1、12015 版中国药典一部修订情况解读朱晓静第一部分 2015 版中国药典概况根据国家食品药品监督管理总局 2015 年第 67 号令， 中华人民共和国药典2015 年版于 2015 年 12 月 1 日起实施。作为从事药品领域的相关人员，有必要对 2015 版中国药典的修订情况进行深入了解，以便更好地实施药典相关规定。一、2015 版中国药典修订概况中国药典由国家药品监督管理部门颁布，是国家为保证药品质量、保证人民用药安全有效、质量可控而制定的药品法典。 中国药典对于保证药品质量，维护和保障公众身体健康及用药的合法权益，促进我国医药产业健康发展，具有十分重要的作用。中国药典是药品行业的最重要
2、的文件之一，其修订一直备受瞩目。2015 版中国药典是继我国 1953 年第一版药典以来的第十版药典。2015 版药典共分为四部出版，其中一部为中药；二部为化学药；三部为生物制药；四部为药典通则、药用辅料。药典委员会副主任委员、国家食品药品监管总局吴浈副局长指出，2015 年版药典无论是在药典品种收载、标准增修订幅度、检验方法完善、检测限度设定，还是在标准体系的系统完善、质控水平的整体提升都上了一个新的台阶。二、2015 版中国药典的主要变化2015 版中国药典的主要变化包括以下七个方面。（一）收载品种大幅增加2015 版药典收载品种 5924 个，与 2010 版药典相比新增品种 1125
3、个，修订品种 1201 个。新版药典收录药品数量达 5608 个，比 2010 年版药典新增1082 个，覆盖基本药物目录和医疗保险目录的大部分品种，更加适应临床用药。（二）药典标准更加系统化、规范化通过药典凡例、通则、总论的全面增修订，从整体上进一步提升了对药品质量控制的要求，完善了药典标准的技术规定，使药典标准更加系统化、规范化。（三）健全了药品标准体系药用辅料品种增加至 270 个，新增相关指导原则；标准物质新增相关通则和指导原则；药包材新增相关指导原则；在归纳、验证和规范的基础上实现了中国药典各部共性检测方法的协调统一。（四）附录（通则） 、辅料独立成卷四部22015版中国药典最大的变
4、动之一是将原药典各部附录整合，并与药用辅料标准独立成卷，首次作为中国药典第四部。2010版以前，药典的每一部分别制定附录，这些附录条目中，有部分标题相同内容也相同，还有部分是标题相同但内容不同的，通过整合解决了长期以来药典各部共性检测方法重复收录、彼此之间方法不协调、不统一、不规范，给药品检验实际操作带来不便的问题。2015 年版中国药典四部内容包括凡例、通则和药用辅料，通用性附录整合后，除生物制品收载个性通则外，一部、二部不再单独收载通则，对中药和生物制品的特殊性检定方法通则予以单列。（五）药用辅料品种收载数量显著增加，标准水平明显提高2015 年版中国药典四部新增药用辅料品种 139 个，
5、修订 95 个，收载总数达 270 个。可供注射用辅料品种由 2010 年版得 2 个增加至 23 个，增加了聚乙二醇 300、聚乙二醇 400、聚山梨酯 80、活性炭等常用的可供注射用辅料标准的制定。对提升药用辅料质量，特别是高风险药品的安全性、弥补我国药用辅料标准短缺、提高药用辅料监管能力、推进药用辅料的行业发展具有重要作用。（六）安全性控制项目大幅提升中药：制定了中药材及饮片中二氧化硫残留量限度标准，推进建立和完善重金属及有害元素、黄曲霉毒素、农药残留量等物质的检测限度标准；加强对重金属以及中药材的有毒有害物质的控制等。化学药：有关物质加强了杂质定性和定量测定方法的研究，实现对已知杂质和
6、未知杂质的区别控制，优化抗生素聚合物测定方法，设定合理的控制限度，整体上进一步提高有关物质项目的科学性和合理性等。生物制品：增加相关总论的要求，严格生物制品全过程质量控制要求，以保证产品的安全有效性，同时增订“生物制品生产用原辅材料质量控制通用性技术要求” ，加强源头控制，最大限度降低安全性风险等。（七）进一步加强有效性控制中药材加强了专属性鉴别和含量测定项设定。化学药适当增加了控制制剂有效性的指标，研究建立科学合理的检查方法。生物制品进一步提高效力测定检测方法的规范性，加强体外法替代体内法效力测定方法的研究与应用，保证效力测定方法的准确性和可操作性。第二部分 2015 版中国药典一部修订情况
