1、2009年1月第19卷第1期中国比较医学杂志C珊NESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDlCINEJlary，2009V0119 No1旷e盼g屿)综述与专论$吧：分盼、s；宁、e岛、e石、掣哮喘动物模型评价与观察指标的研究进展纪蕾蕾1，徐 立1，范欣生2，时 乐1，冯 里1(1南京中医药大学药学院，南京210046；2南京中医药大学江苏省方剂重点实验室，南京210046)【摘要】全面、成功地评价一个与l临床发病机制相似的、稳定可靠的支气管哮喘动物模型非常重要，本文参考近年来哮喘动物模型的一般评价指标和机理研究评价指标，对观察与评价指标的研究进展进行了整理分析，以供参考。
2、【关键词】 哮喘；模型；评价指标【中图分类号】R5622+5 【文献标识码】A 【文章编号】16717856(2009)01007204Progress on Evaluation and Observation of Asthma Animal ModelJI Lei1eil，XU d，FAN Xinshen92，SHI Lel，FENG Lil(1Nanjing University Of Traditional Chinese Medicine Institute of Chinese medicine Nanjing 210046，China；2Nanjing University o
3、f Traditional Chinese Medicine Prescription Key laboratory Nanjing 210046，China)【Abstract】ItB very important to evaluate B stable and reliable animal model comprehensively and successfully，which issimilar to the pathogenesm of clinical a8tI值Our paper focused on the recent reBearches on the indexes o
4、f basic and mechanismof animal asthma model，and summarized these indexes of evaluation and observation for your reference【Key words】 Asthma；Model；Evaluation为深入研究支气管哮喘的发病机制和病理生理变化，人们根据相似的原理，利用动物哮喘模型模拟人的哮喘发病过程，进而探索其诊断和防治措施，观察药物的疗效和毒副作用。因此，准确、客观地评价哮喘动物模型的指标，对探讨支气管哮喘的发病机制和药物作用机理显得尤为重要。本文介绍了哮喘动物模型的一般评价指标
5、和机理研究评价指标的研究现状。1哮喘动物模型的一般评价指标11整体水平评价指标整体水平的指标一般包括观察与记录模型动物的引喘潜伏期、哮喘持续时间和行为学评分等，通常在此基础上评判模型是否复制成功、并用以评价药物作用。如徐立等采用卵蛋白(OVA)致敏复制豚鼠哮喘模型，通过整体引喘实验直观反映了哮喘发作时气道痉挛支气管收缩情况，观察药物对哮喘的对抗作用。整体指标具有与临床表现非常接近、操作简便、直观的优点。但是，在观察时容易受主观判断的影响，使其误差较大。蒋雄斌心1采用动物肺功能体描箱、呼吸机及计算机分析系统，记录跨肺压、流速、潮气容积的变化，经过计算机软件计算用力最大呼气流速(PEF)、第04
6、S用力呼气容积用力肺活量(FEVO4FVC)等指标数据的变化规律，该研究中采用气管插管和机械通气的有创方法测定小鼠气道反应性和肺功能变化，具有精确、直观的优点。基金项目国家十一五支撑计划(2006BAl06A02)。【作者简介】纪蕾蕾(1975一)，女，硕士生。E-mail：jileileil515126COln【通讯作者】徐立(1957一)，男，副教授，硕导，研究方向：心血管及代谢性疾病药理。E-mail：61301563sim万方数据中国比较医学杂志2009年1月第19卷第1期Chin J Comp Med，January 2009，V0119No1 7312组织、器官水平评价指标组织、器
