1、生药学实验指导汤俊 罗毅 刘一品 编武汉大学药学院2014.9- 2 -目 录实验须知生药学实验规则实验报告的书写与格式实验部分实验一 显微标本的制作与植物细胞的显微结构5实验二 细胞壁及细胞后含物的检识8实验三 次生分生组织、基本组织和保护组织特征及相关生药显微鉴别9实验四 分泌组织、机械组织、输导组织特征及相关生药显微鉴别10实验五 根组织特征及根类生药鉴别11实验六 茎、根茎和叶组织特征及相关生药显微鉴别13实验七 常用生药的一般性状描述15实验八 几种生药的性状与显微鉴别及微量升华实验17实验九 生药学设计性实验:未知生药粉末的鉴别20实验十 生药学综合实验:生药质量标准的制订21附录
2、1. 常用试剂的配制和使用242. 生药的显微化学反应243. 若干中药微量升华物特征比较264. 植物细胞壁的特化265. 绘图方法与要求276. 2010 年版中国药典 I 部附录药材和饮片检验通则 31- 3 -实验须知生药学实验规则(一) 实验目的 通过实验加深理解,复习巩固课堂所学理论,学会鉴定生药的真伪、优劣的方法,通过基本理论的学习和基本技术的训练,掌握生药的经验鉴别方法和现代科学的鉴别方法,培养实际的工作能力和严肃认真的科学态度。(二) 实验主要内容 1 原植(动)物组织的形态、显微观察,学习鉴定生药的植(动)物来源;2 学习性状鉴定的经验鉴别方法,主要用眼看、手摸、鼻闻、口尝
3、、水试、火试等手段,鉴别生药的形、色、气、味、质地、断面等特征,判断生药真伪和优劣;3 显微鉴定是指将生药制成不同的显微制片,用显微镜观察其组织构造、细胞形态以及内含物的特征,判断生药真伪的鉴定方法;4 理化鉴定是指利用生药所含的某种或某类化学成分,通过物理或化学性质来鉴定生药的真伪、优劣的一种鉴定方法。(三) 实验注意事项1 进实验室前,必须预习实验内容,明确实验目的,了解实验的基本原理、内容和方法。准备好各种自备的实验用品,如:铅笔(H 、HB 各一支) 、橡皮擦、直尺、报告纸等。2 实验中应保持安静,严禁抽烟、饮食,不许大声喧哗,不得擅自离开操作台。3 实验要严肃认真,精力要集中,观察仔
4、细,真实记录。4 实验开始前,教师进行讲解和提问时,应注意听取,并做好必要的记录。5 实验过程中,应当随时将观察所得现象、测量和称量的数据及结果等写在报告纸上,应当养成能随时作出准确、清楚、整齐的记录而不需要誊抄的良好习惯,测量和称量数据,禁止用另外纸片记录。6 实验中应爱护显微镜和一切工具,不得随意浪费实验材料和药品;实验室桌面应随时保持整洁,非实验必要物品一律不许放在桌面或桌架上。7 实验报告必须在实验室内完成,不得抄袭;实验完毕时,按时交实验报告。8 每次实验完毕后,把实验用仪器、用具等收拾干净放在指定的位置。切片要从载物台取下,归还切片盒内,桌上一切用具应拭洗干净,并归还原处。学生轮流
5、值日,值日生负责最后清扫实验室地面、清理桌面、擦净黑板及指定的其他工作。离开实验室前一定要检查水源、电源、门窗等是否关好。- 4 -实验报告的书写与格式(一)实验报告的书写要求1 按照每次实验报告的要求,在纸上绘图或写成报告。2 实验报告要求条理清楚、重点突出、结论准确。3 绘图的实验报告,要求书面布局合理、图形真实、结构清晰。绘图时,估计每次实验中需绘图数目的多少,在纸上适当分配绘图位置,图的排列要求整齐清洁。4 绘图要求线条流畅、粗细均匀、明暗一致。5 所绘组织简图各部分的表示应遵循通用的代表符号。6 绘完图后,用细直、均匀的平行直线从图的右边引出,对齐,注明各结构名称,可以直接用文字,也
6、可以用数码代注,或在图下说明。7 每一幅图都应在其下方注明药材的名称、部位以及放大倍数。8 绘图时应力求真实,字体端正,不得抄袭书本或他人作业。(二)实验报告格式1. 实验名称2. 实验目的3. 实验过程及数据、现象记录4. 实验数据分析、误差分析、现象分析(如有)5. 回答思考题- 5 -实验一 显微标本的制作与植物细胞的显微结构一、目的要求:1了解显微镜的构造,掌握使用显微镜的方法;2学习并掌握显微标本的制作(临时装片)方法及植物细胞的基本构造;3学习显微绘图的方法。二、实验仪器与材料:1仪器 显微镜、镊子、解剖针、刀片、载玻片、盖玻片、培养皿、吸水纸、酒精灯2试药 蒸馏水、水合氯醛、稀甘
