1、MicroCal ITC 系统 培训课程 数据分析 2 / 29-0301-14 AA 目标 演示如何检查数据 演示如何扣减参照热 演 示如何用 1:1结合模型拟合数据 演 示如何用复杂的结合模型拟合数据和竞争实验数据拟合 理 解从 ITC 数据中如何测定 G, H 和 TS 3 / 29-0301-14 AA 数据分析 样品准备 实验 数据分析 实验优化 数据分析 步骤 1. 导 入数据 2. 检查 数 据 3. 调节浓度，基线，热量稀释 4. 模型拟合 5. 最终图片 4 / 29-0301-14 AA 用 Origin 软 件分析数据 1. Hide the text box 2. Re
2、ad Data 5 / 29-0301-14 AA 选择滴定和对照数据 1. 选 择滴定和对照数据 2. 点击 Add File(s) 3. 点击 OK 6 / 29-0301-14 AA 查看原始数据 点击 Raw data 7 / 29-0301-14 AA 查看原始数据 基线位置 ok 对照的热量很小且可重复 层控制 8 / 29-0301-14 AA MicroCal Auto-iTC200 软件 层内容 可来回移动数据 9 / 29-0301-14 AA 查看每次滴定的热量 激活 文件名 后单击 10 / 29-0301-14 AA 查看 2nd 滴定的热量 第 2滴的热量 11 /
3、 29-0301-14 AA 返回原始数据 点击 RawITC 12 / 29-0301-14 AA 层控制 从层中移除数据 13 / 29-0301-14 AA 重设刻度范围 重设刻度范围 14 / 29-0301-14 AA 然后 激活文件名然后点击 15 / 29-0301-14 AA 确定 平均参照热 1(2) 选中 NDH 列 -排除第 1个数据点 点击 Statistics on columns 16 / 29-0301-14 AA 确定平均参照热 2(2) 平均参照热 17 / 29-0301-14 AA 查 看校正后的结合热 点 击 DeltaH 18 / 29-0301-14
4、 AA 结合热 用层控制移除参照数据 19 / 29-0301-14 AA 移除第 1个数据点并扣除参照热 1. 移 除第 1个数据点 2. 使用 Simple Math扣减平均参照热 20 / 29-0301-14 AA 拟合数据 1. 拟 合到 one set of sites 模型 2. 反 复多次以提高拟合 3. 查看 Chi2 21 / 29-0301-14 AA 拟合后数据 N = 0.86 KD = 1/KA = 16 nM H = -14.66 kcals/mol 22 / 29-0301-14 AA 额 外的参考实验和实验优化 参照热小，因此绝对准确的测量有难度 不能苛求对照
5、实验中的稀释热和滴定实验中的完全吻合 23 / 29-0301-14 AA one set of sites模型 24 / 29-0301-14 AA 记 录数字并重新拟合 用于不完美的对照和实验优化 Chi2 25 / 29-0301-14 AA 拟 合有多好 ? Dependency 值很接近 1表明强烈的交互相关性和过度拟合 26 / 29-0301-14 AA 用复杂模型时 dependency值十分重要 The wrong model 27 / 29-0301-14 AA 选择模型 0 ,0 0 ,5 1 ,0 1 ,5 2 ,0 2 ,5-2 ,0 00 ,0 02 ,0 04 ,
6、0 0-0 ,0 6-0 ,0 4-0 ,0 20 ,0 00 ,0 20 ,0 40 ,0 60 ,0 80 ,1 00 10 20 30 40 50 60T im e ( m in)cal/secM ol ar R atioKCal/Mole ofInjectant0 ,0 0 ,5 1 ,0 1 ,5 2 ,0 2 ,5-6 ,0 0-4 ,0 0-2 ,0 00 ,0 02 ,0 04 ,0 06 ,0 0-0 ,1 5-0 ,1 0-0 ,0 50 ,0 00 ,0 50 ,1 00 ,1 50 ,2 00 10 20 30 40 50 60T im e ( m in)cal/sec
7、M ol ar R atioKCal/Mole ofInjectant0 .0 0 1 6 .6 7 3 3 .3 3 5 0 .0 0 6 6 .6 71 3 .5 01 4 .0 01 4 .5 01 5 .0 01 5 .5 01 6 .0 01 6 .5 0T im e ( m in)cal/sec0 .0 0 8 .3 3 1 6 .6 7 2 5 .0 0 3 3 .3 3 4 1 .6 7 5 0 .0 02 .4 42 .4 62 .4 82 .5 02 .5 2T im e ( m in)cal/sec0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0 3
8、.5 4 .0-4-20-3 0-2 0-1 00-1 0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110T im e ( m in)cal/secK1 : o n e se t o f si t e sM o d e l: O n e S it e sC h i 2 = 5 8 0 8 . 1 7N 0 . 4 8 3 9 0 . 0 5 5 1K 2781 3 5 5 . 4 H - 8 1 2 6 1 1 0 3 S - 1 1 . 4 9S u b t r a ct e d f ir st d a t a p o in tS u b t r a ct e d
9、K b u f f r e f e r e n ceA d d e d 2 7 0 ca lo r ie s t o D e lt a H t o b r in g f in a l p o in t scl o se r t o z e r oM ol ar R at iokcal/mole ofinjectant首选 ”One set of sites 模型 除非其他模型明显适用 28 / 29-0301-14 AA 开始手工拟合 : 按经验猜测 输入您自己的初始值 查 看猜想值的拟合 29 / 29-0301-14 AA 弱结合 固定 N-低 C 勾掉 vary 以固定 N 30 / 29-0301-14 AA 竞争性实验
