1、如何做好临床科学研究,孙茂民 苏州大学医学部,科研的基本步骤,选题 设计 观察与实验 数据整理与分析,论文撰写与投稿,临床科研申请,一、选题 二、前言 三、立题依据 四、国内外现状 五、研究目标与内容 六、研究方法 七、现有研究条件 八、计划进度指标 九、研究经费预算,选题要求,选题必须力争做到鲜明、具体、确切，若能同时反映出“立意新颖”则属更佳。 目前，有些科研设计的选题尚不够理想，其中最常见的毛病，不是题目过大就是笼统模糊，有的甚至使人观后不解其意或者文题不尽符合。 例如，“中医疗法对结石病的疗效研究”若将前一立题改为“金钱草煎剂对肾结石病人排石效果的初步观察”或“金钱草浸膏对大鼠尿路结石
2、溶解作用的初步研究”之类，比原来的题目可能会更好一些。,选题三要素,在科研工作方面，对上述修改题目中的金钱草煎剂或浸膏称为“处理因素”、肾结石病人或实验动物大鼠称为“受试对象”；排石效果或溶石作用称为“预期效应”；处理因素（受试对象、预期效应是科研工作中的三个基本组成要素，因此在立题中应给予足够的重视，可能时应明确加以表达。 在拟定某些（而不是全部）研究课题的名称时，可适当考虑采用下列形式： 立题 处理因素（具体而不含糊）受试对象（明确而不省略）预期效应（限定而不笼统）工作定性（适当表达留有余地）,提出一个有待解决的问题，并且有一套借助文献资料和个人工作经验，经过分析、归纳、类比和推理等科学思
3、维程序而形成的科学假说及掌握证实这一假说的有效方法和实验手段。一个有待解决的问题问题一个对问题的理论解释假说一个证实理论的切实手段技术路线和方法,如何选题,1 有一个待解决的问题特定的目的申请人可以既根据个人的专长，又根据当前国内外自己所熟悉的科学前沿进展确立科研选题选题所研究的内容和提出的总是前人没有研究和涉及的填补某一科学领域中的一些空白。前人对此问题虽有研究，但本人在选题中提出新的实验结果和事实资料，对既往的理论认识有所发展和补充。国外对此问题早以有过一些资料，但尚需结合我国医学实际进行研究，从而填补国内空白，引进新的医学科学技术。一项研究课题规模不一定很大，但研究一定要深入，结论一定要
4、深刻，要能反映研究者独到的见解,选题的基本要求,2 要有一个科学的假说假说(hypothesis)：对某一个问题的认识，虽然尚未进行实验，但根据现有的理论进行推理，得出科学的理论解释，这叫假说，又叫设想。假说的提出是推理的结果，假说的验证（科学研究）是推理指导下安排的实验和调查。,科学假说的两个显著特点：科学性 和 假定性假说以一定科学实验做基础，有一定事实作依据，所以它具有科学性。假说有一定的推测性质。它的基本思想的主要部分是根据已知事实推测出来的，所以它又具有假定性。离开这两个特点，就不成为科学假说。,科学假说的作用：帮助研究者有一个明确的目标，看清一个事物的重要意义。假说是对于自然现象规
5、律性的一种推测，研究者可以根据假说确定的研究方向进行主动的、有计划的观察和实验，避免盲目性和被动性,假说的科学依据：现代自然科学的基本原理和实践；个人的经验和体会；前人对这个问题认识的科学总结。假说的形成是一个严谨的科学思维过程，包括：分析和归纳类比推理假说形成演绎推理研究内容（实验设计技术路线和方法确定）。掌握构思的要点 ！,3 题目体现创新点；尽量包含所有关键词；要吸引人，可用动词、词组或句子表达，文字要简练；题目要包含三个要素：施加因素、受试对象和实验效应。,少用或不用缩写词;明确,贴切;忌抽象和空泛。让别人一看题目就能知道你做哪方面的研究、研究对象、解决的问题 例1：蛋白磷酸酶4在胰岛
6、素抵抗中的作用研究改为：蛋白磷酸酶4在TNF-诱导的胰岛素抵抗中的作用与调控机理研究 例2：核糖体蛋白L22在肺动脉高压发病中的作用研究改为：核糖体蛋白L22参与调控人肺动脉阻力血管平滑肌 细胞异常增殖的分子机制研究,题 目,选题的方向正确吗？Testing :你想做什么？ 目的很明确； 做了看 是不是跟踪性研究？ 不是； 是（是否在跟踪中有发展）是不是国外工作的移植？ 不是； 是（为何要移植？移植中有发展吗？）是不是国内已有人在做？ 不是；是（简单重复 ）,选题的主要来源,阅读文献，发现的问题了解本领域已知的知识发现本领域未解决的问题 从研究过程或临床实践中发现问题,问题一如何通过检索掌握研
