1、实训一 显微镜的使用和微生物测微技术,食品微生物学,一、实验目的1. 练习和掌握显微镜的使用方法（低倍镜、高倍镜、油镜）。2. 掌握使用测微尺测定微生物大小的方法，熟悉微生物大小的一般概念。,二、实验原理,（一）显微镜的结构、光学原理和操作方法1.显微镜分机械系统和光学系统两部分机械系统包括：镜筒、转换器、载物台、镜臂、镜座、粗准焦螺旋、细准焦螺旋。光学系统包括：目镜、物镜、聚光器、光源、滤光片、虹彩光圈。,双目光学显微镜,二、实验原理,（二）显微镜的光学原理,1.成像原理光路：光源虹彩光圈聚光镜通光孔标本（一定要透明）物镜镜筒目镜眼。,二、实验原理,(三)油镜工作原理,香柏油的折光率（1.5
2、1-1.52）与玻璃 片折光率（1.52）相近似，因此在物镜（玻璃）与标本载片（玻璃）之间加入香柏油可以使光线不致因从一个介质（玻璃）进入到另一折光率不同的介质即空气（折光率为1.0）而引起部分散射，造成亮度不够而观察不清，这对透镜弯曲度较大，直径较小（通过光线亦较小）的油镜头是特别重要的。做法是在用油镜观察时要把油镜头（100）浸入香柏油中。,二、实验原理,1.物测微尺物测微尺是一厚玻片，中央有一圆形盖玻片，中央刻有1mm长的标尺，等分为100格，每格100m，用以标定目测微尺，在不同放大倍数下每格的实际长度。,二、实验原理,(四)测微技术,二、实验原理,2.目测微尺的标定,将目测微尺装入目
3、镜的隔板上，使刻度朝下；把物测微尺放在载物台上使刻度朝上。用低倍镜找到目测微尺的刻度，移动物测微尺和目测微尺，使两者的第一条刻度线重合，顺着刻度找到另一条重合刻度线。计算在该放大倍数下目测微尺每个小格的实际长度。目测微尺每小格长度(m)=,二、实验原理,用物测微尺标定目测微尺,二、实验原理,1.材料枯草芽孢染色涂片。金黄色葡萄球菌涂片。酵母菌染色涂片。 2.用具：显微镜、二甲苯、香柏油、镜头纸、物测微尺、目测微尺。,三、实验材料和用具,（一）显微镜的使用1.取镜和安放 右手握住镜臂，左手托住镜座。 把显微镜放在水平的实验台上，略偏左（显微镜放在距实验台边缘7厘米左右处）。,四、实验方法,2.低
4、倍镜的操作置显微镜于固定的桌上，接通电源，打开光源。将标本片放在载物台上，是观察的目的物处于圆孔的正中央。将粗准焦螺旋向下旋转，眼睛在测向注视物镜，防止物镜和载玻片相碰。张开双眼向物镜里观察，如果见到目的物，但不十分清楚，可用细准焦螺旋，至目的物清晰为止。注意观察时两眼应同时睁开。使用单筒显微镜，应习惯用左眼观察，以便绘图。,四、实验方法,3.高倍镜的操作使用高倍镜前，必须先用低倍镜观察，发现目的物后将它移至视野正中处。旋动转换器换高倍镜。如果高倍镜触及载玻片立即停止旋动，这说明原来低倍镜并没有调准，目的物并没有真正找到，必须用低倍镜重新调节。如果高倍镜下观察目的物有点模糊，调节细准焦螺旋，直
5、到视野清晰。调节细准焦螺旋时要注意旋转方向与载物台上升或下降的关系，防止镜头与载玻片强力接触，损坏镜头或载玻片。,四、实验方法,4.油镜的操作如果用高倍镜目的物未能看清，可用油镜。先用低倍镜和高倍镜检查标本片，将目的物移到视野正中。在载玻片上滴一滴香柏油（或液体石蜡），将油镜移至正中使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片。用细准焦螺旋微微向上调（切忌不用粗准焦螺旋）即可。油镜观察完毕，用油镜纸将镜头上的油揩净，另用擦镜纸蘸少许二甲苯揩拭镜头，再用擦镜纸揩干。,四、实验方法,5.显微镜使用注意事项,.显微镜应置于平坦的桌面上。 .将标本片夹在显微镜载物台的十字夹中，注意要正面向上。 .先用低倍镜再用
