1、毒素类物质银杏 酸 060420127 黄娟,银杏酸的简介,银杏酸的分布 银杏酸属于漆树酸类物质，存在于银杏树的叶、果实和外种皮中,其中外种皮中的含量最高1。,银杏酸的作用 银杏酸具有抗氧化、清除自由基和抗炎作用。 Itokawa等2报道了它的抗肿瘤活性； Irie等3认为银杏酸可抑制与肥胖症和高血脂症有关的一种关键酶甘油三酯合成酶GPDH的活性，从而可以预防由此引起的一系列疾病。 此外银杏酸还具有强烈的杀虫、抗菌、杀菌、抗病毒等活性。银杏酸这些独特的药理活性和毒性使它成为人们研究的热点之一。,银杏酸的结构,银杏酸的结构是在水杨酸C6位上接一含1319碳,双键数03长碳链，故银杏酸为一同系混合
2、物。 其侧链分别为C13H27, C15H29，C15H31，C17H33和C17H31等的银杏酸，可分别以(C13:0),(C15:1),(C15:0),(C17:1)和(C17:2)等符号简单表示2。,银杏酸的结构式4,银杏酸的物理性质,性状 纯品银杏酸为无色油状或粉状，酸性物质，在石油醚中可析出针状结晶，熔点4142。银杏酸具有免疫毒性作用(会引起漆毒样皮炎)，被认为是毒性成分，对人类的健康有潜在的危害。 紫外吸收 银杏酸在紫外光照射下会产生强烈的淡蓝色荧光。,溶解性 银杏酸的溶解性与所连的R基有关，水杨酸C6上接长碳链后极性急剧下降，因此银杏酸属于脂溶性物质。它易溶于石油醚、正己烷等非
3、极性溶剂，难溶于水、甲醇、乙醇等极性溶剂中。,银杏酸的化学性质,脱羧反应 由银杏酸的结构式可以知道其苯环上相连的羧基会发生脱羧反应。文献5 指出银杏酸在200 左右会脱羧, 对热不稳定。,酯化和甲基化反应 用少量的CH2N 2 处理, 银杏酸的羧基就会发生选择性酯化。 要使银杏酸酚羟基发生选择性甲基化, 则需要用CH2N 2 与浸泡在含20%CH3OH 的乙醚中的银杏酸进行长时间的反应才可以6。,酸性 由于银杏酸的结构中有酚基和羧基存在，因此具有一定的酸性，在某些分离方法中就可以利用其酸性将它从混合物中提取出来。 Gellerm an6就利用其酸性, 经皂化反应将它从原始萃取物中分离出来, 以
4、便进行下一步分离精制。另外还可以使用不同酸碱度的洗脱液将它和其他物质先后从柱上洗脱下来。,银杏酸的光谱性质,其分子结构决定了其光谱特性。据Tym an 报道7银杏酸的最大紫外吸收出现在308nm 左右。 银杏酸的红外谱图中较突出的是1650cm - 1处的羰基伸缩振动峰。,银杏酸的提取方法,溶剂浸提法银杏酸为脂溶性物质，通常使用石油醚8 、正己烷、氯仿等有机溶剂浸提。除常规的溶剂萃取方式外，为了尽量提高萃取的效率，同时还可以进行酶降解、微波及超声波预处理9等辅助萃取方式。,超临界流体法它利用超临界流体作为萃取剂从液体和固体中提取某种成份，以达到分离或提纯的目的。沈刚等10，报道了一种用改性超临
5、界二氧化碳萃取和离线的反相高效液相色谱分析银杏叶提取物中银杏酸含量的方法。,银杏酸的分离纯化方法,硅胶柱层析法 硅胶柱层析即采用硅胶为介质，利用样品中各组分与硅胶间吸附力的不同，再通过调节洗脱液的极性，使目标组分被洗脱下来从而与杂质分离，它是分离银杏酸最常用的方法912。银杏酸所采用的洗脱液主要有石油醚、石油醚-乙酸乙酯等。,HPLC纯化法van Beek等13利用普通反相柱和包被了银离子的离子交换柱双柱串联的方法, 以甲醇:乙酸（99:1）作为流动相制备得到六种银杏酸单体。,银杏酸的分析测试方法,HPLC分析1418液相色谱法是目前检测银杏酸最常用的方法。,GC分析19 因为银杏酸在GC测定
6、前需要一个复杂的预净化-衍生化过程且GC分析的灵敏度不好，在银杏叶活性物质的测定中使用较少。,分光光度法分析 分光光度法具有仪器、试剂耗费低，测定速度快等优势。仰榴青等20也提出了以分光光度法测定银杏酸的操作，但其实际使用不如HPLC法方便。,TLC定性检测 TLC具有设备简单、操作方便、分离速度快及测试成本低等特点。李英华等21用硅胶G薄层板对银杏酸进行检测。以环己烷:乙酸乙酯:醋酸（70:30:1）为展开剂，展开8 cm后，置于薄层色谱扫描仪扫描（254 nm）,银杏酸显蓝色荧光，其中银杏酸Rf为0.65。它也是检测银杏酸的常用方法。,银杏酸提取和分离纯化工艺,提取工艺 称取一定量的银杏叶
7、，以石油醚为溶剂在80下进行索氏回流抽提。抽提液减压浓缩至膏状，得粗提物样品。,分离纯化工艺 粗提物样品加少量石油醚溶解，过硅胶柱层析，以石油醚乙酸乙酯（9：1）溶液洗脱，直到洗脱液在254nm处不显荧光。洗脱液浓缩至膏状物，加入甲醇室温下超声波萃取。甲醇萃取液添加适量的水除杂，离心，取上清液。上清液再经过硅胶柱层析净化，以石油醚乙醚乙酸（89：11：1）溶液洗脱，最后得到较纯的银杏酸。,银杏酸的总工艺流程,石油醚回流 硅胶柱初净化抽提甲醇超声波萃取加水除杂离心硅胶柱再净化,银杏叶,粗提物,硅胶柱洗脱液,甲醇萃取液,上清液,银杏酸,参考文献,1 Jaggy H，et al . Che mist