7、究前沿方向 文献阅读的重要性 某一方面的研究以前都有什么人做过？结论是什么？ 同一研究领域是否用了不同的方法展开研究，哪种方法更合理？或者更普遍？ 现在人们对这方面的研究有什么最新进展和认识？ 同一研究领域的重点文献、最新文献和经典文献？ 同一研究领域的主要发表期刊是什么,问题二 如何检索阅读相关的文献 阅读方式每周（天、月）读固定的杂志；定期集中检索阅读 阅读面综合期刊-顶级期刊-密切相关生物学期刊-相关医学期刊,有效阅读文献 题目 100% 摘要 20% 图表 5% 前言、方法及结果 5% 讨论 5%,自己的结论,比较,在文献积累中注意科学领域的空白点 在科学研究过程中，随时注意新题目的线
8、索 改变选题的组合因素，编制新的题目 运用多学科或学科间配合的途径，在更高的层次上研究既往提出的问题或开辟新的研究科学和技术区别和联系。注意发挥积累的优势（个人、学科）注意发挥团队的优势。,Doll and Hill (1950-1964) 确定吸烟与肺癌关系的研究 分析与归纳 英国扫烟筒工人阴囊上皮癌多发，是由于煤炭不完全燃烧的颗粒夹于阴囊皱褶所致 染料中含有胺易引起工人多发膀胱癌 类比推理 某些化学物质可以致癌，烟草的不完全燃烧也可有致癌物质，促使肺癌的多发 假说形成 吸烟可致肺癌 演绎推理 假如吸烟可以引起肺癌的假说成立，那么在此前提下，通过演绎推理确定的调查内容应该是合理的： 烟草的发
9、行量与肺癌的发病率应该是平行上升的 肺癌病人与非肺癌病人配对调查，前一组吸烟者应比后一组多，吸烟史也该长（由果及因-回顾性调查） 吸烟医生与非吸烟医生配对跟踪多年后，前一组肺癌发病率应比后一组高 （由因及果-前瞻性调查） 肺癌死亡率高低与吸烟量多少应为正相关 戒烟后医生中的死亡率应该低于不戒烟者 在假说的演绎推理指导下安排相关的研究,科研设计,人群研究设计方案单中心-多中心小样本-大样本横断面-前瞻性简易指标-精确指标,计算样本量生物统计学方法参考既往研究 严格的样本选取方案 严格的质控设计,前言,有的科研设计书专门设有这一项，并明确规定应该填写的内容；有的则以“简要说明”代之，其性质与前者基
10、本相同。许多科研设计书内虽无此项要求，设计者也常主动加上一段，称为前言、引言、序言或绪言。这一小段文字主要是引导文章开端，起“破题”作用。,立项依据（回答：为什么？）,说明要做什么？为什么要做？ 研究现状评述(国际研究现状、国内研究现状)。 分析别人工作中存在的问题，从而凝练并提出问题，阐述重要性，解决及意义。 由已有的研究引出假设。 抓住关键点，说明自己的前期工作(在前期工作中发现了什么)。 研究思路叙述。 可能意义的分析。 小结. (重点用黑体字)。 参考文献（2030条左右） ：权威、新（近3年内，最好是当年的）、有自引。,国内外现状,国外现状与国内现状应分别叙述，先以数语简要交代一下有
11、关该问题的历史沿革并非不可，但没有必要作过多的久远追溯。文字不宜过长，亦无须把外国人的话都重复一遍，重点是介绍有关这一问题最近几年的研究进展和目前状况。 把握好本项内容的关键在于“全”和“新”两个字。即全面掌握情况，在定题之前要进行一次系统的文献查阅并广泛收集信息；在拥有大量资料的基础上，通过时间上的和认识深度上的比较，自然可以了解到哪些成果或结论是新的和最新的，这就是现状。,你打算做什么？What do you intend to do?你的工作为什么是重要的Why is the work important?已经做了些什么？ What has already been done?你将如何进