7、2015 年版中国药典一部中药中：收载品种 2598 个，新增品种 440 个，修订品种 517 个，不收载品种 7 个。增修订内容主要有性状、鉴别、含量测定、原子吸收等项目，通过修订在药品的安全性、有效性和质量可控方面都有了很大提升。3一、安全性控制项目大幅提升2015 版药典更加注重质量标准在安全性方面的控制，进一步提升药品标准安全性保障水平，制定了中药材及饮片中二氧化硫残留量限度标准，推进建立和完善重金属及有害元素、黄曲霉毒素、农药残留量等物质的检测。（一）二氧化硫残留检测和限度规定中药材反复熏蒸很容易导致二氧化硫超标，而且在性状和颜色会发生明显的变化，不符合中药标准的要求。在 2015
8、 版中国药典 附录检定通则中规定：山药等 10 种传统习用硫磺熏蒸的中药材及其饮片，二氧化硫残留量不得过400mg/kg，其他中药材及其饮片的二氧化硫残留量不得过 150mg/kg。10 种传统习用硫磺熏蒸的中药材及其饮片：1山药品种项下规定：二氧化硫残留量照二氧化硫残留量测定法（通则2331）测定，毛山药和光山药不得过 400mg/kg；山药片不得过 10mg/kg。2天冬、天花粉、天麻、牛膝、白及、白术、白芍、党参、粉葛 9 个品种项下均规定：二氧化硫残留量照二氧化硫残留量测定法（通则 2331）测定，不得过 400mg/kg。（二）重金属及有害元素检测的限量要求除矿物、动物、海洋类外的中
9、药材，铅不得过 10mg/kg；镉不得过1mg/kg；砷不得过 5mg/kg；汞不得过 1mg/kg；铜不得过 20mg/kg；与 2010 年药典相比铅镉砷汞的限度放宽了，此限度是经过安全风险评估后制定的，更加科学合理。并在各品种项目下具体规定，要求更加具体化。对海洋类中药材如珍珠、牡蛎、蛤壳等增加了重金属和有害元素的限量要求：1珍珠、牡蛎、蛤壳 3 个品种项下均规定：重金属及有害元素照铅、镉、砷、汞铜测定法（通则 2321 原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法）测定，铅不得过 5mg/kg；镉不得过 0.3mg/kg；砷不得过 2mg/kg；汞不得过0.2mg/kg；铜不得过 20m
10、g/kg。2昆布和海带品种项下规定：金属及有害元素照铅、镉、砷、汞、铜测定法（通则 2321 原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法）测定，铅不得过 5mg/kg；镉不得过 4mg/kg；汞不得过 0.lmg/kg；铜不得过 20mg/kg。（三）农药残留的检测要求修订前中药材农药残留检测存在以下问题：监控的农药品种较食药标准存在较大差距；中药基质复杂，色谱法易出现假阳性；扩展检测品种范围，有效发现不合理农药的使用。2015 版药典中农药残留的检测项目由 9 种增加至 16种，对六六六、滴滴涕、五氯硝基苯、六氯苯、七氯、艾氏剂、氯丹等均做了具体的限量要求。人参、西洋参药材及其饮片品种项下增
11、加了 16 种有机氯农药残留限度检查要求。4人参、西洋参 2 个品种项下均规定：农药残留量照农药残留量测定法（通则 2341 有机氯类农药残留量测定法第二法）测定。含总六六六（-BHC、-BHC 、-BHC、-BHC）之和不得过 0.2mg/kg；总滴滴涕（pp-DDE、 pp-DDD、op-DDT、pp-DDT 之和）不得过 0.2mg/kg；五氯硝基苯不得过 0.lmg/kg；六氯苯不得 0.lmg/kg；七氯（七氯、环氧七氯之和）不得过0.05mg/kg；艾氏剂不得过 0.05mg/kg；氯丹（顺式氯丹、反式氯丹、氧化氯丹之和）不得过 0.lmg/kg。（四）黄曲霉毒素的控制如果食用了受