6、高倍镜观察寻找目的物，此时要控制视野不能太亮，注意区别镜头上的灰尘和目的物。 .在标本中央滴加一小滴香柏油，从镜筒侧面观察，将油镜（100）轻轻旋下，使它浸在香柏油内。切勿猛烈的将镜头压在标本片上，防止损坏物镜！,四、实验方法,.将眼睛移至目镜，一边观察一边慢慢旋动粗准焦螺旋，将载物台上提。当见到物象时，再用细准焦螺旋调至图像清晰。对于单目显微镜，使用油镜时要将聚光器尽量上升，虹彩光圈放大。 .注意在旋动粗准焦螺旋时，必须特别小心。决不能在观察时将载物台很快提升，以免损伤螺旋。 .假如用油镜时一再看不清目的物，可验看油中是否存在气泡。如存在气泡，可将镜头及标本片上的油擦去，重新滴加。,四、实验
7、方法,.观察完毕后，下降载物台，取下标本片，用干净的擦镜纸蘸少量的二甲苯，轻揩去载玻片上的香柏油后，立即用干擦镜纸揩干。 .收存显微镜时，应将最短的镜头对准透光孔，或将物镜的长镜头转成“八”字式，使两个镜头同时搁在载物台上。切勿将长镜头对准透光孔，以免与聚光器相碰而损坏。镜台、镜身上占有水及污物，必须及时擦去。然后套上显微镜罩，对号放入显微镜箱中锁好。,四、实验方法,（二）微生物测微,1.分别在低倍镜、高倍镜和油镜下进行目测微尺的标定。2.菌体大小的测量将物测微尺取下，换上标本片，选择适当的物镜测量目的物的大小，分别找出菌体的长和宽占目测微尺的格数，再按照目测微尺1格的长度算出菌体的长度和宽度
8、。用目测微尺测量微生物的大小。即可算出标本（菌体）的大小。,四、实验方法,1.在低倍镜、高倍镜和油镜下观察标本片2.测量菌体的大小在高倍镜下测量酵母的大小(测1020个菌，求平均值)。在油镜下测枯草芽孢杆菌的长与宽，测金黄色葡萄球菌的直径(测量1020个菌体求平均值)。在低倍镜下求出目测微尺每格长度后，再用同法求出在高倍镜下和油镜下(物测微尺上需加1滴香柏油)目测微尺每格的长度。,五、实验内容,1.绘出油镜下的枯草芽孢染色涂片、金黄色葡萄球菌涂片，高倍镜下酵母菌染色涂片。2.微生物大小的测量的结果填入下列空白 在低倍镜下：目镜测微尺（ ）格镜台测微尺（ ）格 目镜测微尺每格（ ） m 在高倍镜
9、下：目镜测微尺（ ）格镜台测微尺（ ）格 目镜测微尺每格 （ ） m,六、实验报告,在油镜下：目镜测微尺（ ）格镜台测微尺（ ）格 目镜测微尺每格 （ ）m 枯草杆菌在油镜下：长目镜测微尺（ ）格 （ ）m 宽目镜测微尺（ ）格（ ）m 金黄色葡萄球菌在油镜下：直径目镜测微尺（ ）格= （ ）m 酵母菌在高倍镜下：长目镜测微尺（ ）格 （ ） m 宽目镜测微尺（ ）格 （ ） m,六、实验报告,1.使用油镜时为什么要先用低倍镜和高倍镜检查？2.试述显微镜成像原理并作图表示之。3.油镜使用时为什么一定要浸在香柏油里？4.在使用油镜时应怎样控制聚光器与光圈？5.为什么目测微尺必须用物测微尺标定?,七、思考题,
