1、National Medical Frontiers of China, Jan 2011, Vol.6 No.1 中国医疗前沿 2011年1月 第6卷 第1期 67临床诊断随着生活水平的不断提高， 人们膳食结构的变化， 高嘌呤类食物如海鲜、 肉类等的摄入量明显增加， 而长期摄入富含嘌呤类的食物再加上一些诱导因素可引起嘌呤代谢异常， 从而导致嘌呤代谢的终产物尿酸 (2,4,6-三羟基嘌呤,简称UA)在体内沉积。 正常人血浆中尿酸含量约为2.0 6.0mg/dL， 男性平均为4.5mg/dL， 女性平均为 3.5mg/dL。 正常含量的尿酸对机体是有益的， 其作为一种抗氧化剂可以去除过氧化物、
2、羟基与氧自由基、螫合转移金属离子、 防止细胞外超氧歧化酶降解、 保护血管内皮细胞使其免受损伤。 但是当血液尿酸的浓度超过6.5 7.0mg/dL时， 尿酸盐晶体即可沉积于关节、 软组织、 骨骼和肾脏等处， 可引发一系列疾病， 如痛风症、 心力衰竭、 肾脏疾病、 白血病1-6等，所以尿酸的检测对疾病监测、 了解病情进展具有重要意义。目前尿酸的检测方法有7,8： 酶法、 高效液相色谱法、 伏安法、毛细管电泳法、 同位素稀释质谱法、 磷钨酸还原法、 分光光度自动分析仪法9等。 临床上常用的酶法在测定过程中需使用的尿酸，而酶容易被重金属、 酸、 碱等破坏， 并且价格较贵 ； 分光光度自动分析仪法测定，
3、 需使用专用的自动分析仪 ； 高效液相色谱法和同位素稀释质谱法等需使用较贵的仪器和试剂， 应用受限。 本研究采用分光光度法利用尿酸的还原性将铁 （） 还原为铁 （） ， 并进一步与邻二氮菲生成橙红色的配合物， 从而测定尿酸的含量。 该方法简单、 操作方便、 灵敏度和准确度高， 对血清中尿酸含量进行测定易于实现。1 实验部分1.1 主要仪器 TU-1800S紫 外可见分光光度计 （北京普析通用仪器公司）； 721分光光度计 （上海第三分析仪器厂）； 800型电动离心机 （江苏龙冈医疗机械厂）； 分析天平 （上海天平仪器厂）；分光光度法测定血清中尿酸含量冯晓晶 张加玲【摘要】 目的 建立一种简便、
4、 快速测定血清中尿酸含量的方法。 方法 尿酸将铁 （） 还原为铁 （） ， 其进一步与邻二氮菲生成橙红色的配合物， 在510nm波长处测定其吸光度值， 并详细探讨影响该显色反应的各种因素。 结果 在选定的最佳实验条件下， 尿酸含量在 0.25 7.00mg/L 范围内线性良好， 相关系数 r=0.9997， 精密度RSD3.70%， 加标回收率 84.0% 101.0%。 结论 该方法用于血清中尿酸含量的测定， 结果令人满意。【关键词】 尿酸； 分光光度法； 血清； 嘌呤doi:10.3969/j.issn.1673-5552.2011.01.0044【中图分类号】R-331； R446.11
5、 【文献标识码】A 【文章编号】1673-5552(2011)01-0067-02恒温水浴箱 （北京医疗设备厂） 。1.2 主要试剂1.2.1 尿酸标准储备液 (1.0000g/L) ： 准确称取0.1000g尿酸，溶于6ml 0.1mol/L氢氧化钠溶液中， 用蒸馏水定容至100ml。1.2.2 尿酸标准应用液 （0.05g/L） ： 由尿酸标准储备液稀释得到。1.2.3 铁 （） 储备液(0.30g/L) ： 准确称取 0.2590g硫酸铁铵，加入1 1盐酸20ml， 用蒸馏水定容至100ml。1.2.4 铁 （） 应用液 （30.0mg/L)： 由铁 （） 储备液稀释得到。1.2.5 醋
6、酸缓冲液 (pH=3.6) ： 称取无水醋酸钠 4.68g， 加入40ml冰醋酸， 稀释至250ml。1.2.6 邻二氮菲 (1.00g/L) ： 准确称取邻二氮菲 0.2500g， 加入少量无水乙醇溶解， 用蒸馏水定容至250ml。1.2.7 实验用水电导率均小于1.0 S/cm。1.3 实验方法 取 0.4ml血清于10ml 玻璃离心管中， 加0.4ml 6%高氯酸， 振荡，3000r/min离心25min， 取上清液， 用0.1mol/LNaOH调 节pH至 中 性， 加入铁应用液 1.5ml、 醋酸缓冲液2.0ml、 邻二氮菲溶液 1.0ml， 用蒸馏水定容至 10ml， 摇匀，55恒
7、温水浴30min， 取出冷却至室温， 在510nm处以 试剂空白为参比， 用10mm比色皿测定吸光度值。2 结果与讨论2.1 最佳实验条件的选择2.1.1 测定波长的选择 ： 对显色后的络合物进行光谱扫描， 该络合物在510nm处有最大吸收峰， 故选择510nm为测定波长。2.1.2 显色温度、 时间的影响： 研究了尿酸浓度为10.0mg/L时显色温度、 时间对吸光度值的影响。 结果表明，55恒温水浴30min能加快反应， 并且吸光度值稳定， 故选择其为实验条件。2.1.3 pH值的影响 ： 考察了尿酸浓度为 10.0mg/L时溶液在不同pH值时吸光度值的影响， 结果如图1。 由图可知， 当p