12、黄曲霉毒素污染的食品，可能会出现急性中毒，诱发黄疸，严重时可导致肝癌甚至死亡，现在食品药品的安全已经写入了国家的规划，2015版药典对食品药品的监控手段不断加强，增加了很多的检测项目。对 2015 版药典中收载的易霉变的柏子仁、莲子、使君子、地龙、蜈蚣等 14 味中药材及其饮片增加黄曲霉毒素的限度检查要求。柏子仁、莲子、使君子、槟榔、麦芽、肉豆蔻、决明子、远志、薏苡仁、大枣、地龙、蜈蚣、水蛭、全蝎 14 个品种项下均规定：黄曲霉毒素照黄曲霉毒素测定法（通则 2351）测定。本品每 1000g 含黄曲霉毒素不得过 5g，黄曲霉毒素 G2、黄曲霉毒素 G1、黄曲霉毒素 B2 和黄曲霉毒素 B1 总
13、量不得过 10g。（五）操作人员安全控制（主要针对中药鉴别展开剂中含苯的修订）现在国家药典委员会是很提倡绿色标准的，为建立绿色标准。对 67 个中成药标准鉴别项薄层色谱检测中使用的展开剂进行了研究，主要涉及展开剂中含有苯的品种，因为苯具有致癌、致残、致畸胎的危害，将苯改为危害较低的甲苯。二、进一步加强有效性质量控制2015 版中国药典一部增加了符合中药特点的专属性鉴别和含量测定项设定，检测手段多样化，注重质量控制指标的专属性、有效性，由测定指标成分逐渐向测定活性成分转变，由单一指标成分定性定量向有效成分、多指标成分质量控制转变；注重中药质量控制的整体性，采用指纹图谱和特征图谱技术来尽可能地表达
14、中药作为复杂体系的特点。保证了质量标准的有效性和可控性，为更为有效地控制药品质量提供了技术保障。（一）根据中医药特点，控制与功效相关的药味或成分根据中药材特别是中药制剂的功效，加强控制与功效相关的药味或成分，使得质量标准更好地体现中医药特色，从有效性方面更好地控制药品质量。1妇必舒阴道泡腾片其标准中“功能与主治”项下描述为：清热燥湿，杀虫止痒。主要用于妇女湿热下注证所致的白带增多、阴部瘙痒。因此，在其“含量测定”项下建立了苦参、蛇床子的相关内容，控制处方中与上述功能主治相关联的药味。（1）苦参 照高效液相色谱法（通则 0512）测定。5对照品溶液的制备 取苦参碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成
15、每 lml 含60g 的溶液，即得。供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品，研细，取约 0.5g，精密称定，加浓氨试液 0.5ml、三氯甲烷 25ml，加热回流 40 分钟，滤过，容器及残渣用三氯甲烷少量多次洗涤，滤过，滤液合并，回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，并转移至 10ml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每片含苦参以苦参碱（C 15H24N2O）计，不得少于 0.70mg。（2）蛇床子 照高效液相色谱法（通则 0512）测定。对照品溶液的制备 取蛇床子素对照品适量，精密称定，加乙
16、醇制成每 lml含 40g 的溶液，即得。供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品，研细，取约 0.45g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇 50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率 50kHz）30 分钟，取出，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每片含蛇床子以蛇床子素（C 15H16O3）计，不得少于 2.5mg。2便通胶囊便通胶囊有以下六味中药组方而成，麸炒白术、肉苁蓉、当归、桑椹、枳实、芦荟。其标准中“功能与主治”项下描述为：健脾益肾，润肠通便。用于脾
17、肾不足，肠腑气滞所致的便秘。症见：大便秘结或排便乏力，神疲气短，头晕目眩，腰膝酸软；习惯性便秘，肛周疾病见上述证候者。处方中白术具有健脾的功能，肉苁蓉滋阴益肾，芦荟润肠通便，据此，建立了芦荟、肉苁蓉的HPLC 含量测定，来控制与功效相关的药味及成分。（1）芦荟 照髙效液相色谱法（通则 0512）测定。对照品溶液的制备 取芦荟苷对照品适量，精密称定，加 20%甲醇制成每lml 含 50g 的溶液，即得。供试品溶液的制备 取装量差异下的本品内容物适量，研细，取约 0.2g，精密称定置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率 40kHz）30 分钟，放冷，再称定重