7、官水平的指标通常分为两种实验方法，一种方法是在整体实验的基础上，取其气管或肺组织进行组织形态学检查或肺溢流实验，另一种方法是直接取其气管或肺组织进行离体器官实验。徐立等肺溢流实验，观察灌流液流出速率，测定全部气道平滑肌张力情况，说明药物的扩张气道平滑肌作用。徐叔云等一豚鼠离体气条、肺条实验，主要反映大、小气道功能状况。Katsunori等H1使用显微图像分析系统对不同个体及不同部位来源的支气管比较，分析气道平滑肌厚度，气道平滑肌面积的变化。董泽华等固定肺组织后采取常规石蜡包埋、HE染色，获取大、小气道的连续切片，测量大、小气道管径变化，研究哮喘豚鼠模型气道的解痉的作用规律。组织、器官指标的观察
8、为受试药作用靶点的深入研究提供了基础。但是，由于组织、器官水平的指标大多数是在离体条件下进行的，不能完全反映整体状况，所以应当结合整体实验进行综合分析。13细胞水平评价指标近年来细胞水平的检测指标在哮喘动物模型的评价中应用较多，如毕玉田等。进行血与肺泡灌洗液(BALF)细胞总数计数和细胞分类计数，考察哮喘后细胞学的变化。胡作为等“1测量全血及BALF中血细胞计数，免疫组化法测定外周血单核细胞(PBMC)中CIM+，CD8+T细胞的含量，观察哮喘免疫功能情况。赖克方等哺1观察BALF细胞学和嗜酸性粒细胞(EOS)凋亡的变化，探讨支气管哮喘肺内EOS增多与EOS凋亡的关系。顾维戎o计算肥大细胞脱颗
9、粒百分率，反映过敏反应的程度。14分子水平评价指标随着分子生物学、遗传学、细胞生物学等学科的快速发展，分子水平评价指标越来越受到学者们的重视。如张全爱们以IgE、IgG、白细胞介素4(1L4)为效应指标，观察哮喘豚鼠的变态反应机制是否与人体一致。陈莹等1采用酶联免疫分析法测定血清及BALF上清液中细胞因子IL_4，5，10，12，13及INF7的水平变化，探讨其可能的作用机制和调节性T细胞在大鼠哮喘的发病中可能的作用机制。国外许多体外研究如Matthiesen等41用免疫组化及原位杂交检测细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal 11e羽ated kinase，ERK)
10、蛋白表达和的上皮细胞、纤维细胞、平滑肌细胞的增殖、凋亡、介质及炎症因子、基因的表达等而共同参与气道重构。分子水平评价指标的产生使药理实验上了一个新台阶。2哮喘动物模型的机理研究评价指标近年来，为研究哮喘发病机理和药物作用机理，学者们从气道炎症，免疫变态反应，神经受体失衡等方面探讨检测指标，对模型进行评价。21对EOS浸润致气道炎症的影响崔德健等钉用免疫组化法分别测定血管细胞粘附分子1(VCAM1)和嗜酸性细胞趋化因子(Eotaxin)及转录调控因子核因子(NF)tcB、活化蛋白1(AP1)在段支气管及细支气管肺泡区的蛋白表达，用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织匀浆VCAM1及Eo
11、taxin的mRNA表达，电泳迁移实验(EMSA)测定肺组织匀浆(NF)tcB及APl的DNA结合活性。研究支气管哮喘时EOS选择性粘附分子一VCAM1和Eotaxin及(NF)KB、Apol在大、小气道及肺组织中的表达，探讨EOS趋肺的机制。朱述阳等6。用瑞氏染色计数骨髓涂片和外周血涂片中自细胞比例，免疫组织化学技术检测骨髓中嗜酸粒细胞趋化因子受体3(CCR3)的表达，原位分子杂交技术检测肺组织中Eotaxin mRNA，免疫组织化学技术检测Eotaxin在肺组织中的表达，观察哮喘豚鼠肺和骨髓组织Eotaxin CCR3表达的变化及糖皮质激素对其影响，探讨哮喘用激素干预的可能机制。22对免疫
12、变态反应的影响李超乾等71采用流式细胞术，测定BALF中CD2+、CD28+及ybrICR+T细胞占总淋巴细胞的百分率及平均荧光密度(MIF)；用原位杂交法，检测肺组织中IL4 mRNA和IFN7 mRNA的表达；用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测血清IL4和1FN一7的浓度。通过这些指标的关联性，探讨ThlTh2细胞失衡影响免疫应答的机制。23对神经受体关系的影响陈国蓉等副采用免疫组织化学法检测与气道重构相关的细胞因子一转化生长因子B，根据融在动物支气管和肺组织中的蛋白表达，观察融对气道重构的影响。汪俊等训光镜和电镜下观察大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞(AMCC)的组织结构和超微结构万方数据74