7、油、乙醇3材料 洋葱、党参、夹竹桃叶、大黄粉末三、内容与方法:(一)显微镜的构造机械部分1镜座:显微镜的基底部分,常为马蹄形,用以固定支持全镜。镜柱:连于镜座的直立支持部分。镜臂:装于镜柱上,镜柱与镜臂之间有一倾斜关节,可使镜臂转动,中部稍弯曲,为握取部分,上端与镜筒附着器相连。调节轮:是调节镜筒升降的齿轮,分大小两种,装在镜附着器两旁较大的一对为大调节轮,顺时针(向内)方向转动。镜筒下降。逆时针(向外)方向转动。镜筒上升,旋转一周,可使镜筒升降 10mm的距离。小调节轮装在大调节轮的下方,旋转一周,只使镜筒升降 0.1mm 的距离。 (注意:小调节轮构造精细。不宜转动过多,操作时先用大调节轮
8、调至看到标本后,再用小调节轮调至正确的焦点) 。转换器:装在镜筒的下方,具有安装接物镜的孔,转动转换器,可以更换接物镜。载物台:放置标本的方形或圆形平台。中央有一透光孔。台上有压片夹或机械推进器,用以固定和调节玻片的位置。2光学部分:镜筒:为中空的圆筒,以镜筒附着器与镜壁相连,其上端的孔放入接目镜,下端装有转换器。接目镜:装在镜筒的上端,点上刻有 5、10、15 等字样,表示放大倍数。观察时镜中所见的范围,称为视野。接物镜:装在转换器上,通常有三种,低倍镜(5、8、10、15) ,高倍镜(40、45 、60等) 。油镜(100) 。放大倍数等于接目镜和接物镜放大倍数的乘积。聚光器:位于载物台下
9、方,用以聚集来自反光镜的光线,使照射于标本物体上,聚光器常可上下移动,器中装有虹光圈操纵杆,可使虹彩光圈口径缩小或扩大,以调节光线,光线强时,降低聚光器或缩小光圈,光线弱时上升聚光器或放大光圈。有些显微镜没有聚光器,只有虹彩光圈或以光圈板代替虹彩光圈的。反光镜:为一圆形双面镜,有活动关节,能够转动,用以收集来自不同方向的光线,射于聚光器上,在光线强时使用平面镜,光线弱或用主倍镜时使用凹面镜。- 6 -(二)显微镜的使用低倍镜的使用:1从镜箱中取出显微镜时,以右手执镜壁,左手托镜座,镜筒直立向上,将显微镜平置于桌上座位的左前方,距桌旁二寸左右。2旋转转换器,将低倍接物镜对准载物台圆孔,用左眼(右
10、眼也张开)在接目镜上观察,将反光镜转向光镜,并调节光圈,达到视野光线清晰明郎,成为均匀的白光。3用肉眼在玻片标本上找到检视物,然后将玻片标本置于载物台上,使检视物对准透光孔,用压片夹将玻片固定。4从侧面观察物镜与玻片之间的距离,顺时针方向转动大调节轮,使低倍镜几乎到达玻片(切勿使接触,以免损坏镜头及玻片) 。然后在接目镜上观察,再慢慢逆时针方向转动大调节轮至看到放大的物象,若所观察部分不在视野中心,则移动玻片,使之适中,转动小调节轮,直至物象最明晰为止。5在视野中看到的是检视物的倒象,因此在移动玻片时要向相反的方向移动。高倍镜的使用:1在低倍镜找到物像后,将需要放大部位移至视野中央。2从侧面观
11、察。转向转换器。转换高倍镜(若物镜太长,则提主镜筒再转换。以免损坏镜头或压破玻片) 。这时如果已能看到模糊的物象,则微微转动小调节轮,便可看见清晰的物象。(三)使用显微镜的注意事项1携镜时,必须右手握紧镜壁,左手托住镜座,切不可一只手提取。2放置显微镜时要轻,勿离桌边太近,镜体的倾斜度不得超过 30,以防止倾倒坠地。3勿使污物,水、药品等沾污镜的各部分。保持显微镜的清洁,不得用手或纱布擦镜头,须用擦镜纸细心抹擦。4观察新鲜材料时,要盖盖玻片;加热的玻片,须放冷后才观察。5用高倍镜时,用毕后,先转开物镜,然后撤除玻片。6显微镜用毕后,撤下玻片。转动转换器,使两物镜呈现“八”字形,然后下降镜筒,使
12、物镜与载物台相接,竖直反光镜,然后放入镜箱。(四)显微标本片的制作1. 徒手切片法:为生药显微鉴定的常用制片方法之一。本法操作简便,节省时间,只须一刀片即可切成薄片,不染色或经简单染色,用水封片后观察,具体方法如下。取新鲜材料或预先固定好的或软化的材料一段,长约 2cm;坚硬的材料可用水煮、50乙醇:甘油(1:1)浸泡,软化后再切片。若材料过软时,则可置 70 95乙醇中浸泡 20-30min。切片时,以左手的拇指和食指夹住材料,中指顶住材料的底部,左臂贴身,左手固定不动,将材料上端露出食指约23mm,不宜过长,用右手的拇指和食指挟持刀片的两侧,使刀片呈水平方向(与材料横切面平行)移动右臂使刀