12、行你的工作？ How are you going to do the work?,课题研究计划书（课题申请书）,1研究计划需要回答的问题,(1) 首页（简表） Face page （课题名称、申请人的个人资料、课题组成员名录）。课题名称勿超过规定字数(2) 目的：陈述申请书中提出的研究项目拟达到何种目的和/或验证何假说。具体的特殊研究目的，1、2、3What do you intend to do?(3) 意义：选题的背景；复习和评价现有的知识（国内外研究概况）;结合研究目的，提出本课题研究拟填补的空白或发展，创新的内容并说明其重要意义；结合假说形成的科学思维过程及主要科学依据，陈述本课题研究
13、的合理性及预期结果的可及程度。Why is the work important?,2.研究计划书（课题申请书）的基本组成部分,（4）实现申请课题目标已具备的条件：提供申请人本人或课题组有关的研究工作基础，以及提供任何能说明申请人及其课题组能胜任该课题研究任务的资料；已有的主要试验设备；已掌握的有关研究技术力量或建立新技术的能力。What has already been done?（5）研究内容：核心是实验设计和方法: 研究内容、技术路线、实验计划、方法和步骤，以及分析和解释资料的方法；如果涉及新的技术和方法，应作较详细的陈述，并说明比已有的方法的优越性；讨论潜在困难和限制，以及在遇到困难时
14、可采用替代途径和措施。How are you going to do this work?（6）其他：研究进度；预期成果和提供成果的形式；经费概算；申请者，参加者与合作者的分工,符合申请渠道性质的要求：基础研究和应用基础研究 从评审人的角度来组织你的申报书的撰写 认真选题，务使目的明确，构思完整 认真思考怎样回答4个基本问题 课题申请书是一篇文章，围绕主题（研究目的），分层次，有条理 的进行表述，注意衔接和前后呼应 背景陈述（或立题依据）按选题构思过程的逻辑思维顺序进行*；研究目的、研究内容和技术路线按研究的具体目的的顺序表达尤为重要，是给评审人的第一印象！ 语言简单、平实、明确、直接；容易被
15、理解和接受；正确和准确地将英文词句用中文表达出来 提供参考文献资料出处 预算合理：设备预算通常不要超过总预算的25%,3. 申请书撰写注意事项：,摘 要,假设评审专家没有足够的时间看后面的内容，也能把握整个标书的主要内容。 400字以内，概述研究方法、内容、目标、科学意义:问题提出（即背景,12句）,研究内容为主（要体现研究思路）,意义（12句,要明确、具体）。如：“用方法（手段）进行研究，探索/证明问题，对阐明机制揭示规律有重要意义，为奠定基础提供思路”。,摘 要 （例1）,胰岛素抵抗状态下肝糖异生异常是导致T2DM空腹高血糖的主要原因，其受胰岛素信号和胰高血糖素信号通路调节，PGC1/FO
16、XO1在此过程中起重要作用。本项目组前期工作中通过PGC1转录活性的高通量细胞功能筛选发现新基因CL91具有抑制效应，更重要的是其也能抑制肝糖异生限速酶PEPCK的转录活性，依赖于IRS/CRE顺式元件负调控PGC1的活性是可能的参与机制。本研究拟通过原代细胞和T2DM小鼠，从分子水平、组织水平和动物体内实验，探讨正常和胰岛素抵抗状态下新基因CL91影响肝糖异生的机制，以及在胰岛素信号和胰高血糖素信号调控下，新基因CL91和肝糖异生的关系，并阐明PGC1/FOXO1在此过程中的作用机理。本研究以PGC1/FOXO1相互作用为切入点，旨在研究胰岛素抵抗状态下新基因CL91对肝糖异生的影响以及同空
17、腹高血糖的关系，为进一步发掘CL91的基因功能以及T2DM的临床应用研究提供线索。,摘 要 （例2）,胰岛素抵抗在2型糖尿病及其并发症的发病过程中起重要作用。炎性因子TNF-是导致胰岛素抵抗的重要因素之一。我们前期的研究显示，TNF-通过激活NADPH氧化酶引起氧化应激，进而活化JNK及NFB信号通路，导致胰岛素抵抗。最近研究表明，TNF-可增强蛋白磷酸酶4（PP4）的活性，而PP4是JNK及NFB信号通路活化的新的调节因子。但PP4在TNF-诱导的胰岛素抵抗中的作用尚未见报道。本项目首次探讨PP4在TNF-诱导的胰岛素抵抗中的作用与调控机理，内容包括：（1）观察在TNF-诱导的肝细胞胰岛素抵