13、中国比较医学杂志2009年1月第19卷第1期Chin J Comp lled，JuLry 2009，V0119No1中肾上腺素和去甲肾上腺素的变化。通过观察支气管哮喘状态下大鼠AMCC形态和功能的改变以及NGF在AMCC中的表达，探讨_,Mcc与支气管哮喘的关系。高海鹏等啪1用RTPCR及原位杂交方法测定哮喘时外周淋巴细胞及肺组织ARrnRNA水平，初步探讨fi2ARmltNA在支气管哮喘发病中的变化。24其他的影响张秀峰等怛收集支气管哮喘豚鼠的BALF，上清液作谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)浓度测定，沉淀作细胞涂片，行免疫组化和原位杂交，检测7谷氨酰半胱氨酸合成酶(-yGCS)蛋白和m
14、RNA，探讨支气管哮喘豚鼠BALF中炎症细胞7GCS的表达。Feng等陋1以工具药Flou3AM为细胞内钙离子示踪剂，观察气道平滑肌细胞(ASIICs)在工具药作用下细胞内钙离子浓度，检测哮喘豚鼠ASMCs内钙释放通道功能的改变，探讨与支气管哮喘的关系。btaution等旧m1用免疫组化方法结合显微图像分析测定气道平滑肌基质金属蛋白酶9(NMP9)、基质金属蛋白酶9抑制剂(TIMP1)免疫反应的变化，1V11VIP-9、TIMP1阳性细胞百分比及BALF中细胞总数，观察实验性哮喘豚鼠BALF及平滑肌中IVIMP9、TIIVIP1的表达及平衡变化趋势。综上所述，一方面，药效学实验研究用公认的一般
15、指标即可满足需要，如刘素芝等1认为动物模型是否成功和合格，一般以下四点可以说明问题：气道噬酸性粒细胞比例；组织病理学；血清lgE水平和活体肺功能。另一方面，药物作用靶点、物质基础等机理方面研究则需根据各实验研究需要，选择具有一定代表性的指标，从不同角度反映不同原因诱发的哮喘的某些特征，通过这些指标的互相关联性，促进人们对这种疾病的发病机制以及病理生理学的认识。当然由于哮喘病因复杂，必然造成哮喘动物模型指标的的复杂性，差异性，实际实验中不能死搬硬套，需辨别在不同模型复制过程中的检测指标存在的差异问题，结合实际需要，遴选客观指标。参考文献：23徐立，范欣生。何胜旭复方辛夷口服液对卵蛋白致敏豚鼠支气
16、管哮喘的影响J南京中医药大学学报，200420(2)：104106蒋雄斌，朱毅殷凯生重度哮喘小鼠模型的建立J中国危重病急救医学，2006，18(12)：733737徐叔云，卞如濂陈修药理实验方法学(第2版)M】北京：人民卫生出版社，1991：117111954f 56789101213141516171819202122Katsunori K，B06ken CH，Pare PD，et a1Small nirwayB dimensions inasthlm and chronic obstructive pulmonal,di8eeJm RII唧irI)i8，1993，148：12201225董
17、泽华，魏剑琴黄瑾，等哮喘豚鼠模型痉挛气道的解痉挛规律J吉林大学学报，2006，32(4)：562563毕玉田，王彦。吴奎等屋尘螨致敏激发小鼠气道变态反应性炎症模型的构建J中国实验动物学报2007，15(5)：338340胡作为，周电光，周燕萍等中药止哮平喘方抗哮喘豚鼠模型气道炎症的实验研究J广州中医药大学学报，2004，21(1)：40一42赖克方，王长征，郭先健，等支气管哮喘豚鼠肺内嗜酸粒细胞增多和凋亡的关系J广东医学2001。2229899陈奇中药药理研究方法学(第2版)M北京：人民卫生出版社，2006：642643张全爱哮喘模型豚鼠变态反应机制的实验研究J甘肃中医学院，2003，20(4
18、)：1617陈莹，戴晋多种细胞因子在哮喘大鼠发病中的作用J中国组织工程研究与临床康复，2007，1l(27)：532453271-latthiesen S，Bahulayan A，Itolz 0，et a1I-IAPK pathway mediatesmuseafinie receptor-induced hurm lung fibroblt proliferationJLife Sei，2007，80(2425)：22592262Inoue D，Yamaya M，Kubo It耽a11-leehanism 0f mueiuID,roduetion by rhinovirus infectio