13、口向内自左前方,向右后方拉削,便可切成薄片,切勿来回拉锯,要一次切下,中途不能停顿,切时可先在材料切面或刀刃上润湿,切下的薄片用湿毛笔刷下放入有水的培养皿中备用,选取最薄的切片放在载玻片上观察,也可用 0.1番红溶液给细胞核及木质化、栓质化的细胞壁染色后,再观察。刀片用后立即擦干水分或再涂上液体石蜡,下次备用。试以党参进行如上实验。2表面制片法本法适用于观察叶片、花萼、花瓣、雄蕊以及浆果、草质茎及根茎等的表皮显微特征。较薄的材料可整体封藏,其他材料可撕取或削取表皮制作。若为干的材料如较薄的叶(如薄荷叶) 、花类生药可用冷水浸泡至能伸展、恢复原样后,用刀片在表面轻轻浅划一刀,用小镊子从切口处撕取
14、表皮,切去带表皮下部组织的那部分表皮。若为较软的浆果类,可直接削取表皮;如较硬的则需要软化处理。最后用水- 7 -合氯醛试液透化,加甘油封藏。试以夹竹桃叶或薄荷叶进行如上实验。3粉末制片法本法用于制备粉末状生药、以生药粉末制备的中成药及其原料药材粉末的显微鉴定制片法,是生药显微鉴别中最常用的制片方法之一。一般是先将药材烘干、粉碎,过 5-6 号筛。取粉末适量( 约半粒大米粒大小) ,加水(不透化,观察淀粉粒),或加水合氯醛,加热、透化,再加稀甘油(观察细胞、草酸钙结晶等后含物),或加乙醇(观察橙皮苷或菊糖团块 )。试以大黄粉末进行如上实验。4注意事项制好的临时标本片,要求封藏剂适度,不足时,可
15、用滴管从盖玻片的边缘滴加少许,盖玻片边缘多余的液体,可用吸水纸从玻片的一端吸去。(五)植物细胞的显微结构将载玻片和盖玻片用纱布拭净,一般以右手的拇指和食指拿纱布。夹住盖玻片的上、下两面来回擦,因盖玻片薄,容易破损,因此用力要轻、要均匀。用吸管吸蒸馏水一滴于载玻片上,然后用镊子从洋葱鳞叶的内侧凹面上撕出表皮一小块,平铺水滴中,材料如有卷曲或重叠,可用解剖针摊平,然后盖上盖玻片,盖盖玻片时,将玻片的一边贴着水滴的边缘慢慢放下,避免产生气泡,此时,水液均匀地充满盖玻片下面的面积,如有过多的水液流出,即用吸水纸吸去如水液太少,不能充满玻片下面的面积,可用滴管从盖玻片边缘小心地渗入少量水液。先在低倍镜下
16、检得,并全面观察,可见众多的表皮细胞整齐排列,再将低倍镜下较清晰部分移至视野中央,然后用高倍镜仔细观察表皮细胞的形态结构。洋葱鳞叶表皮细胞的基本结构:(1)细胞壁 细胞壁位于细胞的最外圈,由中胶层和初生壁组成。(2)细胞质 细胞质呈一薄层,位于中央液泡与细胞壁之间,半透明,在一般光学显微镜下不易察见。(3)细胞核 细胞核位于细胞质内,注意核的数目和形状。核内有一至多个折光性较强的核仁。(4)液泡 液泡位于细胞的中央,占据细胞腔内较大体积,液泡内充满透明的细胞液,与细胞质难以区分界限。(六)绘生物图应注意事项1绘图前,先将玻片标本观察清楚,根据需要绘图的数量和大小,在图纸上适当安排各图,并留下注
17、字位置,所绘的图不必与所观察的标本大小一致,可视需要,按一定的比例放大或缩小。2用削尖的 H 铅笔,在纸上轻轻绘出图形轮廓,长宽比例,然后用清楚的、连续的、光滑均匀的线条绘出详细结构,颜色深浅部分或明暗之处,可用疏密细圆点表示,不要绘上排线或阴影,打圆点必须将铅笔削尖,不能绘成短线或逗点。3绘图时注意保持纸面的清洁,尽量少用橡皮,绘图纸只绘一面,不要绘两面。4图的各部分名称,一律用铅笔在右方以平行横虚线用正楷字体注明。5. 具体绘图方法与要求参见本书附录。四、作业:绘洋葱鳞叶表皮细胞三个,示明细胞壁、细胞质、细胞核和液泡。五、思考题:1. 临时装片有哪几种方法?透化的目的是什么?用水合氯醛透化
18、时应注意什么?2. 试述显微绘图的方法与要求。- 8 - 9 -实验二 细胞壁及细胞后含物的检识一、目的要求:1. 了解植物类生药各种特化细胞壁的检识反应并掌握其鉴别方法2. 掌握植物类生药细胞后含物(包括主要贮藏物质、草酸钙结晶)的形态特征及检验方法;二、实验仪器与材料:1. 仪器 显微镜、镊子、解剖针、刀片、载玻片、盖玻片、培养皿、吸水纸、酒精灯2. 试药 蒸馏水、95乙醇、稀甘油、稀碘液、- 萘酚、浓硫酸、水合氯醛、盐酸、醋酸、间苯三酚、苏丹 III 试液3. 材料 党参、桔梗;半夏粉末、川贝粉末、马铃薯块茎、桔梗粉末、大黄粉末、甘草粉末;怀牛膝根横切面永久制片三、内容与方法:(一)细胞