18、量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液 5ml，置 25ml 量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 20l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每粒含芦荟以芦荟苷（C 21H22O9）计，不得少于 8.0mg。6（2）肉苁蓉 照高效液色谱法（通则 0512）测定。对照品溶液的制备 取松果菊苷对照品适量，精密称定，加 50%甲醇制成每lml 含 40g 的溶液，即得。供试品溶液的制备 取装量差异下的本品内容物适量，研细，取约 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 50%甲醇 50ml，称定重量，超声处理（功率 300W，频率 4
19、0kHz）40 分钟，放冷，再称定重量，用 50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液 510l、供试品溶液 10l，注人液相色谱仪，测定，即得。本品每粒含肉苁蓉以松果菊苷（C 35H46O20）计，不得少于 0.13mg。（二）注重中药质量控制的整体性2015 版中国药典一部注重中药质量控制的整体性。由单一指标成分定性定量向有效成分、多个活性成分质量控制转变。在部分中成药、中药材和中药提取物质量标准中采用指纹图谱或特征图谱技术来控制药品质量，共在 29 个标准中新增加指纹图谱或特征图谱控制要求。采用指纹图谱和特征图谱技术来尽可能地表达中药作为复杂体系
20、的特点。1沉香沉香药材标准中采用特征图谱控制苯乙烯色酮类成分，通过相似度软件控制沉香的质量。特征图谱 照高效液相色谱法（通则 0512）测定。参照物溶液的制备 取沉香对照药材约 0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇 10ml，称定重量，超声处理（功率 250W，频率 40kHz）1 小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液。另取沉香四醇对照品适量，精密称定，加乙醇制成每 lml 含 60g 的溶液，作为对照品参照物溶液。供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约 0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇 10m
21、l，称定重量，浸泡 0.5 小时，超声处理（功率250W，频率 40kHz）1 小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各 10l，注入液相色谱仪，测定，即得。供试品特征图谱中应呈现 6 个特征峰，并应与对照葯材参照物色谱峰中的6 个特征峰相对应，其中峰 1 应与对照品参照物峰保留时间相一致。72心脑健片和心脑健胶囊在心脑健片和心脑健胶囊的标准中，建立了儿茶素类成分的特征图谱要求。心脑健片的特征图谱 照高效液相色谱法（通则 0512）测定。参照物溶液的制备 取咖啡因对照品、表儿茶素对照品、没食子酸对照品、
22、表儿茶素没食子酸酯对照品和表没食子儿茶素没食子酸酯对照品适量，精密称定，分别加 25%甲醇制成每 lml 含咖啡因 14g、表儿茶素 68g、没食子酸19g、表儿茶素没食子酸酯 0.14mg，和表没食子儿茶素没食子酸酯 0.85mg 的溶液，即得。供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品，研细，混匀，取约 0.1g，精密称定，置 50ml 量瓶中，加 25%甲醇适量，超声处理（功率 160W，频率40kHz）30 分钟，放冷，加 25%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各 20l，注入液相色谱仪，测定，即得。供试品特征图谱中应呈现 7 个特征峰，其