18、抗过程中，PP4表达及活性的变化；（2）分析PP4表达及活性变化对胰岛素抵抗的影响；（3）研究TNF-对PP4活性调节机制；（4）探讨PP4作用机理，即所涉及的信号传导途径。本研究从PP4这个新视点为揭示胰岛素抵抗的发生机制奠定基础，为2型糖尿病及其并发症的防治提供新的思路。,摘 要 （例3）,RPE细胞的增殖和迁移是增生性玻璃体视网膜病变(PVR)主要病理过程, HSP70、HSP90与PVR的多个重要分子能相互作用，我们前期实验也证实抑制HSP90可以抑制RPE细胞的增殖。TTC36是我们实验室克隆的人全长新基因，经酵母双杂交、GST PULLDOWN和荧光共定位等结果显示，它可特异性和H
19、SP70、HSP90相互作用，这提示在PVR中它可能参与了HSP70和HSP90的活性调控。本研究拟在前期工作基础上，采用细胞水平的基因超表达和RNA干扰等技术，观察TTC36过表达或表达沉默对RPE细胞的影响，并运用二维电泳、基因芯片方法对TTC36的生物学功能进行深层次的分析，进而通过建立PVR兔模型，探讨TTC36与HSP70、HSP90相互作用对PVR发生发展的影响，以及具体作用的机制，从而为探索PVR的发病机制和找到新的治疗靶点奠定基础。,研究内容、目标、拟解决的关键问题,总体要求：范围合适;重点突出;关键问题选择准确 注意： 小题大做、深做;不要大题小做、浅做。 目标： 具体、明确
20、、新颖（可以是假说）。 例1：背景为炎症细胞产生的新因子(A)具有促心肌细胞肥大的作用。目标（可围绕以下3条之一用一段简短的文字表述） 探讨A促进心肌细胞肥大的作用及机制。 探讨心肌肥厚发病的新因子A的作用及机制。 探讨联接炎症反应与心肌肥厚发病的新因子A的作用及机制。 例2：研究目标：筛选出与老年性白内障相关的基因，明确部分基因在白内障形成中的作用，从晶状体上皮变化的角度阐明白内障的发生机理，为防治白内障提供线索。,研究内容（回答：做什么？）,1、为完成本课题从不同方向（角度、层次）研究（紧扣目标，层次分明，突出重点，逻辑性强） 2、书写内容不要写成研究方法或技术路线步骤，而是本课题要研究的
21、科学问题的几个方面，通过这几个方面的研究能回答你所要研究的科学问题。 3、研究内容不宜太多，一般1-3个内容。,例：,研究内容：1.心肌肥厚发病过程中A因子的动态变化与疾病表现关系；2.补充外源性A因子对心肌细胞肥大的影响；3.阻断内源性A因子对心肌细胞肥大的影响；4.A因子发挥效应的分子机制；5.动物模型验证体外的结果,拟解决的关键问题,完成本研究在理论上和技术上的“瓶颈”,应简述对策例1: 1.证明A是心肌肥厚发病的新因子是拟解决的关键问题。从分子(gain of function and loss of function)、细胞(功能)和整体(动物模型、患者)不同层面探讨。 2. 明确A
22、因子发挥效应是否通过已知的心肌肥大因素。采用RNA干扰和激动剂、抑制剂等方法来证实。,研究方案要合理,环环相扣,设计好对照组,列出具体的方法和技术（先进、可靠、有创新）,技术路线可用流程图（即实验程序,不要太繁）。 选用的有关方法必须与研究目标直接关联，既通过什么样方法完成研究目标。 研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析其实就是把一个问题讲具体了。 简述具体的实验方法，使评审者相信申请人确实掌握了该方法。 尽可能使用经典的、公认的研究方法。如果使用的不是经典或公认的方法，解释该方法比经典方法的好处、可信度等。,研 究 方 案 （回答：怎么做？）,该申请在理论上是否可行。 实验设计是否合理。
