1、流感病毒在体内的免疫反应过程,Outline,一、非特异性免疫应答二、特异性免疫应答三、小结四、免疫反应的验证,流感病毒的结构,根据核蛋白和基质蛋白的抗原性,流感病毒可以分成甲(A)、乙(B)、丙(C)三种类型,其中甲型流感病毒根据其表面血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)分成许多亚型。,Outline, Logo,一、非特异性免疫应答,流感病毒感染的早期，首先引起 防御屏障 吞噬细胞 干扰素 NK细胞 等为主的非特异性免疫, Logo,一、非特异性免疫应答, Logo,一、非特异性免疫应答, Logo,二、特异性免疫应答,细胞免疫应答, Logo,二、特异性免疫应答,细胞免疫应答, Logo,
2、二、特异性免疫应答, Logo,病毒中和抗体: 该抗体能与细胞外游离的病毒结合，封闭其细胞受体结合的病毒抗原表位或改变病毒表面抗原构型，阻止病毒吸附、侵入易感细胞，但不能直接杀灭病毒。 血凝抑制抗体:表面含有血凝素的流感病毒可刺激机体产生血凝抑制抗体，该抗体能中和病毒的感染性。 补体结合抗体: 此类抗体不能中和病毒感染性，但可通过调理作用增强巨噬细胞的吞噬作用。,二、特异性免疫应答,体液免疫中的抗体：, Logo,总之，机体抗流感病毒免疫应答由非特异性免疫应答和特异性免疫应答共同来完成。非特异性免疫先于特异性免疫发生，主要通过屏障结构、非特异性免疫细胞(吞噬细胞、NK细胞)和体液免疫分子(补体
3、、干扰素)等发挥抗病毒作用。特异性免疫是建立在非特异性免疫的基础上，受流感病毒抗原的诱导而发生。但特异性免疫的作用更强烈、更有效、更具有针对性。主要通过细胞免疫和体液免疫发挥特异性抗流感病毒作用。,三、小结, Logo,流感病毒多种多样，但只要感染过同一种病毒发生了感冒，之后再感染同一类病毒时就不会感冒了。这是因为免疫记忆。用同一抗原再次免疫时，可引起比初次更强的抗体产生，称之为再次免疫应答或免疫记忆，无论在体液免疫或细胞免疫均可发生免疫记忆现象。在体液免疫时，对TD抗原的再次应答可表现为抗体滴度明显上升，免疫球蛋白类别可由IgM转换为IgG，而且抗体亲和力增强。提示再次应答不仅发生抗体量的变
4、化，而且也发生了质的变化。实验证明，免疫记忆的基础是免疫记忆细胞的产生。,三、小结, Logo,（1）IgA的检测 原理：病毒首先侵袭呼吸道黏膜， 而黏膜表面的分泌性 IgA 可以有选择的转移到黏膜表面， 能够结合病毒防止其粘附和进入。因此，只需检测IgA 的变化即可证实是否为免疫反应。,四、免疫反应的验证, Logo,方法： 将小鼠随机分 2 组，设病毒组和正常组。 在乙醚轻度麻醉下， 滴鼻感染 15 滴LD 50 流感病毒液，感染后 5 天， 杀剖小鼠， 称体重和肺重测定肺指数。采血分离血清， 收集鼻咽冲洗液、 支气管肺泡灌洗液、 肠道冲洗液进行 ELISA法检测 IgA 含量。,四、免疫
5、反应的验证,四、免疫反应的验证,（2）外周血IL-12水平的检测 原理：白细胞介素12又称NK细胞刺激因子(NKSF)。IL-12主要由单核巨唾细胞、NK细胞和B细胞分泌,主要生物学活性有:促进激活的T细胞和NK细胞的增殖;增强Th细胞、NK细胞、LAK细胞及CTL的生物学活性。诱导Tn向Th1分化,并促进Th1的增殖和发育,与IL - 4共同调节Th1/Th2平衡,调节机体的免疫应答。, Logo,实验对象： 1、健康对照组：收集XX医院健康体检者20名 2、流感症状组：收集XX医院明确诊断的流感症状患者26名；经rRT-PCR方法确定为非甲型HlNl流感病毒感染 3、轻症甲流组：收集XX医
6、院诊断明确甲型H1N1流感病毒感染住院患者29名;经rRT-PCR方法确诊为甲型 H1N1病毒感染，症状较轻 4、重症甲流组：收集XX医院明确诊断甲型H1N1病毒感染住院患者名13名;经rRT-PCR方法确定为甲型H1N1病毒感染,并且症状较重,四、免疫反应的验证,实验过程： 实验前准备:板条包被 ELASA法测定检测物浓度,四、免疫反应的验证,结论：流感病毒感染呼吸道后,通过呼吸器官上皮细胞感染其下方树突状细胞和巨唾细胞并且在这些细胞中传播,树突状细胞和巨嗟细胞可以分秘抗病毒的细胞因子例如TNF-、IL-12、IL-18等来协调有效的先天免疫反应来对抗病毒。,四、免疫反应的验证, Logo,（3）外周血T淋巴细胞亚群及B、NK细胞百分率的测定 步骤：1. 标本采集及制备2. 染色及固定细胞3. 流式细胞仪上T淋巴细胞亚群及B、NK的检测及分析,四、免疫反应的验证,结论：正常情况下CD4+T/CD8+T比值维持动态平衡,保持机体免疫机能稳定,是细胞免疫功能状态的重要指标。甲型H1N1流感病毒可能是通过引起外周血中B、CD4+T、CD8+T细胞的减少,而影响机体的体液免疫和细胞免疫,并最终影响机体对病毒的适应性免疫反应。,四、免疫反应的验证,Thank You !,