23、中 5 个峰应分别与相应的参照物峰保留时间一致，以表没食子儿茶素没食子酸酯参照物峰相应的峰为 S 峰，计算特征峰 2，6 的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的10%之内，规定值为：0.42（峰 2） 、1.00（峰 5） 、1.24（峰 6） 。83六味地黄丸采用梯度洗脱的方式，用高效液相色谱法同时测定了多个活性成分马钱苷、莫诺苷、丹皮酚的含量。含量测定 照高效液相色谱法（通则 0512）测定。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相 A，以 0.3%磷酸溶液为流动相 B，按下表中的规定进行梯度洗脱；莫诺苷和马钱苷检测波长为 240nm，丹皮酚检测波长为
24、274nm；柱温为 40。理论板数按莫诺苷、马钱苷峰计算均应不低于 4000。对照品溶液的制备 取莫诺苷对照品、马钱苷对照品和丹皮酚对照品适量，精密称定，加 50%甲醇制成每 lml 中含莫诺苷与马钱苷各 20g、含丹皮酚 45g9的混合溶液，即得。供试品溶液的制备 取水丸，研细，取约 0.5g，或取水蜜丸，研细，取约0.7g，精密称定；或取小蜜丸或重量差异项下的大蜜丸，剪碎，取约 lg，精密称定。置具塞锥形瓶中，精密加入 50%甲醇 25ml，密塞，称定重量，加热回流1 小时，放冷，再称定重量，用 50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶
25、液各 10l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品含酒萸肉以莫诺苷（C l7H26O11）和马钱苷（C l7H26O10）的总量计，水丸每 lg 不得少于 0.9mg；水蜜丸每 lg 不得少于 0.75mg；小蜜丸每 lg 不得少于0.50mg；大蜜丸每丸不得少于 4.5mg；含牡丹皮以丹皮酚（C 9H10O3）计，水丸每 lg 不得少于 1.3mg；水蜜丸每 lg 不得少于 1.05mg；小蜜丸每 lg 不得少于0.70mg；大蜜丸每丸不得少于 6.3mg。（三）增加符合中药特点的专属性成分的质量控制2015 版中国药典一部增加符合中药特点的专属性鉴别和含量测定，保证质量标准的可控性。如采用液相
26、-质谱串联技术建立专属性的特征图谱，可有效区分阿胶、黄明胶等不同胶类药材等。1阿胶等不同胶类药材不同的胶类药材有不同的来源，如阿胶的法定来源为驴皮；龟甲胶的法定来源为龟甲壳；鹿角胶的法定来源为鹿角；黄明胶的法定来源为牛皮；新阿胶的法定来源为猪皮。为确定阿胶是否是法定来源，采用液相-质谱串联技术建立了专属的肽类二级质谱特征图谱鉴别方法。阿胶的鉴别 取本品粉末 0.lg，加 1%碳酸氢铵溶液 50ml，超声处理 30 分钟，用微孔滤膜滤过，取续滤液 l00l，置微量进样瓶中，加胰蛋白酶溶液l0l，取序列分析用胰蛋白酶，加 1%碳酸氢铵溶液制成每 lml 中含 lmg 的溶液，临用时配制） ，摇匀，
27、37恒温酶解 12 小时，作为供试品溶液。另取阿胶对照药材 0.lg，同法制成对照药材溶液。照高效液相色谱 -质谱法（通则 0512 和通则 0431）试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径为 2.1mm） ；以乙腈为流动相 A，以 0.1%甲酸溶液为流动相 B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟 0.3ml。采用质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI +） ，进行多反应监测（MRM） ，选择质荷比（m/z）539.8（双电荷） 612.4 和 m/z 539.8（双电荷） 923.8 作为检测离子对。取阿胶对照药材溶液，进样按上述检测离子对测定的 MRM 色谱峰的信噪比均应大于
