1、实验三 网织红细胞计数、血沉测定及白细胞计数,一、网织红细胞计数,目的 掌握网织红细胞（Ret)试管法计数的原理及操作方法。 原理 网织红细胞胞质内残存少量核蛋白体及核糖核酸等嗜碱性物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝等染液活体染色后，呈蓝色网状或点状结构，可与成熟红细胞相区别。,器材 显微镜、试管、吸管、玻片、推片、香柏油、擦镜纸、擦镜液 试剂 新亚甲蓝 标本 新鲜全血,操作步骤,1.加染液 将Ret染液2滴加至小试管中，做好标记。 2.加血 在已加入染液的小试管内注入新鲜全血2滴，立即混匀。 3.染色 室温下染色10-15min。 4.涂片制备 取染色血1小滴推制成薄血涂片，自然干燥 5.观察 低倍
2、镜下选择红细胞分布均匀、着色好、背景清晰的部位进行计数。 6.计数 常规法：在油镜下计数至少1000个红细胞中的网织红细胞。 7.计算 Ret百分数=（1000个RBC中的Ret数/1000）100% 8.结果报告 网织红细胞百分数：X.X%,血涂片制备,推片,载玻片,血液,将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度。,一张满意的血涂片应厚薄均匀头 体 尾,涂片干燥后用铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号,李四,B 1 2 3,参考区间,成人、儿童：0.5%-1.5% 新 生 儿：2.0%-6.0%,注意事项,1.试剂准备 推荐使用新亚甲蓝染液，试剂应定期配制，用前过滤。 2.染色 染液与
3、血液比以1:1为宜,染色时间不能过短。试剂用后及时盖好盖子，以免挥发。 3.标本 应及时染色，及时测定。 4.计数 选择红细胞分布均匀，网织红细胞着色好的、背景清晰的部位计数。应兼顾血片边缘和尾部。,目的 掌握魏氏法测定血沉的原理及方法。 原理 将一定量的枸橼酸钠抗凝全血置于魏氏血沉管中，直立于血沉架上，由于红细胞比重大于血浆，克服血浆阻力而下沉，1h后读取上层血浆高度的毫米数，即为红细胞沉降率。 器材 魏氏管、血沉架、洗耳球。（血沉管） 试剂 109mmol/L枸橼酸钠溶液。 标本 外周血。,二、血液沉降率测定（魏氏法）,1.采血 采静脉血1.6ml加入含0.4ml 109mmol/L枸橼酸
4、钠溶液抗凝剂的采血管中（即采血量到采血管2ml刻度线处） ，混匀。 2.吸血 混匀血吸入血沉管内至刻度“0”处，拭去管外残余血。 3.立血沉管 将血沉管直立于血沉架上。 4.读数 1h末准确读取红细胞下沉后露出的血浆高度。 5.报告方式 XX mm/h,操作步骤,参考值50岁：男性 15mm/h女性 20mm/h50岁：男性 20mm/h女性 30mm/h85岁：男性 30mm/h女性 42mm/h儿童: 10mm/h,二、血液沉降率测定（魏氏法）,注意事项1.严格控制采血量，使抗凝剂与血液比例为1：4。2.血沉管应垂直放置，不得倾斜。 3.测量时，血沉架应避免直接光照、移动和振动。4.本实验
5、最适宜温度为1825，并要求在采血后 2h内完成。 5.红细胞沉降率在1h沉降过程中，并不是均衡等速度的沉降，绝不可以只观察30min沉降率，将结果乘以2作为1h血沉结果。,二、血液沉降率测定（自动血沉仪法）,白细胞计数,一、目的 掌握显微镜白细胞计数的方法。 二、原理 用白细胞稀释液将血液稀释一定倍数，同时破坏溶解红细胞。将稀释的血液冲入计数池后，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数。,三、器材 显微镜、改良计数板、血盖片、试管、微量 吸管、加样枪、乳胶吸头、纱布 四、试剂 白细胞稀释液 五、标本 EDTA盐抗凝血,六、操作,1. 加稀释液 用加样枪吸取白细胞稀
6、释液0.38ml于小试管中。 2. 加血 用清洁干燥微量吸管吸取抗凝血20l，擦去管外余血，轻轻加至白细胞稀释液底部，再轻吸上清液清洗吸管23次，混匀。 3. 充池 混匀后用微量吸管将细胞悬液冲入计数池，室温下平放35分钟，待细胞下沉后于显微镜下计数。 4. 计数 用低倍镜依次计数四角4个大方格内的白细胞数。 5. 计算 白细胞/L=N/41020106=N/20109/L 6. 报告方式 X.X109/L。,七、注意事项,1. 充池前应将白细胞悬液充分混匀。2.在充池时要一次完成，不能产生满溢、气泡或充池不足及充液后玻片移动的现象。3. 白细胞在计数池中若分布不均，各大方格间细胞计数不得相差8个以上，应重新计数。4. 白细胞数量过多时，可采取加大稀释倍数的方法。5. 白细胞稀释液不能破坏有核红细胞，它可使白细胞计数偏高，此时应计算白细胞校正值。,作业：1.如何区分网织红细胞和HbH包涵体？2.白细胞计数与红细胞计数的异同点？,