19、n in cultured humn airway epithelialeell8JRespir Physiol l、leurobiol，2006，154(3)：484499k PJ，撕XC，Slum PYet a1ERKI2 mitogenaetivatd：lprotein kileleetively IllediatIL-13-induced lung intlanm血onand remodelingin vivoJJ Clin Jnvest，2006。116(1)：163173崔德健曾泽戎支气管哮喘豚鼠模型支气管肺组织血管细胞粘附分子和Eotaxiu的表达及调控J中华结核和呼吸杂志。20
20、02，25(11)：655660朱述阳，吕丽丽，夏春伟，等motllxill和CCR3在哮喘豚鼠肺和骨髓组织的表达及调控J细胞与分子免疫学杂志，2007，23(6)：543545李超乾，徐永健钟小宁，等不同Thll“h2细胞免疫应答支气管肺泡灌洗液中细胞学的变化J细胞与分子免疫学杂志，2002。18(6)：575577陈国蓉，冯淑兰肖生红，等转化生长因子B蛋白在气道重构哮喘豚鼠模型的表达及电针干预效应J中国组织工程研究与临床康复，2007，1I(49)：98269829汪俊，胡成平，梁伟军，等哮喘大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞表型转化与神经生长因子表达水平初探J中国实用内科杂志。200727(4)：2
21、70272高海鹏，薛全福，林友华，等支气管哮喘发病中阻AllmRNt水平变化的初步探讨J中国病理生理杂志，1999，15(6)：5755”张秀峰，戴爱国，胡瑞成支气管哮喘豚鼠肺泡灌洗液中炎症细胞7谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达J】中国组织化学与细胞化学杂志，2007，16(4)：424427Feng R，U Z，Teng Z，et a1Altered inirneelhdar Ca2+channelfunction of cultured UthlmlJc gui lepig ainvay smooth mIIscle oellBJChin Phamaeol Bull，2007。23(1)：475
22、I-万方数据中国比较医学杂志2009年1月第19卷第1期Chin J CompMed，January 2009V0119No1 75妒盼嘞g启 事$ke自o中国比较医学杂志被国家科技部“中国科技论文统计源期刊“(中国科技核心期刊)收录中国比较医学杂志(原名中国实验动物学杂志，1991年创刊)是由中国实验动物学会主办的国家级科技期刊。2003年正式更名为中国比较医学杂志。比较医学是对不同种动物(包括人)之健康和疾病状态进行类比研究的科学。在生命科学研究中起着十分重要的作用。比较医学真正形成一门独立的新兴学科是在20世纪50年代初，他是随着实验动物科学诞生而同时发展起来的。特别是在20世纪80年代
23、初，美国首先兴起比较医学，在20多个医学院校中建立了比较医学系，使分散的各分科动物实验集中于比较医学这一新的学科中，发挥边缘学科杂交优势，使病原(病因)在很不相同的宿主身上引起的各式各种反应和发展过程综合成全息图像，这可能是对疾病的最透彻的了解，也充分发挥了比较医学在生命科学前沿的尖兵作用。比较医学的兴起与发展，标志着实验动物科学不仅是生命科学研究的重要支撑条件，而且是生命科学的重要前沿学科。为了更好地与国际接轨，我刊自2003年正式更名以来，受到广大作用和读者的厚爱。经同行专家评议及学术指标综合评定，被国家科技部“中国科技论文统计源期刊”(中国科技核心期刊)、中国生物学文摘和“中国生物学文献
24、数据”、“中文生物医学期刊文献数据库一CMcC”、“中国生物医学期刊引文数据库一cMcI”、“中国核心期刊(遴选)数据库”、“中国基础科学期刊文献总库”、“中国医院知识仓库”、“中国农业知识仓库”和“中国城市规划知识仓库”等收录。欢迎从事生命科学研究的广大科技工作者一如既往地关爱我刊，共同为我国的比较医学科学发展做出贡献!万方数据哮喘动物模型评价与观察指标的研究进展作者： 纪蕾蕾， 徐立， 范欣生， 时乐， 冯里， JI Lei-lei， XU Li， FAN Xin-sheng， SHILe， FENG Li作者单位： 纪蕾蕾,徐立,时乐,冯里,JI Lei-lei,XU Li,SHI Le
