1、Folch 法提取脂质1. 组织称重。2. 剪碎组织,按照 1g 组织加入 20ml 溶剂比例加入氯仿和甲醇(2:1)混合溶液。混匀 15-20min 后 1500-2000r/min 离心 5min收集溶液。3. 溶液加入 0.2 体积的水(20ml 溶液加 4ml 水)或 0.9%NaCl 溶液清洗,涡旋几秒钟,以 2000rpm 离心 10min 得到两相液面。吸取上清液,用于分析检测神经节苷脂类或小的极性分子。如果有必要(为移除标记分子) ,用甲醇和水(1:1)清洗两相液交界面 1至 2 次,注意不要冲洗到下层液体内。4. 收集的下层液即氯仿层含有脂质,用 N2吹干氯仿即得脂质。文献采
2、用正相液相色谱法和大气压化学电离质谱分析测定神经酰胺时说按 Folch 法,以氯仿和甲醇(2:1,1:1,1:2)三个不同比例来提取脂质,每种混合溶液提取 2 小时。Bligh 和 Dyer 的方法(也是我们之前用的方法)1. 皮肤组织称重,胰酶 37消化 1h,用镊子分离表皮和真皮,弃去真皮。2. 剪碎表皮组织,加入 3.75ml 氯仿和甲醇(1:2)混合溶液。匀浆15min。加氯仿 1.25ml,混匀 30s。再加水 1.25ml,混匀 30s。3. 1500r/min 离心 15min,吸取下层氯仿层,收集在棕色小瓶中,N2挥干溶剂,即得总脂质。注:本次试验 Forch 法取两只正常组的雌雄鼠制备两个样,B&D 法也是取两只正常组的雌雄鼠制备两个样。预先准备好需要的溶剂、移液管、棕色小瓶和离心管(离心管最好用玻璃的) 。