1、1. 传代前准备：将移液器，墙头，移液管，移液枪，酒精灯等放入超净台中，超净台使用前紫外灯照射 20-30 分钟。戴手套，并用酒精消毒。将培养基，胰酶（25ml 分装） ，PBS 从 4取出，放入 37水浴中预热，取出用 75%酒精喷涂瓶体，并用脱脂棉擦净后放入超净台中。2. 消化：将培养瓶从培养箱中取出，放入超净台中。将 PBS 瓶口用火焰消毒，并用镊子取下瓶塞。将培养瓶的瓶口火焰消毒，后用镊子旋开，将培养液倒入废液筒中，加入适量 PBS 清洗残留的培养基，后倒入废液筒中，重复一次。加入 1.5ml 胰酶（0.25%）于培养瓶中（175ml） ，轻摇，使细胞接触胰酶，后用火焰消毒瓶口，并用镊
2、子盖紧瓶口，放入培养箱中消化 15min。3. 传代前准备：将移液管用镊子从灭菌筒中取出，并用火焰消毒前后端，安装到移液器上。再用火焰消毒管体，后静置放凉。准备新培养瓶（袋装培养瓶一旦开封，就必须放在超净台中使用） 。4. 1:2 传代：将消化后的细胞培养瓶从培养箱中取出，轻摇瓶体，对光观察，若消化完全，细胞会均匀滑落，若不完全则有部分粘附在瓶体，可用手温加热瓶体，促进消化。将培养瓶放入超净台中，火焰消毒瓶口，加入二倍胰酶体积的培养基（3ml ） ，用移液器反复吹打，动作也轻柔，尽量不产生气泡。将细胞吹散后，取一半体积的细胞加入到新培养瓶中（新瓶中的体积可略大于旧瓶） 。更换移液管，再分别向两瓶中加入 20ml培养基，轻轻吹匀（也可将培养基倒入培养瓶中） ，火焰消毒瓶口，镊子旋紧瓶盖。将培养瓶放入培养箱中，瓶口向里。5. 整理：将使用后的胰酶，PBS，培养瓶瓶口消毒，并用封口膜封闭后，重新放入 4中。移液管及时用清水冲洗，放置干燥，后泡酸，灭菌。清理废液桶和废物筒，并用酒精消毒，放回超净台中。所用试管和器具放回原处。手套可用清水清洗后，酒精消毒后，晾干，放回超净台中，继续使用。