23、 重点放在研究方法和研究方案的可行性上： 已掌握的研究方法； 材料来源； 实验条件； 前期工作基础； 项目组人员结构。,可行性分析,研究基础扎实：前期我们在淋巴增殖性疾病的发病机制、生物学特性及预后相关因素方面做了大量工作，为实施本课题奠定了良好的基础，包括 。 研究目标切实：本课题的相关研究是建立在我们前期研究结果之上,以及我们对miRNA如何调节基因表达和在肿瘤发生机制中作用的深入认识的基础上,确保了研究目标的切实可行。 临床标本充足：。 技术平台与硬件设施完善：已具备了良好的分子生物学和细胞生物学技术平台,例如：; 也具有先进完善的仪器设备,主要有。 团队年轻优秀：课题申请者; 课题组成
24、员结构合理,涵盖了本课题所需的各学科的人才。 研究经费充足：申请者目前主持, 从经费上进一步为本课题顺利完成提供保证。 国际合作与交流：与英国和德国建立并保持长期学术交流和合作关系,共同开展。,可行性分析,项目的特色与创新,所谓特色与创新即在本项目研究领域中申请者与国内外同行所不同的，应从对包括项目的立论依据、研究内容、研究方法与手段、技术路线及实验方案上的研究与创新点进行概括、提炼并集中反映出来: 学术思想（理论）的创新; 技术方法的创新; 研究新模式。,项目的特色与创新,例1 TTC36是我们实验室克隆的一全长新基因，它在GenBank中的注册号是EU489483。 首次发现TTC36是H
25、SP70，HSP90的调控蛋白，而HSP90与参与PVR的众多关键分子可以发生相互作用，通过本课题的研究对HSP在PVR中的调控作用将有新的更深入的了解，可能为治疗PVR找到新的治疗靶点。 TTC36与HSP70、HSP90相互作用对PVR的作用研究，具源头创新。,项目的特色与创新,例 2 新基因KL92是本申请人前期参与工作中识别的一个功能基因，目前为止，除大规模序列分析后的ORF预测报道外，尚未见国内外有解析KL92基因功能的研究报道。因此，本项目属于源头创新，所研究的对象和所挖掘的任何信息都将具有突破性的价值。 研究KL92在肝糖异生过程中的功能和机制目前未见任何报道，有望揭示新的作用机
26、制。 本项目的实验设计中具有系统性的创新特色，从细胞系、原代细胞、组织和动物整体水平等多方面进行实验设计，拟挖掘KL92和肝糖异生的关系，并以PGC1/FOXO1为靶点，探索其可能机制。 本研究中，除KL92/PGC1/FOXO1的作用探索外，着重研究在T2DM疾病状态下，特别是肝脏胰岛素抵抗状态下，分子间的作用机理，这一层面上相对的工作在国内外都相对匮乏。,年度计划与预期结果,内容分划于各年度,层次分明,不要用专门时间去“文献调研、结题、整理、撰文”。 预期结果：明确,可以达到,留有余地,与预期目标呼应： 该研究可能得出的结论； 该研究可能提出的进一步研究的线索； 发表的研究论文； 申请的技
27、术专利； 可应用产品的开发； 人才培养。,研 究 基 础,要介绍与申请项目直接相关的研究结果。提供原始数据，解释前期工作结果需要进一步扩展和深入。 以往应用与申请项目有关的技术方法的经历。申请人及主要参加者所做的与本项目有关的研究工作积累和已取得的研究工作成绩要尽可能详尽地在申请书中反映。 提供有关的研究论文、成果及专利等材料。,实 验 条 件,本单位实验条件 (包括已具备的实验条件，尚缺少的实验条件和拟解决的途径)。 技术条件： 实验模型的建立； 预实验的结果； 关键材料。 利用重点实验室（包括利用国家重点实验室和部门开放实验室的计划与落实情况，证明）。 国际合作（证明）。,申请人与项目组成员 （反映学术水平和能力）,学历、科研工作简历（不是工作经历和社会任职与荣誉等）： 申请、主持、参加过的研究课题； 曾获得的研究奖项 发表论文：先概括叙述（总数,SCI,引用),再列代表著作目录（注意论文排序） 申请队伍：反映团队水平,注意学科搭配,不要用名人效应,不要超项 高级研究人员（1-2人）,中级研究人员（2-3人）,技术人员及研究生（3-5人）,谢谢！,