28、 3:1。10吸取供试品溶液 5L，注入高效液相色谱- 质谱联用仪，测定。以质荷比（m/z）539.8 （双电荷） 612.4 和（m/z）539.8（双电荷） 923.8 离子对提取的供试品离子流色谱中，应同时呈现与对照药材色谱保留时间一致的色谱峰。与黄明胶等区别开来。2颠茄片和颠茄酊颠茄片和颠茄酊标准中，建立了特征的硫酸天仙子胺的鉴别和含量测定方法，同时增加特征谱图控制，不再只以阿托品为指标控制质量，从而增加了标准对质量控制的专属性，防止人为造假。（1）颠茄片含量测定项下：硫酸天仙子胺 照高效液相色谱法（通则 0512）测定。对照品溶液的制备 取硫酸天仙子胺对照品适量，精密称定，加 50%
29、甲醇制成每 lml 中含 0.2mg 的溶液，即得。供试品溶液的制备 取本品 100 片，精密称定，研细，精密称取约相当于50 片的量，置具塞锥形瓶中，精密加入 50%甲醇 25ml，称定重量，超声处理（功率 400W，频率 58kHz）15 分钟，放冷，再称定重量，用 50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每片含生物碱以硫酸天仙子胺（C 34H46N2O6H2SO4）计，应为0.0700.120mg。（2）颠茄片特征图谱项下：照高效液相色谱法（通则 0512）测定。供试品特征图谱中应有 6
30、个特征峰，与参照物峰相应的峰为 S 峰，计算各特征峰与 S 峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的5%之内。规定值为 0.897（峰 1） 、0.965（峰 2） 、1.000 峰 3（S ）、1.354（峰 4） 、1.473（峰 5） 、1.528（峰 6） 。计算峰 1、峰 5 与 S 峰的相对峰面积，峰 1 的相对峰面积不得小于 0.30，峰 5 的相对峰面积不得小于 0.10。3枣仁安神胶囊枣仁安神胶囊标准中建立了“丹参、五味子”的特征图谱要求，同时增加11丹参、五味子、酸枣仁的多指标成分的含量测定，从而增强标准的可控性。（1）枣仁安神胶囊特征图谱项下：照高效液相色谱法（通则
31、0512）测定。供试品色谱中应呈现 8 个与对照特征图谱相对应的色谱峰，保留时间应与参照物色谱中的 8 个主色谱峰保留时间相对应；其中 1、7 号峰保留时间应与五味子醇甲、丹参酮 IIA 对照品色谱峰保留时间相对应。（2）枣仁安神胶囊含量测定项下规定：炒酸枣仁 照高效液相色谱法（通则 0512）测定。对照品溶液的制备 取斯皮诺素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 lml含 25g 的溶液，即得。供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物，混匀，研细，取约 lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 70%甲醇 50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率 500W，频率 40kHz）30 分钟（必
32、要时需摇散药粉） ，放冷，再称定重量，用 70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每粒含炒酸枣仁以斯皮诺素（C 28H32O15）计，不得少于 0.40mg。丹参、醋五味子 照髙效液相色谱法（通则 0512）测定。对照品溶液的制备 取五味子醇甲对照品、丹参酮 IIA 对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 lml 含五味子醇甲 30g、丹参酮 IIA 45g 的混合溶液，即得。供试品溶液的制备 取含量测定炒酸枣仁项下的供试品溶液，即得。测定法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l，注入液相色谱仪，测