19、壁的检识反应1. 木质化细胞壁:取党参根横切一薄片,置载玻片上,加间苯三酚一滴,放置片刻,取盐酸一滴,盖上盖玻片,抹去盖玻片周围的试剂,镜检,可见木质化细胞壁染成红色或红紫色。2. 木栓化细胞壁:取党参根横切一薄片,置载玻片上,加苏丹 III 试液 12 滴,放置 510 分钟(此期间加苏丹 III 2 次)或微微加热,盖上盖玻片,镜检,可见木栓化细胞壁染成橙红色。3. 角质化细胞壁:取夹竹桃叶横切一薄片,置载玻片上,加苏丹 III 试液 12 滴,放置 510 分钟(此期间加苏丹 III 2 次)或微微加热,盖上盖玻片,镜检,可见叶的表皮细胞外被染成橙红色的一薄层,即为角质层。(二)细胞后含
20、物的检识1. 淀粉粒:取半夏、川贝的粉末少许,分别置载玻片上,用稀甘油或甘油醋酸溶液装片:观察淀粉粒的形状和脐点,并注意辨认单粒、复粒和半复粒。用刀片刮取马铃薯块茎切口上的少许破碎组织或混浊液汁,放在载玻片上,加稀甘油 1 小滴,加盖玻片,观察淀粉粒的形状、大小、脐点、层纹、单粒和复粒、滴加稀碘液一滴,观察有何变化?2. 菊糖:取桔梗粉末或桔梗横切片,用水合氯醛试液装片(不加热) ,置显微镜下观察,可见薄壁细胞内,靠近细胞壁分布有球形、半球形或扇形的菊糖结晶。再加 10% -萘酚乙醇试液 1 滴,浓硫酸 1 滴,稍加热,菊糖显紫色并很快溶解。3. 草酸钙晶体:分别作半夏粉末与甘草粉末的水合氯醛
21、透化片。方法:取粉末少许,放在载玻片上,滴加水合氯醛液 2 滴,在酒精灯上徐徐加热到将近沸,加热过程中要避免蒸干,可添加水合氯醛溶液,反复至材料的颜色变得较浅而透明时,停止处理。加稀甘油一滴,盖上盖玻片,抹去盖玻片周围的试剂,分别观察并记录粉末中所含的针晶与方晶。取大黄粉末少许,稀甘油装片,观察并记录其细胞中所含簇晶。加 6%醋酸溶液 2 滴,观察晶体有何变化? 另外装片后加入稀盐酸,晶体有何变化?另取怀牛膝根横切片观察薄壁细胞中的砂晶。四、作业:1. 绘半夏、川贝、马铃薯的淀粉粒形态图(包括单粒、复粒和半复粒) 。2. 分别绘出半夏、甘草、大黄粉末和怀牛膝根中所含的晶体形态图。- 10 -五
22、、思考题:大黄粉末中的草酸钙簇晶在分别加入 6%醋酸和稀盐酸溶液后有何变化?实验三 次生分生组织、基本组织和保护组织特征及相关生药显微鉴别一、目的要求:1了解次生分生组织、基本组织和保护组织的形态特征及其在植物体内存在的部位;2学习有关生药的显微鉴别方法。二、实验仪器与材料:1仪器 显微镜、镊子、解剖针、刀片、载玻片、盖玻片、培养皿、吸水纸、酒精灯2试药 蒸馏水、稀甘油、水合氯醛试液3材料 黄连横切制片、马铃薯块茎制片、厚朴皮横切制片、石菖蒲横切制片、麻黄茎横切制片、薄荷叶横切片,女贞叶、石韦、金银花三、内容与方法:(一)次生分生组织1木栓形成层,观察黄连横切制片,可见茎的外层染色较深,为木栓
23、层,其内方有 24 层整齐放射排列的细胞(染成橙红色)为木栓形成层区,其中最扁平的一层细胞,细胞壁薄,细胞质浓厚,有的可见细胞核,此为木栓形成层(次生分生组织)它向外分裂产生木栓层,向内分裂产生栓内层(三者合称周皮) 。2形成层:观察黄连横切制片,可见韧皮部(染成绿色)和木质部(染成红色)之间有 24 层小而扁平的细胞,排列整齐、紧密,细胞壁薄,此为形成层区(次生分生组织) ,它向外分裂产生次生韧皮部,向内皮裂产生次生木质部。(二)基本组织1贮藏薄壁组织:取马铃薯茎横切制片镜检,可见薄壁细胞中含有众多淀粉粒,细胞群为贮藏薄壁组织。2同化薄壁组织:女贞叶徒手切片,用稀甘油装片,镜检,可见叶肉细胞
24、中含有众多叶绿体,为同化薄壁组织。3通气薄壁组织:取石菖蒲根茎横切制片,镜检,可见薄壁细胞作圆链状排列,有大型细胞间隙,为通气薄壁组织。(三)保护组织1表皮组织(初生保护组织):观察麻黄茎横切制片,可见最外层细胞排列紧密,整齐、即为表皮、在表皮细胞加厚的外切向壁上染成橙红色者为角质层,起保护作用,有时可见气孔的切面观。2气孔及气孔类型:取薄荷叶横切片,镜检,可见气孔。3腺毛和非腺毛:取薄荷叶横切片,镜检。腺毛:一为单细胞腺头和单细胞柄,或为多细胞腺头或腺柄。腺鳞:其头- 11 -大,扁球形,多由 68 个作辐射排列的分泌细胞组成,周围有角质层,其与分泌细胞之间贮有挥发油、柄极短。取石韦生药,用