25、,FENG Li(南京中医药大学药学院,南京,210046)， 范欣生,FAN Xin-sheng(南京中医药大学江苏省方剂重点实验室,南京,210046)刊名： 中国比较医学杂志英文刊名： CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE年，卷(期)： 2009，19(1)被引用次数： 0次参考文献(25条)1.徐立.范欣生.何胜旭 复方辛夷口服液对卵蛋白致敏豚鼠支气管哮喘的影响期刊论文-南京中医药大学学报2004(02)2.蒋雄斌.朱毅.殷凯生 重度哮喘小鼠模型的建立期刊论文-中国危重病急救医学 2006(12)3.徐叔云.卞如濂.陈修 药理实验方法学 199
26、14.Katsunori K.Boeken CH.Pare PD Small airways dimensions in asthma and chronic obstructive pulmonarydisease 19935.董泽华.魏剑琴.黄瑾 哮喘豚鼠模型痉挛气道的解痉挛规律期刊论文-吉林大学自然科学学报 2006(04)6.毕玉田.王彦.吴奎 屋尘螨致敏激发小鼠气道变态反应性炎症模型的构建期刊论文-中国实验动物学报2007(05)7.胡作为.周电光.周燕萍 中药止哮平喘方抗哮喘豚鼠模型气道炎症的实验研究期刊论文-广州中医药大学学报2004(01)8.赖克方.王长征.郭先健 支气管哮喘
27、豚鼠肺内嗜酸粒细胞增多和凋亡的关系期刊论文-广东医学 2001(02)9.陈奇 中药药理研究方法学 200610.张全爱 哮喘模型豚鼠变态反应机制的实验研究期刊论文-兰州:甘肃中医学院 2003(04)11.陈莹.戴晋 多种细胞因子在哮喘大鼠发病中的作用期刊论文-中国组织工程研究与临床康复 2007(27)12.Matthiesen S.Bahulayan A.Holz O MAPK pathway mediates muscarinic receptor-induced human lungfibroblast proliferation 2007(24-25)13.Inoue D.Yama
28、ya M.Kubo H Mechanisms of mucin production by rhinovirus infection in cultured humanairway epithelial cells 2006(03)14.Lee PJ.Zhang XC.Shan PY ERK1/2 mitogenactivated protein kinases electively mediates IL-13-inducedlung inflammation and remodeling in vivo 2006(01)15.崔德健.曾泽戎 支气管哮喘豚鼠模型支气管肺组织血管细胞粘附分子和
29、Eotaxin的表达及调控期刊论文-中华结核和呼吸杂志 2002(11)16.朱述阳.吕丽丽.夏春伟 Eotagin和CCR3在哮喘豚鼠肺和骨髓组织的表达及调控期刊论文-细胞与分子免疫学杂志 2007(06)17.李超乾.徐永健.钟小宁 不同Th1/Th2细胞免疫应答支气管肺泡灌洗液中细胞学的变化期刊论文-细胞与分子免疫学杂志 2002(06)18.陈国蓉.冯淑兰.肖生红 转化生长因子蛋白在气道重构哮喘豚鼠模型的表达及电针干预效应期刊论文-中国组织工程研究与临床康复 2007(49)19.汪俊.胡成平.梁伟军 哮喘大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞表型转化与神经生长因子表达水平初探期刊论文-中国实用内科杂
30、志 2007(04)20.高海鹏.薛全福.林友华 支气管哮喘发病中2ARmRNA水平变化的初步探讨期刊论文-中国病理生理杂志1999(06)21.张秀峰.戴爱国.胡瑞成 支气管哮喘豚鼠肺泡灌洗液中炎症细胞谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达期刊论文-中国组织化学与细胞化学杂志 2007(04)22.Fong R.Li Z.Teng Z Altered intracellular Ca2+ channel function of cultured asthmatic guinea pigairway smooth muscle cells期刊论文-Chinese Pharmacological Bulle
