔对照品溶液，进样 6 次，测定峰面积值，其相对标准偏差为 0.09%。2.4.2 专属性考察 精密量取琥珀酸美托洛尔对照品溶液、琥珀酸美托洛尔缓释胶囊供试品溶液及不含琥珀酸美托洛尔的阴性对照溶液各 10L，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，试验结果表明：琥珀酸美托洛尔与其他物质的分离符合规定，阴性样品在此条件下无干扰，高效液相色谱图见下图。对照品 样品 阴性对照品琥
6、珀酸美托洛尔高效液相色谱图A对照品：B 样品：C阴性对照品； 1琥珀酸美托洛尔峰2.4.3 标准曲线的制备 精密称取琥珀酸美托洛尔对照品 8.02mg，置 100mL 量瓶中，用水溶解并稀释至浓度，摇匀。分别精密量取 4，6，8，12 和 16L，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积 A 为纵坐标，以进样量 g 为横坐标进行线性回归，得回归方程：Y = 50520x + 16401 （r= 0.999 2） 。结果表明，琥珀酸美托洛尔在 0.32081.2832g 范围内呈良好的线性关系。2.4.4 重复性试验 取同一批号（20140615）的样品 6 份，分别依法制成供试品溶液，测定琥珀
7、酸美托洛尔的含量，其相对标准偏差 RSD 为 0.64%，表明本法重现性较好。2.4.5 稳定性试验 取新制备的供试品溶液，精密吸取 10L，分别于 0，6，12，16 和 24h内分别进样，记录琥珀酸美托洛尔峰面积，其相对标准偏差 RSD 为 0.12%,表明在 24h 内溶液稳定。2.4.6 加样回收率 精密称取已知含量（ 235mgg-1）的样品研细内容物(批号 20140615)适量（约相当于琥珀酸美托洛尔 10mg） ，共 6 份，分别精密加入琥珀酸美托洛尔原料适量（约相当于琥珀酸美托洛尔 100mg，原料含量为 98.6%） ，按拟定的含量测定方法，测定琥珀酸美托洛尔含量，平均回收
8、率为 100.1 %，RSD 为 1.2%，表明本法具有良好的回收率。2.4.7 样品测定 连续 3 批样品按上述方法制备样品溶液，精密量取对照品溶液及样品溶液各 10L 注入高效液相色谱仪，按外标法计算，结果批号 20140615、20140618 及 20140621批琥珀酸美托洛尔缓释胶囊中琥珀酸美托洛尔含量分别为标示量的 99.8%，99.7%和99.5%。3 讨论在色谱系统流动相及色谱柱的选择中，先后开展了对不同来源的含量测定法方法进行比较的研究实验。采用琥珀酸美托洛尔 USP 含量测定方法 1，实验证明，选用该流动体系进行检测色谱柱耐受性差；采用琥珀酸美托洛尔缓释片 USP 含量测
9、定方法 2，实验证明，主峰出峰过早，混合杂质分离度不符合要求；采用琥珀酸美托洛尔缓释片进口注册标准含量测定方法 3 ，实验证明，主峰出峰过早，混合杂质分离度不符合要求；采用琥珀酸美托洛尔 EP 含量测定方法 4，实验证明，选用该色谱条件进行检测，保留时间过长，通过调整色谱柱类型C18 为 C8 柱，结果当以醋酸铵缓冲液（3.9g 醋酸铵，加水至 810 ml，加三乙胺 3.0 ml，加冰醋酸 10 ml，加磷酸 3.0 ml）- 乙腈， （8515）为流动相时，保留时间合适，琥珀酸美托洛尔峰形对称，且与其他杂质峰均能达到基线分离，通过对样品破坏后 DAD 检测试验结果表明，色谱峰纯度亦符合要求。参考文献：1 美国药典.31 版S.26:2696.2 美国药典委员会.修订公告.2012.3 国家药品标准.琥珀酸美托洛尔缓释片进口药品注册标准.2002.4 欧洲药典.S.6.0:2409-2410