25、小刀刮取部分表皮组织,稀甘油装片,镜检,可见星状毛;另取金银花,同法检验,主要为非腺毛。4木栓组织和皮孔,观察厚朴皮横切制片,注意区别木栓层,木栓形成层和栓内层,并找出呈裂隙状的皮孔。四、作业:1. 详绘薄荷的气孔图,示明气孔轴式,标出保卫细胞和副卫细胞。观察并绘腺毛、非腺毛和腺鳞。2. 简绘本实验各生药要求观察的组织简图。五、思考题:1木栓化细胞壁和角质化细胞壁均被苏丹 III 试剂染成橙红色,你如何区别角质化细胞壁的细胞和木栓细胞?2次生分生组织的形态特点是什么?它存在于植物体的哪些部位?分生组织与植物的生长有何关系?3. 如何区分气孔与皮孔?腺毛和非腺毛?表皮与周皮?实验四 分泌组织、机
26、械组织、输导组织特征及相关生药显微鉴别一、目的要求:1. 掌握分泌组织、机械组织及输导组织的形态特征;2. 了解外韧型、双韧型、周木型、周韧型、周木型和辐射型维管束;3学习有关生药的显微鉴别方法。二、实验仪器与材料:1仪器 显微镜、放大镜、镊子、解剖针、刀片、载玻片、盖玻片、培养皿、吸水纸、酒精灯2试药 蒸馏水、稀甘油、水合氯醛、墨汁、间苯三酚、盐酸3材料 生姜、半夏粉末、肉桂粉末、甘草粉末、黄柏粉末;杏仁;陈皮横切片、小茴香果实横切片、广藿香茎横切片、松茎纵向制片、石菖蒲根茎横切片、南瓜茎径向制片、南瓜茎纵切片、南瓜横切片、细辛根横切片、人参根横切片。三、内容与方法:(一)分泌组织1分泌细胞
27、(1) 油细胞:徒手切取鲜姜一薄片,用蒸馏水装片、镜检,可见有些薄壁细胞中含黄色油滴,此为油细胞。(2) 粘液细胞:取半夏粉末少许,加墨汁一滴,盖上盖玻片,镜检,可见粘液呈无色透明块状。粘液细胞中常含草酸钙针晶。其它细胞和细胞后含物均显黑色。2. 分泌腔(分泌囊):观察陈皮横切片,可见溶生性分泌腔(油室) 。3. 分泌道:- 12 -(1) 油管:观察小茴香果实横切片,可见果实由两个分果组成,分果接合面较平坦,有油管两个,分果背而隆起,有脊线(主棱) ,每两脊线间各有一油管,全部果皮中共有油管 6 个,油管椭圆形,其周围为红棕色扁小的分泌细胞所围绕。(2) 树脂道 观察人参根横切片,在韧皮部中
28、,有圆形或长圆形树脂道,内含黄色分泌物。(二)机械组织1厚角组织:观察广藿香横切片,可见表皮下数层细胞的细胞壁在角隔处增厚,为厚角组织。2厚壁组织:纤维:做肉桂粉末的水合氯醛透化片,镜检,其中纤维细胞呈长纺锤形,细胞壁厚,胞腔线形。晶纤维:做甘草粉末的水合氯醛透化片,镜检,可见纤维成束,其周围的薄壁细胞中有草酸钙方晶,此种纤维称晶纤维或晶鞘纤维。石细胞:割取杏仁种皮少许,做水合氯醛透化片,镜检,可见石细胞呈圆形、贝壳形、卵形或椭圆形,壁孔明显,或仅部分细胞壁有孔沟。取黄柏粉末少许,置载玻片上,加间苯三酚一滴,放置片刻,加盐酸一滴,再加甘油一滴,盖上盖玻片,置显微镜下观察,注意有哪些细胞的细胞壁
29、被染成红色?(三)输导组织:1管胞与导管:观察松茎纵向制片,可见管胞长管状,两端偏斜,壁上有成行排列的具缘纹孔。观察南瓜茎横切片,可见维管束呈分离束状,环状排列,木质部位于维管束的中央(染成红色) ,其外侧为外韧部,内侧为内韧部(均染成蓝色) ,木质部内有管径大小不等的孔,为导管的横切面观。观察南瓜茎纵切片,在木质部内可见导管分子的横壁消失,彼此相连成筒状,管壁有环纹、螺纹、孔纹木质化增厚、分别称环纹导管、螺纹导管和孔纹导管。2筛管与伴胞:韧皮部中筛管呈长筒形,可见筛板和筛孔,在筛管旁有较小的长形细胞,为伴胞。观察南瓜茎横切片,在内、外韧皮部中有多边形的细胞,为筛管的横切面观,其细胞壁薄,有的
30、可见筛板,筛板上有许多小孔为筛孔,在筛管旁边有呈三角形或四边形的小形薄壁细胞,此为伴胞。(四)维管束类型:1有限外韧维管束与周木维管束:取石菖蒲根茎横切片观察,可见维管束较多、散在,高倍镜下观察 1 个维管束,有些木质部和韧皮部之间没有形成层,木质部位于内侧,韧皮部位于外侧,此即有限外韧维管束;有些韧皮部在中间,木质部环绕在韧皮部的周围,此为周木维管束。2无限外韧型 取广霍香茎横切片观察,木质部和韧皮部之间有形成层,木质部位于内侧,韧皮部位于外侧。3双韧维管束 取南瓜茎横切片观察,可见木质部的内外两侧均有韧皮部。4辐射型维管束 取细辛根横切片(初生构造)观察,可见木质部分四原型,而韧皮部与木质