33、定，即得。12本品每粒含丹参以丹参酮 IIA（C 19H18O3）计，不得少于 0.24mg；含醋五味子以五味子醇甲（C 24H32O7）计，不得少于 0.30mg。4川贝母采用 PCR 检测方法对川贝母进行专属性鉴别检查，保证质量标准的可控性。川贝母的鉴别项下规定：聚合酶链式反应限制性内切酶长度多态性方法。模板 DNA 提取 取本品 0.lg，依次用 75%乙醇 1ml、灭菌超纯水 lml 清洗，吸干表面水分，置乳钵中研磨成极细粉。取 20mg，置 1.5ml 离心管中，用新型广谱植物基因组 DNA 快速提取试剂盒提取 DNA，取洗脱液，作为供试品溶液，置 4冰箱中备用。另取川贝母对照药材
34、0.lg，同法制成对照药材模板 DNA 溶液。PCR-RFLP 反应 鉴别引物：5CGTAACAAGGTTT-CCGTAGGTGAA3 和5GCTACGTTCTTCATCGAT3。PCR 反应体系：在 200l 离心管中进行，反应总体积为 30l，反应体系包括 10PCR 缓冲液 3l，二氧化镁（25mmol/L）2.4l， dNTP（10mmol/L）0.6l ，鉴别引物（30mol/L ）各 0.5l，高保真 Taq DAN 聚合酶（ 5U/l）0.2l ，模板 ll，无菌超纯水 21.8l。将离心管置 PCR 仪，PCR 反应参数：95预变性 4 分钟，循环反应 30 次（ 9530 秒
35、，555830秒，7230 秒） ，72延伸 5 分钟。取 PCR 反应液，置 500l 离心管中，进行酶切反应，反应总体积为 20l，反应体系包括 10酶切缓冲液 2l，PCR 反应液 6l， SmaI（10U/l ）0.5l ，无菌超纯水 11.5l，酶切反应在 30水浴反应 2小时。另取无菌超纯水，同法上述 PCR-RFLP 反应操作，作为空白对照。三、新方法、新技术的推广和应用2015 版中国药典一部注重强化检测手段，提高检测技术的专属性，扩大先进的、成熟的现代分析技术以及新方法的推广和应用。（一）一测多评法目前中药的特点是多成分、多功效，对应的就是多指标成分的检测，但是存在以下问题，
36、有些对照品难以获得，而且检测成本较高，这样就有了一测多评法的产生，就是利用中药有效成分内在函数关系和比例关系，只测定一个成分（对照品可得到者）实现多个成分的同步测定。2015 年药典中推广应用此法。1丹参丹参含量测定项下：丹参酮类 照髙效液相色谱法（通则 0512）测定。对照品溶液的制备 取丹参酮 IIA 对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每 l0ml 含 20g 的溶液，即得。供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约 0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率 140W，频率1342kHz）30 分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足
37、减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l，注入液相色谱仪，测定。以丹参酮 IIA 对照品为参照，以其相应的峰为 S 峰，计算隐丹参酮、丹参酮 I 的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的5%范围之内。相对保留时间及校正因子见下表：以丹参酮 IIA 的峰面积为对照，分别乘以校正因子，计算隐丹参酮、丹参酮 I、丹参酮 IIA 的含量。本品按干燥品计算，含丹参酮 IIA（C 19H18O3） 、隐丹参酮（ C19H20O3）和丹参酮 I（C 18H12O3）的总量不得少于 0.25%。2功劳木功劳木含量测定项下：照高效液相色谱法（通则 0512）