31、tin 2007(01)23.Maution G.Oliver N.Clanez P Increased release of mareixmatalloproteinase-9 in bronchoalveolarlavage fluid and by alveolar macrophages of asthmatics 199724.Maution G.Henriquet C.Jaffue D Tissue inhibitor of metelloproteinase-1 levels in bronchoalveolarlavage fluid from asthmatic subjec
32、ts 199925.刘素芝.刘玉丽.曹国龙 哮喘动物模型免疫炎症反应发生验证的要点期刊论文-中国组织工程研究与临床康复2007(22)相似文献(10条)1.期刊论文 谢柏梅.范亮.Xie Baimei.Fan Liang 地塞米松对豚鼠哮喘模型肥大细胞和类胰蛋白酶的影响 -陕西医学杂志2008,37(1)目的:探讨地塞米松对豚鼠哮喘模型肺组织中肥大细胞及血浆类胰蛋白酶含量的影响.方法:将30只雄性豚鼠分为哮喘模型、地塞米松治疗和健康对照组,用卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏和雾化吸入激发建立哮喘豚鼠模型.镜下观察肺组织肥大细胞数量及脱颗粒现象.运用Uni CAP100全自动体外变应原检测仪测定豚
33、鼠血浆类胰蛋白酶含量.结果:哮喘模型组豚鼠肺高倍视野肥大细胞数、脱颗粒百分率及血浆类胰蛋白酶含量分别为14.874.67个,42.855.99 %,119.7812.50均明显高于对照组(2.380.52个,24.919.79 %,88.784.74,P0.01);地塞米松治疗组豚鼠肺高倍视野肥大细胞数、脱颗粒百分率及血浆类胰蛋白酶含量分别为6.631.41个,25.336.14 %,92.107.11,显著低于哮喘模型组(P0.01).结论:肥大细胞类胰蛋白酶参与了哮喘的致病过程;而糖皮质激素在哮喘中的抗炎作用可能是通过抑制肥大细胞类胰蛋白酶的释放而实现的.2.学位论文 郑宇铎 DEHP对大
34、鼠哮喘模型的影响及其机理研究 2010哮喘是一种气道慢性炎症，其典型症状包括气道内的炎症细胞出现，气道高反应性，气道重塑等。哮喘是仅次于癌症的世界第二大致死和致残疾病，并且表现出发达国家患者较多和青少年儿童患者较多的特点。传统观点认为花粉，宠物毛发，霉菌等自然界存在的物质是引发哮喘的环境因素。近年来大家把目光聚焦到人造化学物质与哮喘患者增加的关系上。这些人造物质对哮喘的诱发作用和恶化作用已经被越来越多的实验和现象所证实。但是这些物质诱发和恶化哮喘的机制无法用传统的自然物质引发哮喘的机理进行解释。邻苯二甲酸二乙基己酯(di-(2-ethylhexyl)phthalate，DEHP)是现代社会一种
35、常见的污染物，在室内环境中也有广泛的存在。可以通过进食，饮水和空气吸入等多种途径进入人体。DEHP的多种生物毒性，如遗传毒性，类雌激素作用早已为人所熟悉。近期实验表明DEHP对哮喘也有诱发或者恶化作用。本实验通过大鼠哮喘模型的体内实验和大鼠气道平滑肌细胞的体外实验对DEHP对大鼠哮喘的影响及其机理进行了研究。 1、DEHP对大鼠哮喘的影响; 工作相关型哮喘是新出现的哮喘中一种重要形式，体内实验中使用了健康大鼠和通过OVA致敏人为引发哮喘症状的大鼠哮喘动物模型进行对比。通过肺部滴注法每天进行DEHP染毒模拟在空气中DEHP含量为0.5mg/m3和5mg/m3情况下每天工作8小时，染毒持续1个月，
36、观察DEHP对大鼠哮喘的影响。体外实验用健康大鼠气道平滑肌细胞在常规饲养条件下和通过在培养基中添加IL-4模拟哮喘症状条件下进行对比，通过在培养基中加入DEHP染毒，进一步观察DEHP对大鼠哮喘的影响。 OVA致敏的大鼠在气道高反应性，细胞因子水平和肺部切片显示的气道结构变化上都表现出了典型的哮喘症状。在通过添加IL-4模拟哮喘症状的培养基中的气道平滑肌细胞生长也明显加快。在典型的哮喘中，这种气道平滑肌细胞过度增长是引起气道重塑的主要因素之一，进而引起气道高反应性。DEHP染毒的健康大鼠和健康细胞则未表现出以上症状。同时OVA致敏的大鼠经过5mg/m3浓度DEHP暴露，其哮喘症状较没有染毒的O
37、VA致敏大鼠有了显著恶化。而IL-4对气道平滑肌细胞的促生长作用没有受到3mol/L浓度的DEHP影响。 总体看来在实验浓度下DEHP并不能直接引发大鼠哮喘症状，但是接触DEHP使大鼠哮喘症状出现了恶化 2、DEHP恶化大鼠哮喘的可能机制； OVA致敏引起的是典型的过敏反应引发的哮喘，DEHP本身则不能引发健康大鼠的哮喘症状。根据过敏体质学说，过敏性哮喘的主要病理学特征是“气道变应性炎症”其发生需要过敏原(allergen)和过敏体质(atopy)两种致病因素的联合作用，缺一不可。DEHP不是过敏原，DEHP对哮喘的作用也不能用传统的过敏原理论解释。但是DEHP对哮喘症状的加剧，说明其可以与这