31、部相间排列,此即为辐射型维管束。四、作业:1. 详绘陈皮分泌腔图、甘草晶纤维图、杏仁种皮石细胞图;2. 绘本实验各生药要求观察的组织简图、不同维管束类型简图。实验五 根组织特征及根类生药鉴别- 13 -一、目的要求:掌握根的初生与次生构造,学习根类药材的显微鉴别方法。二、实验仪器与材料:1仪器 显微镜、镊子、解剖针、刀片、载玻片、盖玻片、培养皿、吸水纸2试药 蒸馏水、稀甘油3材料 细辛根横切片、射干根横切片、百部根横切片、人参根横切片、何首乌根横切片、怀牛膝根横切片、商陆根横切片三、内容与方法:(一)具初生构造的根1双子叶植物根的初生构造取细辛根横切片,置显微镜下,从外到内进行观察。(1)表皮
32、:为最外一层排列较整齐的细胞,在根毛区常有一些表皮细胞向外突出,形成根毛,表皮细胞在根加粗过程中,常被破坏。(2)皮层:位于表皮内方,占根的大部分。由多层排列疏松的薄壁细胞组成。紧靠表皮内方的一层细胞,排列整齐,并略呈切向延长,称外皮层,皮层最内方一层细胞,排列较紧密,凯氏点明显可见,称内皮层,外皮层和内皮层之间的多列细胞为皮层薄壁细胞,其内充满类球形的淀粉粒。(3)维管柱:为内皮层以内的所有组织,占根的小部分,包括中柱鞘、木质部和韧皮部。中柱鞘:为紧贴内皮层的一层薄壁细胞。木质部和韧皮部:初生木质部有四束(染成红色) ,为四原型。初生韧皮部位于两初生木质部束之间。与初生木质部相间排列,呈辐射
33、状。2单子叶植物根的构造:取直立百部根横切片,置显微镜下观察:(1)根被:由 34 列细胞组成,细胞壁木栓化。(2)皮层:占根的大部分,由薄壁细胞组成。皮层的最外一列细胞略呈方形,排列整齐,为外皮层,皮层的最内一列细胞较小,扁长形,可见凯氏点,为内皮层。(3)维管柱:为内皮层以内的所有组织,占根的小部分,包括中柱鞘,木质部,韧皮部和髓。中柱鞘:在内皮层内侧,由 12 列小形的薄壁细胞组成。木质部和韧皮部:木质部和韧皮部束各约 2427 个。相间排列。为辐射型维管束。髓:位于维管柱的中央,由排列疏松的薄壁细胞组成。另观察射干横切片,注意其内皮层与百部根的内皮层有何区别。(二)具次生构造的根:取人
34、参根横切片,置显微镜下观察。1木栓层:由数列排列整齐的长方形的木栓细胞组成。2木栓形成层:切片中不易分辨。3栓内层:为数列切间延长的大型薄壁细胞。木栓层、木栓形成层、栓内层三者合称周皮。4次生韧皮部较宽,由筛管和伴胞、韧皮纤维,薄壁细胞等组成,其中散有类圆形的分泌管。韧皮射的线弯曲,易与韧皮部组织分离而出现大型裂隙。5形成层(区):成环状,由数列排列紧密的扁平细胞组成。6次生木质部:位于形成层的内方,由导管、木薄壁细胞、木纤维及木射线组成。韧皮射线与木射线相连接,合称维管射线,多- 14 -为单列薄壁细胞,与初生木质部辐射棱相连的射线较宽,常由多列薄壁细胞组成。(三)具异常构造的根取何首乌块根
35、横切片,先对光观察,可见中央的维管柱、皮层较宽,其内散生异常维管束,形成云锦状花纹,然后置显微镜下观察:1木栓层由数列木栓细胞组成。2皮层较宽,占根的较大面积,主要由薄壁细胞组成,薄壁细胞中含淀粉粒和簇晶,皮层内散生单个的和复合的异常维管束,均为外韧型,可见形成层,导管稀少。3次生韧皮部狭小。4形成层环明显可见。5次生木质部导管稀少,初生木质部保留的根的中央,四原型。另取怀牛膝根横切片、商陆根横切片进行观察,记录根异常结构。四、作业:1. 详绘细辛根、人参根和何首乌块根横切面特征图。2. 简绘其他生药根组织特征图。五、思考题观察射干根横切制片,注意其内皮层与百部根的内皮层有什么区别?实验六 茎
36、、根茎和叶组织特征及相关生药显微鉴别一、目的要求:掌握茎、根茎和叶的组织特征,学习相关生药的显微鉴别方法。二、实验仪器与材料:1仪器 显微镜、镊子、解剖针、刀片、载玻片、盖玻片、培养皿、吸水纸2试药 蒸馏水、稀甘油3材料 枫香茎横切制片、广藿香横切制片、黄连根茎横切制片、玉米茎横切制片、石菖蒲根茎横切制片;薄荷叶横切制片、淡竹叶横切制片。三、内容与方法:(一)双子叶植物木质茎的次生构造取枫香茎横切片,置显微镜下观察,首先辨认形成层的位置。形成层以外称树皮,包括周皮、皮层、初生韧皮部、次生韧皮部,最外方有时可见表皮残存,形成层以内称木材,以次生木质部为主,也包括初生木质部和髓。1周皮:为外方数列