8、H为2.54.0时吸光度值较大并且较稳定， 故选择pH=3.6的醋酸缓冲溶液作为实验的最佳pH值。2.1.4 铁 （） 溶液浓度的影响 ： 研究了尿酸浓度为 7.5mg/L时铁 （） 溶液浓度的影响， 结果如图2。 吸光度值随铁 （） 溶液浓基金项目： 山西省自然科学基金 （编号： 2010011054）作者单位： 030001 太原， 山西医科大学公共卫生学院卫生检验教研室fengxiaojing_ 作者简介： 冯晓晶 （1983-） ， 女， 在读硕士， 主要研究方向为卫生检验。Email： fengxiaojing_通讯作者： 张加玲 （1961-） ， 女， 教授。Email： Det
9、ermination of Serum Uric Acid by Spectrophotometry FENG Xiao-jing, ZHANG Jia-ling. Department of Hygienic Inspections, School of Public Health, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China【Abstract】Objective A simple and rapid method for the determina tion of uric acid in serum was proposed. Met
10、hods The Fe () was reduced to Fe() by uric acid, which then formed an orange complex with phenanthroline. The absorbance of the complex was measured at a wavelength of 510nm, and the optimal extraction and reaction conditions were studied. Results Under the optimum conditions, linearity was excellen
11、t in the range of 0.25-7.0mg/L, correlation coefficient r=0.9997. The coefficient of variation in this method was less than 3.70%, and the recoveries were in the range of 84.0%-101.0%. Conclusion The proposed method was applied to the determination of uric acid in human serum sample with satisfactor
12、y results.【Keywords】Uric acid; Spectrophotometry; Serum; Purine68 临床诊断 中国医疗前沿 2011年1月 第6卷 第1期 National Medical Frontiers of China, Jan 2011, Vol.6 No.1度增大先增大后减小， 当铁 （） 溶液浓度为 4.5mg/L时， 吸光度值较大并且较稳定， 故实验中选择铁 （） 溶液浓度为 4.5mg/L作为测定条件。2.1.5 邻二氮菲浓度的影响 ： 研究了尿酸浓度为 10.0mg/L时邻二氮菲浓度的影响， 结果如图3。 吸光度值随邻二氮菲浓度的增大先增大后
13、保持不变， 实验选择邻二氮菲0.1g/L作为测定条件。 2.1.6 共存物质的干扰及消除： 考察了尿酸浓度为 4.0mg/L时血清中共存物质抗坏血酸、 葡萄糖、 肌酐、 谷胱甘肽、 水杨酸等的干扰情况， 以相对误差10为限， 抗坏血酸对测定有干扰，0.1mol/LNaOH能消除其为人体血清中最高含量 （1.5mg/L）时对尿酸测定的干扰； 140.0mg/L葡萄糖、1.4mg/L肌酐、2.5mg/L水杨酸均不干扰测定 ； 由于谷胱甘肽存在于红细胞中，故需使用不溶血的血清标本， 以减少其干扰10。 2.2 标准曲线 在最佳实验条件下， 得标准曲线回归方程A=0.1334c-0.0011， 相 关
14、 系 数r为0.9997, 线性范围 0.25 7.0mg/L。2.3 精密度和准确度 分别对加入不同浓度尿酸的血样进行测定， 做精密度和加标回收实验， 结果见表1。2.4 与酶法测定结果比较 本方法测定12份血样， 与酶法测定结果进行比较， 结果见表2。3 结论本研究利用分光光度法对血清中尿酸的含量进行测定， 该方法相对标准偏差均小于 3.70%， 加标回收率 84.0% 101.0%， 尿酸含量在 0.25 7.00mg/L 范围内线性良好， 并且仪器简单、 操作方便、 易于实现， 用该方法对血清中的尿酸进行测定， 结果令人满意。参考文献1殷丽.血清尿酸含量在临床上的应用 J.中国误诊学杂