38、一过程中的某些因素起作用，很有可能DEHP对过敏体质的产生起作用。也就是说DEHP可以使身体对过敏原的刺激更加敏感，进而表现出由过敏原引起的哮喘症状进一步恶化，这种因为外界因素产生的过敏体质被称为获得性过敏体质，而能够引起获得性过敏体质的物质称为过敏体质激发原。本次实验的结果支持了这一理论，DEHP可能正是通过充当过敏体质激发原的作用从而恶化哮喘症状的。 具体来说平滑肌细胞肥大和过度生长目前被认为是引起气道重塑进而引起气道高反应性这一典型哮喘症状的主要原因。引起气道平滑肌细胞过度生长的正是哮喘病症中其他细胞释放的细胞因子和化学因子，提高气道平滑肌细胞对这些因子的敏感性，从而进一步加快气道平滑肌
39、细胞增殖可能是DEHP恶化哮喘症状的一种途径。虽然通过体外实验，我们发现IL-4对气道平滑肌细胞的促生长作用没有受到3mol/L浓度的DEHP影响。但是IL-4这一在哮喘中释放增加的细胞因子的确能够引起气道平滑肌细胞的增殖加速。在体内实验中我们也观察到接受5mg/m3浓度DEHP暴露OVA致敏大鼠肺部组织中IL-4含量较没有染毒的OVA致敏组有显著升高。也就是说DEHP虽然没有直接提高气道平滑肌细胞对IL-4的敏感性，但是DEHP可能刺激其他细胞释放更多的IL-4进而影响气道平滑肌细胞生长。IL-4不是唯一可以引发平滑肌细胞生长加速的细胞因子，DEHP也可能通过其他的细胞因子和生长因子起作用，
40、或者是影响多种因子的共同效应，这还有待进一步实验的探索。 另外体外实验还观察到DEHP对气道平滑肌细胞表现出一定毒性，而且气道平滑肌细胞对DEHP毒性比常用细胞系(如HeLa细胞)更为敏感。当DEHP被吸入肺部时，直接与DEHP接触的肺部细胞(如上皮细胞)很可能也会受到毒性作用产生损伤。而上皮细胞损伤则可以引发一系列炎症反应，炎症细胞的增加和其他免疫细胞的亢奋则可能提高身体对过敏原的反应，从而引发获得性过敏体质。3.期刊论文 王文婕.王晓川.章迁.陈莲.王莹.徐振.WANG Wen-jie.WANG Xiao-chuan.ZHANG Qian.CHEN Lian.WANGYing.XU Zhe
41、n 小鼠哮喘模型胸腺中胸腺基质淋巴生成素、Foxp3的表达及调节 -中国循证儿科杂志2008,3(4)目的 通过建立小鼠哮喘模型,探讨胸腺在过敏性疾病发病机制中的作用,以及胸腺肽干预哮喘模型的作用和可能的机制.方法 40只小鼠随机分为哮喘模型组、卵清蛋白(OVA)+胸腺肽组、对照组和胸腺肽组,每组各10只.采用OVA腹腔注射和超声雾化吸入建立BALB/c小鼠哮喘模型;通过血清总IgE水平和肺组织病理学检查评价哮喘模型;用Real-time PCR检测哮喘模型和胸腺肽干预下,小鼠肺组织和胸腺中胸腺基质淋巴生成素(TSLP)以及胸腺Foxp3mRNA表达变化,并通过血清总IgE水平和肺组织病理学评
42、价胸腺肽干预下哮喘模型的过敏状态.结果 哮喘模型组与对照组相比,血清总IgE浓度明显增高,肺组织病理学检查示气道炎症明显,胸腺和肺组织TSLP mRNA表达均显著增高,胸腺Foxp3 mRNA表达显著降低;OVA+胸腺肽组肺组织病理学检查示气道炎症减轻,胸腺TSLP mRNA表达显著低于哮喘模型组.结论 OVA哮喘模型胸腺TSLP mRNA的表达水平上调、Foxp3 mRNA的表达水平下调,提示OVA可影响中枢性免疫器官-胸腺;OVA哮喘模型引起胸腺Foxp3 mRNA表达降低,提示胸腺功能的改变可能与过敏性疾病的发生有关;胸腺肽可改善过敏状况,其作用机制至少部分是通过胸腺而发挥.4.期刊论文
43、 潘频华.陈清兰.吴鄂生.胡成平.PAN Pin-hua.CHEN Qing-lan.WU E-sheng.HU Cheng-ping 早期糖皮质激素应用对豚鼠哮喘模型气道重塑影响的病理学研究 -中国现代医学杂志2005,15(21)目的探讨慢性哮喘气道重塑的发生及早期应用糖皮质激素对哮喘气道重塑的影响.方法选健康豚鼠60只,随机分成6组:正常组1、哮喘组1、地塞米松治疗组1和正常组2、哮喘组2、地塞米松治疗组2,分别代表急性和慢性模型;用卵蛋白致敏和诱喘,急性模型2周后取支气管肺组织制作病理切片和电镜切片;慢性模型4周后取支气管肺组织制作病理切片和电镜切片.采用计分法对气道病理指标进行评价.