37、染成红棕色的,扁平的,辐射排列的细胞,它包括木栓层、木栓形成层和栓内层,有时可见皮孔。2皮层:在周皮内方,其外层为 45 列板状厚角组织,内层为薄壁细胞,有些细胞中含有簇晶。3初生韧皮部:在切片中不易察见。4次生韧皮部:由薄壁细胞、筛管和伴胞,韧皮纤维和石细胞组成。5形成层(区):成环状,由数列排列整齐 扁平的细胞组成。- 15 -6次生木质部:在形成层区的内方,由导管、木纤维、木薄壁细胞组成,注意年轮,区别早材(春材)和晚材(秋材) 。7初生木质部:位于生木质部的内方,量少,成束状,细胞小而密集,每束有一分泌道。8髓和射线:髓部位于茎的中央,由薄壁细胞组成。由髓部发出,与皮层相接的射线为髓射
38、线,在木质部和韧皮部中尚有木射线和韧皮射线。(二)双子叶植物草质茎的构造取广藿香茎横切制片。置显微镜下观察:1表皮:一列细胞,排列不整齐,有非腺毛,由 15 个细胞组成,表皮下有木栓细胞 35 列。2皮层:外侧皮层为数列厚角组织,内侧皮层为薄壁组织,有大型细胞间隙,内有间隙腺毛。腺毛常纵向排列。3维管束外韧型,韧皮部狭小,木质部于茎的四角处发达,由导管、木薄壁细胞和木纤维组成,均木化,形成层连接成环状。4髓:细胞较大,有时可见草酸钙针晶。(三)双子叶植物根茎的构造取黄连根茎横切制片,置显微镜下观察。1木栓层:由数列木栓细胞组成,有的外侧附有鳞叶组织。2皮层:为木栓层内方的十余列略呈切向延长的薄
39、壁细胞,内散有染成红色的单个或成群的石细胞,并有根迹维管束和叶迹维管束。3维管束:为无限外韧型,相连或分成 79 束环列,射线宽狭不一,韧皮部外侧有韧皮纤维或有少数石细胞,束间形成层不明显。木质部较发达。由导管,管胞、木薄壁细胞及木纤维组成,全部木化,染成红色。4髓:位于茎的中央,由薄壁细胞组成,细胞中含淀粉粒。(四)单子叶植物茎的构造取玉米茎横切制片,置显微镜下观察:1表皮:为最外方一列排列紧密的表皮细胞。有 13 列厚壁细胞,连接成环,为机械组织环。2基本组织:机械组织环以内的薄壁组织。3维管束:许多维管束散布在基本组织中,近茎边缘的维管束较小,相互距离较近,靠茎中央的维管束较大,相距较远
40、,维管束的韧皮部在外方,由筛管和伴胞、薄壁细胞组成;木质部在内方,由导管和木薄壁细胞组成,有一对并列的大导管。其下方有纵向排列维管束的周围有厚壁细胞组成的维管束鞘围绕。(五)单子叶植物根茎的构造取石菖蒲根茎横切制片,置显微镜下观察。1表皮:为一列类方形的表皮细胞,外壁稍增厚,有时可见鳞叶组织。2皮层:宽广,由薄壁细胞组成,靠表皮处常木栓化,薄壁细胞中含众多淀粉粒,外表层中有油细胞,纤维束和叶迹维管束散在,纤维束周围的薄壁细胞中含有草酸钙方晶,叶迹维管束有限外韧型,内皮层显著,凯氏点明显可见。3中柱:为内皮层以内部分,有多数周木型的维管束散生。紧靠内皮层处的维管束相互距离较近,且有少数为外韧型,
41、维管束周围有纤维组成的维管束鞘围绕。(六)双子叶植物叶的构造观察薄荷叶横切制片:1表皮:上表皮细胞长方形,下表皮细胞细小,扁平、上下表皮均有腺毛,腺鳞和非腺毛,可见气孔的切面观。- 16 -2叶肉:栅栏组织细胞一列,偶有二列,海绵组织由 45 列不规则的排列疏松的薄壁细胞组成,叶肉组织中有簇针状橙皮甙结晶。尤以栅栏组织中多见。3叶脉:主脉维管束外韧型,韧皮部(染成兰色)细胞较小,多角形,木质部(染成红色)导管常24 排列成行。注意韧皮部与木质部之间有无形成层。主脉处上、下表皮内侧有若干列厚角组织。除主脉外,尚可见侧脉和细脉的横切面或纵切面观,侧脉和细脉的结构较主脉简化。(七)禾本科植物叶的构造
42、观察淡竹叶叶片横切片。1表皮:上表皮细胞类方形,大小不一,壁较薄,有大形薄壁细胞,称运动细胞(泡状细胞) 。每组运动细胞排列略呈扇形,下表皮细胞较小,排列紧密整齐,壁较厚、上下表皮均可见到气孔。2叶肉:由一列短圆柱形薄壁细胞和排列疏松的不规则形薄壁细胞组成,内含众多叶绿体。3叶脉:主脉维管束外韧型,木质部下方有 13 列厚壁纤维隔离,维管束有由两列细胞组成的维管束鞘包围、内鞘为厚壁组织,外鞘为薄壁组织。四、作业:1详绘黄连根茎、石菖蒲根茎、薄荷叶横切面图。2简绘其他生药或植物的横切面图。实验七 常用生药的一般性状描述一、目的要求识别药材并掌握生药性状的一般描述方法。二、实验仪器与材料1仪器 显