15、志 ,2004,4(5): 33-35.2张昌颖.核酸生物化学M.北京:人民卫生出版社,1993.3杜惠.上海市黄埔区社区高尿酸血症与痛风流行病学调查 J.中华风湿病学杂志,1998,(2):75-78.4费劲松,季鸿,陈范元.老年高血压病患者颈动脉粥样硬化程度与血清尿酸和胆红素水平的关系 J.现代医学卫生 ,2004,20(14):1322- 1323.5崔全永.急性心肌梗死、 脑梗死与血尿酸关系分析J.检验医学,2004, 29(2):178.6蔡莉莉.对白血病患者血清尿酸的检测探讨 J.实用临床医学 ,2002, 3(4):11-12.7戴新华,徐锐锋,张春梅,等. 血清中尿酸的测定方法
16、及其研究进展J.现代仪器分析,2006,(4):83-86.8丁萍,关鲁雄,秦旭阳,等.尿酸检测方法及进展 J.娄底师专学报, 2004,4(2):7-9.9John W, Nelson K, Batra K. Simplified Automated Method for Determination of Urinary or Serum Uric Acid, Based on Reduction of Ferric-Phenanthroline ComplexJ.CLIN CHEM, 1975,21(1):125-129.10胡志新.尿酸(UA)的测定J.中国现代实用医学杂志,2005,4
17、(5):54.（收稿日期： 2010-10-12） （本文编辑： 夏凯艳）图1 pH值对吸光度值的影响图2 铁 （） 溶液浓度对吸光度值的影响图3 不同浓度邻二氮菲对吸光度值的影响表1 精密度和准确度实验结果血清 加标量 测定值c 均值 sRSD 回收率(ml) (mg/L) (mg/L) (mg/L) % %0.0 2.62 2.62 2.84 2.82 2.65 2.72 2.72 0.099 3.65 0.4 1.0 3.72 3.58 3.74 3.83 3.70 3.82 3.73 0.091 2.45 101.02.0 4.37 4.36 4.41 4.42 4.38 4.48 4
18、.40 0.044 1.00 84.0表2 本法测定结果与酶法测定结果比较血样编号 本法 （ mol/L） 酶法（ mol/L） 差值d（ mol/L）1 239 196 432 253 231 223 255 254 14 308 311 -35 309 313 -46 332 332 07 349 370 -218 346 337 99 348 363 -1510 378 417 -3911 389 402 -1312 545 498 47经正态性分析， 差值 d服从正态分布， 采用配对 t检验， 得 t=0.310， P0.05(P=0.762), 可认为两种方法测定尿酸结果无显著性差异
19、。醒质量更优、 并发症少等优点， 是一种比较理想的麻醉方法。参考文献1Mouroux J, Maalouf J, Padovani B, et al. Surgical management of pleuropulmonary tuberculosisJ.J Thorac Cardiovasc Surg,1996,111(3):662-670.2Conzen PE, Fischer S, Peter K, et al. Sevofiurance providesgreater protectionof the myocardium than propofolin patients under
20、going off pump coronary artery bypass surgeryJ.Anesthesiology,2003,99(4):826.3Dragne A, Varin. F, Plaud B, et al. Rocuronium pharmaco-kinetic-pharmacodynamic relationship under stable propofol or isoflurane anesthesiaJ.Can J Anesth,2002,49(4):353-360.4Adamusa M, Belohlavekb R, Koutnaa J, et al. Cisatracurium vs. rocuronium: a prospective, comparative, randomized study in adult patients under total intrarenous anaesthesiaJ.Biomed Pap Med Fae Univ Palacky Olomoue Czeeh Repub,2006,150(2):333-338.5闻大翔,陈锡明,抗燕南.顺式阿曲库铵的组胺释放作用及对血液动力学的影响J.中华麻醉学杂志,2001,21(2):69-72.（收稿日期： 2010-10-11）（本文编辑： 夏凯艳）(上接P46)