44、结果光镜下急性哮喘模型可见支气管、细支气管上皮细胞脱落、管壁炎症细胞浸润、杯细胞增生、平滑肌增厚,肺泡间隔亦可见炎症细胞浸润.与急性模型比较,慢性哮喘模型基底膜和平滑肌层增厚更明显,支气管壁内可见纤维组织增生.地塞米松治疗后气道炎症细胞浸润减少,基底膜和平滑肌增生减轻.电镜观察显示慢性哮喘模型基底膜层大量成纤维细胞增生、胶原纤维沉积、平滑肌细胞增多肥大.病理指标评分结果示急性哮喘模型EOS浸润、杯细胞增生、基底膜增厚、平滑肌增生、炎症细胞浸润5项指标计分均高于正常组(P0.05).慢性哮喘模型EOS浸润、炎症细胞浸润、基底膜增厚、平滑肌增生、管壁纤维化5项指标评分高于正常组,地塞米松治疗后平滑
45、肌增生计分略仍高于正常.慢性哮喘模型与急性哮喘模型比较仅平滑肌增生和管壁纤维化计分有差异(P0.05).结论豚鼠哮喘模型存在气道重塑病理改变,慢性模型比急性模型更明显;急性模型的病理变化说明气道重塑在哮喘的早期即开始;糖皮质激素早期应用可预防气道重塑的发展.5.学位论文 王艳杰 穴位贴敷TDD药贴对哮喘豚鼠TNF-和ET-1含量的影响 2009一、研究背景、目的与意义支气管哮喘（后文简称哮喘）是肥大细胞、嗜酸性粒细胞、T淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和上皮细胞等多种细胞和细胞介质参与呼吸道慢性炎症。全球约有一亿五千万到二亿人罹患哮喘，在我国，约有1500-2000万哮喘患者，且在儿童及青少年中
46、，其发病率较成人高。特别是近20年来，哮喘发病率和死亡率持续增加，目前仍以每十年20%50%的比率增长，哮喘已成为仅次于癌症的世界第二大致死和伤残疾病。EOS在介导气道炎症参与哮喘病发病的调节中起重要作用，是哮喘发病机制中的主要效应细胞。TNF-是哮喘病炎症过程中重要的启动因子，它还刺激ET-1分泌增加，进一步导致平滑肌细胞增殖、成纤维细胞增殖等，可能是参与气道高反应性及气道重构的重要机制之一。ET-1作为前炎性介质可增加TNF-等的生成，而且ET-1合成、分泌增加可能是联系哮喘气道炎症和重构的关键性环节。这三者均与哮喘气道炎症密切相关，且TNF-与ET-1有可相互促进分泌增加的效应，并且能够
47、影响气道高反应性。经皮治疗系统（transdermal therapeutic system，TTS），或称经皮给药系统（transdermal delivery system，TDDS），一般是指经皮肤给药而起全身治疗作用的控释剂型，即皮肤贴片。它可以不经过肝脏的“首关效应”和胃肠道的破坏，不受胃肠道酶、消化液、PH等诸多因素的影响，可提高生物利用度，提供可预定的和较长的作用时间，降低药物毒性和副作用，维持稳定而持久的血药浓度，减少给药次数提高疗效。天灸又称药物灸、发泡灸，是用对皮肤有刺激性的药物，涂敷于穴位或患处，使局部充血、起泡，犹如灸疮，故名天灸。古代的天灸疗法也是通过药物经过人体体表
48、吸收后，再刺激穴位并同时作用于相关的脏腑而发挥治疗作用的，即通过药物与经络的双重作用达到治疗疾病的目的。天灸大量的实验研究已证实，天灸疗法具有调整和增强机体免疫功能的作用，主要对细胞因子、白细胞、T淋巴细胞进行调节。天灸疗法作为一种传统的中医疗法，在治疗支气管哮喘方面有较为显著的临床疗效。本课题是将经皮控释给药系统（TDD）与中国古代传统的天灸疗法相结合，在天灸原方的基础上进行剂型的改良，开发的“天灸TDD药贴”。为探讨穴位贴敷TDD药贴对哮喘豚鼠模型哮喘发作的可能干预机制，本研究应用穴位贴敷TDD药贴干预哮喘豚鼠模型，观察各组致敏豚鼠喷雾时发生哮喘的潜伏期（开始喷雾至出现点头呼吸的时间）及发作时症状、轻重程度（如点头呼吸频率、幅度，抽搐，晕厥等）等情况，并主要测定卵白蛋白（OVA）致敏哮喘豚鼠血清中TNF-、ET-1含量和支气管及肺组织中EOS浸润计数。通过比较各组哮喘豚鼠在治疗周期结束后，血清中TNF-、ET-1的含量及支气管肺泡组织中EOS浸润计数情况，探究天灸TDD药贴对OVA致敏哮喘豚鼠模型的抗炎、减轻气道痉挛及降低气道高反应性等可能的作用机制，进而为天灸TDD药贴对哮喘是否具有抗炎、减轻气道痉挛及降低气道高