38、测定。对照提取物溶液的制备 取功劳木对照提取物（已标示非洲防己碱、药根碱、巴马汀、小檗碱的含量）适量，精密称定，加乙腈-水（25：75）混合溶液制成每 lml 含 0.4mg 的溶液，即得。供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约 0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇（1：100）混合溶液 50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率 500W，频率 40kHz）45 分钟，取出，放冷，再称定重量，用盐酸- 甲醇（ 1：100）混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照提取物溶液与供试品溶液各 1020l，注入液相色谱仪，测定。计算非洲防己碱
39、、药根碱、巴马汀和小檗碱的含量。本品按干燥品计算，含非洲防己碱（C 20H20NO4） 、药根碱（C 20H20NO4） 、奥巴汀（C 21H21NO4） 、小檗碱（C 20H17NO4）的总量，不得少于 1.5%。（二）中药材的 DNA 分子鉴定中药材 DNA 条形码分子鉴定法指导原则中指出：本法用于中药材（包括药材及部分饮片）及基原物种的鉴定。DNA 条形码分子鉴定法是利用基因组中一段公认的、相对较短的 DNA 序列来进行物种鉴定的一种分子生物学技术，是传统形态鉴别方法的有效补充。由于不同物种的 DNA 序列是由腺嘌呤（A） 、鸟嘌呤（G ） 、胞嘧啶（C ） 、胸腺14嘧啶（T）四种碱基
40、以不同顺序排列组成，因此对某一特定 DNA 片段序列进行分析即能够区分不同物种。中药材 DNA 条形码分子鉴定通常是以核糖体 DNA 第二内部转录间隔区（ITS2）为主体条形码序列鉴定中药材的方法体系，其中植物类中药材选用ITS2/ITS 为主体序列，以叶绿体外 psbA-trnH 为辅助序列，动物类中药材采用细胞色素 C 氧化酶亚基 I（COI）为主体序列，ITS2 为辅助序列。鉴别的基本原则：简单、精确，有明确的判断标准；每个中药材物种实现以 DNA 条形码进行鉴定。DNA 分子技术是一个方法学的创新，我们以后只要手拿一个 DNA 条形码测定仪，扫描一下，通过数据库的比对，就能快速的完成鉴
41、定工作。（三）电感耦合等离子体质谱法电感耦合等离子体质谱法是以等离子体为离子源的一种质谱型元素分析方法。主要用于进行多种元素的同时测定，并可与其他色谱分离技术联用，进行元素形态及其价态分析。样品由载气（氩气）引入雾化系统进行雾化后，以气溶胶形式进入等离子体中心区，在高温和惰性气氛中被去溶剂化、汽化解离和电离，转化成带正电荷的正离子，经离子采集系统进人质量分析器，质量分析器根据质荷比进行分离，根据元素质谱峰强度测定样品中相应元素的含量。本法灵敏度高，适用于各类药品从痕量到微量的元素分析，尤其是痕量重金属元素的测定。（四）X 射线衍射法X 射线衍射法（XRD）是一种利用单色 X 射线光束照射到被测
42、样品上，检测样品的三维立体结构（含手性、晶型、结晶水或结晶溶剂）或成分（主成分及杂质成分、晶型种类及含量）的分析方法。单晶 X 射线衍射法（SXRD）的测检对象为一颗晶体，粉末 X 射线衍射法（PXRD）的测检对象为众多随机取向的微小颗粒，它们可以是晶体或非晶体等固体样品。粉末 X 射线衍射法用于样品的定性或定量的物相分析。每种化学物质，当其化学成分与固体物质状态（晶型）确定时，应该具有独立的特征 X 射线衍射图谱和教据，衍射图谱信息包括衍射峰数量、衍射峰位置、衍射峰强度、衍射峰几何拓扑等。粉末 X 射线衍射法适用于对晶态物质或非晶态物质的定性鉴别与定量分析。常用于固体物质的结晶度定性检查、多晶型种类、晶型纯度等分析。粉末 X 射线衍射实验中，通常使用 Cu 靶为阳极靶材料。每种晶型物质应具有确定的特征粉末 X 射线衍射图谱。当被测定样品化学结构相同，但衍射峰的数量和位置、绝对强度值或衍射峰形几何拓扑间存在差别时，即表明该化合物可能存在多晶型现象。15