43、微镜、镊子、解剖针、刀片、载玻片、盖玻片、培养皿、吸水纸、酒精灯2试药 蒸馏水、稀甘油3实验材料 黄连、三七、党参;天麻、元胡、麻黄、川木通;黄柏、杜仲、厚朴;番泻叶、石韦、大青叶;金银花、玫瑰花、辛夷花;山楂、马兜铃、枸杞子、女贞子、连翘;车前子、桃仁、苦杏仁;细辛,鱼腥草;茯苓、猪苓、海金沙;水蛭、地龙、全蝎、蜈蚣等。三、内容与方法首先判断和确定该生药属于根、茎、叶、花、果的哪一种;再根握各自的性状特点进行鉴别。(一)根及根茎类取黄连*、三七、党参,观察。1来源 判断是根、根茎、或是既有根又有根茎;是属于单子叶植物,还是双子叶植物或蕨类植物。2形态 园柱形,园锥形,纺锤形或不规则形等,是否
44、去皮、完整,纵切片或横切片;以及分枝情况(纤维状、块状、叉状或束状) 。3大小 注意长度、直径等。4表面特征 表面色泽、叶迹、皮孔、皱纹,以及有无鳞叶等。5质地与断面 质地坚或软、断面是否粉质、 平坦或纤维状、粗糙或平坦;- 17 -6横断面 色泽,皮层与中柱的比例(根)或皮部、木部及髓部的比例(根茎) ,射线的分布及排列,形成层明显与否以及排列情况等。7气和味 气芳香、微弱或特异,味苦、甘、咸、辛、辣、淡等。(二)茎类类似根茎。取天麻*、元胡、麻黄、川木通,观察。(三)皮类取黄柏、杜仲、厚朴*,观察。1来源 判断是茎皮或根皮。2形态 板片状、弯曲、槽状、筒状或是双筒状。3大小 注意长、宽、厚
45、度。4表面特征 观察外、内表面色泽,光滑程度,有无皮孔,凸凹沟纹等,皮孔的分布和形状如何。5质地与折断面 坚硬、软韧或松脆等;断面粉质,颗粒状、平坦或纤维状,有无丝状牵连、黏性等;6横断面 各部组织排列情况,界限是否清楚,比例、色泽。7气味 有无特殊臭气或味。(四)叶类取番泻叶*、石韦、大青叶,观察。叶类生药常破碎、皱缩,除了对其描述外,常挑选完整或比较完整的叶片在温水中软化展开后,再观察。1来源 判断其为单叶或复叶;是双子叶植物还是单子叶植物的叶。2形状 皱缩,破碎或完整,有无叶柄、托叶、叶鞘;以及叶端,叶基,叶缘、叶脉等形态。3表面特征 上、下表面色泽;光滑或有无毛茸、腺点等。4质地 草质
46、、革质、膜质、肉质等。5气味及其它。(五)花类取金银花*、玫瑰花、辛夷花,观察。1来源 是单花、花序或仅花的某一部分;是花蕾或已开放的花朵;双子叶植物还是单子叶植物的花。2花萼、花冠 整齐或不整齐;离瓣或合瓣,着生情况,色泽等。3雄蕊、雌蕊 数目、形状,着生情况,是单性花还是两性花等。4以花序入药的,注意花序类型。5气味及其它。(六)果实类取山楂*、马兜铃、枸杞子、女贞子、连翘,观察。1来源 单果、聚合果或复果,干果或肉果等。2形状 球形、扁球形、卵形、椭圆形等,长度、直径,厚度。3表面特征 色泽、有无缩萼、干缩后的皱纹、毛茸、棱角、肋线、凸凹情况。4质地 脆、坚、干燥或肉质,外果皮、中果皮、
47、内果皮的情况。5断面 子房室数,胎座类型,外果皮、中果皮和内果皮界限明显与否。6种子 有无、数目、形状、大小、色泽等。7气味及其它。(七)种子类- 18 -取车前子、桃仁、苦杏仁*,观察。1形状大小 圆球形、类球形或扁球形、肾形,心形等,测定长度、直径和厚度。2表面特征 纹理、突起、色泽及毛茸,脐点,合点,种脊、硬度等。3种皮 内、外种皮、色泽、质地等情况。4胚乳 胚乳有无、色泽等。5胚 位置、形状、大小及胚根、子叶等情况。6气味及其它。(八)全草类取细辛*,鱼腥草,观察。(九)动物类取水蛭*、地龙、全蝎、蜈蚣等。注意是动物的整体,部分或者分泌物等,描述其外形特征,以及大小、色泽、质地、断面和气味等。(十)其他取茯苓*、猪苓、海金沙,观察。四、作业对打星号的生药的性状全面观察,重点进行描述。五、思考题1怎样区别双子叶植物与单子叶植物的根茎?2根与根茎在生药形态上有何异同?实验八 几种生药的性状与显微鉴别及微量升华实验一、目的要求:1掌握不同药用部位生药的性状及显微鉴别方法;2掌握中药特征性成分微量升华的方法,并了解其在中药鉴别上的应用。二、实验仪器与材料:1仪器 显微镜、载玻片、盖玻片、吸水纸、酒精灯、蒸发皿、微量升华器等。2试药 蒸馏水、水合氯醛试液、稀甘油、30%硝酸、乙醇、盐酸、漂白粉、5% 没食子酸乙醇溶液、5%硫酸、碘化铋钾