8、ry and biology of al kyphenols from Ginkgo biloba L. Pharmazie,1997,52(10) 735 2 Itokawa H，Totsuka N，Nakahara K，Takeya K， Lepoittevin J P，Asakawa YChemPharmBul1， 1987，35(7)：30163020 3 Irie J，Murata M，Homma S.Biosci.Biotech.Biochem，1996，6O(2)：240243 4 Gellerman JL , Schlenk H. Methods for iso lation
9、and determr nation of anacardic acids J . A naly Chem, 1968, 40 (4) 739-743. 5 桑田恒太郎, 小西满月男. 卡秀油中漆树酸的分离精制方法P . JP82217720, 1996208227.,6 仰榴青，吴向阳，陈钧,袁新华，倪慧艳.银杏酸的分光光 度法测定.分析化学研究简报（Chinese Journal of Analytical Chemsitry）2004年5月第5期第32卷 7Tyman JHP, Tychopoulo s V , Chan P. Q uantitative analysis of natu
10、ral cashew nut2shell liquid (A nacard ium occid entale) by h igh2perfo rmance liquid ch romatography J . J Ch ro2 matogr, 1984, 3031372150. 8吴向阳，仰榴青，陈钧，等. 银杏酸单体制备及其抗菌活性. 林产化学与工业，2003，23（4）：17-21,9张小利 欧阳臻 杨克迪 陈钧，银杏酸的分离制备及HPLC分析.中药材.2003. 26（8）.557559 10 沈刚，姚渭溪. 超临界流体萃取和高效液相色谱法测定银杏酸. 分析化学，2000，28（8）：9
11、85-988 11 赵月珍，陈正收，徐瑾等，银杏酸得的分离与银杏叶制剂中银杏酸的含量测定.中医药导报. 2006 . 12（7）：8687 12 张鉴，王兰，袁成凌等. RP-HPLC法制备银杏酸的研究. 中草药.2004.35（11）；12381239,13Teris A van Beek, Wintermans MartijnS. Preparative isolation and dual column high-performance liquid chromatography of ginkgolic acids from Ginkgo biloba. Journal of Chro
12、matography A，2001，930（1-2）：109-117. 14 张迪清，何照范.银杏叶资源化学研究.北京：中国轻工业出版社，1999，50 15 王颍，盛龙生，楼凤昌，张正行，安登魁.银杏总酸中有关成分的LC/DAD/API/MS分析.中国药科大学学报，2001，32（5）：371374 16 倪澜荪，林雁飞.银杏酸1标准品的研究.湖北检验检疫，2002年第2期 17魏秀莉，唐翠，印春华.银杏叶提取物中银杏酸的HPLC测定.中国医药工业杂志 2003，24（6）,18 Lloyd HA，Denny C，Krishna GA simple liquid chromatographi
13、c method for analysis and isolation of the unsaturated components of anacardic acidsJ Liq Chromatogr，l980，3(10)：1497 19 Gellerman JI Schlenk HMethods for isolation and determination of anacardic acidsAnal Chem，l968，40(4)：739. 20仰榴青，吴向阳，陈钧，等. 银杏酸的分光光度法测定. 分析化学，2004，32（5）：661-664. 21李英华，张立国，倪力军. 薄层分析法快速分析银杏酸的方法研究. 华东理工大学学报（自然科学版），2005，31（3）：403-405.,22 Lloyd HA，Denny C，Krishna GA simple liquid chromatographic method for analysis and isolation of the unsaturated components of anacardic acidsJ Liq Chromatogr，l980，3(10)：1497.,谢谢！,
