1、水生生态系统藻类毒性试验,不常用词解释,半对数坐标纸:横坐标或纵坐标轴是按照相等的指数变化来增加的，（距离来说：如果每1cm代表10的1次方增加，则坐标轴刻度依次为0，10，100，1000，10000。） 内插法:一般是指数学上的直线内插，利用等比关系，是用一组已知的未知函数的自变量的值和与它对应的函数值来求一种求未知函数其它值的近似计算方法，是一种未知函数，数值逼近求法 。,实验原理,生物测试能够弥补化学和物理的检验的不足，目前水生生态系统藻类毒理试验已经成为许多国家对环境质量监测的标准方法之一而得到广泛应用，影响藻类生长的主要因子包括阳光、二氧化碳、温度、PH及氮、磷、微量元素等营养成分
2、。水环境中的这些生态因子的变化会刺激或抑制藻类的生长，而导致水体初级生产力的变化。如果外来有毒有害化学物质进入水体，藻类的生命活动就会受到影响，生物量也随之发生变化。,试验方法,1 水样的加工制备利用滤膜在减压条件下过滤，以除去水样中原有的藻类生物，在108kPa和121oC之下持续30min，高压处理水样，杀灭水样中所有生物，以便测定水样中的全部营养。 2 藻类培养基的配制分别取常量营养盐的每一种化合物储备液1mL和微量元素-EDTA的混合液1mL加入去离子水中，定容至1000mL得标准培养基，高压灭菌后分装三角瓶中备用。 3 藻类预培养将事先准备的藻种移种至盛有培养基的三角瓶中，在试验确定
3、的温度和光强条件以及无菌条件下，培养2-3周，使藻类达到同步生长阶段。用离心机离心收集培养物中的藻细胞，去除上清液，在沉积的藻细胞中加入10mLNaHCO3溶液（15g/L）使藻细胞悬浮于此溶液中，再次离心，悬浮，再离心，悬浮，经此处理的藻悬浮物作为试验藻接中原。,4 预备试验目的在于探明毒物对藻类影响的半数有效浓度（EC50）的范围，为正式试验打基础。 5 正式试验(1) 试验浓度的选择按等对数间距取5-7个毒物浓度，其中必须包括EC50并在此浓度上下至少各设2个浓度，另设一个不含毒物的空白对照。各浓度组均设3个平行样。 （2）种的制备和接种量取上述达到同步生长的藻类培养液充分摇匀，取样计数
4、细胞密度后，用吸管转移相应体积的细胞悬浮液到受试水样中。 （3）生物量的测定测定藻类生长的指标有多种，要考虑所有相关的环境因素以及自己试验的目的和条件来选择指标,常用的测试指标有：干重、光密度、细胞计数、叶绿素a含量的测定（减压过滤一定体积的藻类培养液到玻璃纤维滤片上，加入1mL的MgCO3悬浮液后将水抽滤干净，把滤片放到一个组织研磨管内的底部，加入2mL的90%的丙酮，弱光下淹没1-2min，再用5mL的90%的丙酮把残留的样品洗入15mL的有螺旋盖的离心管中，离心（2000g）1-5min，静置于暗处1-2h，是色素充分被抽提，离心，将上清液在分光光度计上，用1cm的比色皿分别读取750、663、645和630波长处的吸收率，并以90%的丙酮作对照校正吸光度，依据P298的公式计算得叶绿素的浓度。）,实验结果与报告,计算EC50设各组平行样品生物量的平均值分别为V空白,，V1，V2，V3，V4,，Vn，在半对数坐标纸上以受试毒物浓度为纵坐标y，以（ V空白- Vn ）/ V空白为横坐标x，用内插法计算生物量下降50%的毒物浓度，即相应时间段的EC50。,
