1、Light Initiated Chemiluminescence Assay 光激化学发光（ LiCA） 光激化学发光（ LiCA）介绍 以高分子微粒为基础 两种微粒近距离 离子氧能量传递 主要特点： 高灵敏度 低本底 稳定 均相 免洗 广泛应用于生物分子间的相互作用 微粒的组成 感光微粒内含感光化合物 发光微粒内含发光化合物和镧系元素 微粒直径 188nm，表面覆盖水凝胶 共价连接 增大的表面积 成百上千个生物分子，捕获目标分子 LiCA发光原理 核心原理是能量的近距离转移 转移的介质是高能态离子氧 红色激光 680nm照射，感光微粒释放离子氧（ 4微秒），传播直径 200nm，发光微粒（
2、 520 618nm），高能级的光 反应的基础有赖于两种微粒的相互接近 反应体系中，微粒的浓度很低，碰撞机率很低，本底信号微弱 原理 (1) 发射光 520-620 nm 发光微球 1O2 A B 激发光 680 nm 感光微球 200nm 原理 (2) 激发光 680 nm 感光微球 A 发光微球 C O2- LiCA的技术特点（一） 高灵敏度 信号产生逐级放大的结果 每个感光微粒释放出近 6万个离子氧 离子氧作用于二甲基噻吩，产生大量紫外光 紫外光激发镧系元素 实际检测能力为 10-15摩尔 理论检测能力为 10-18摩尔 LiCA的技术特点（二） 低本底 时间分辨模式采集光信号（延迟 1
3、50 ms），天然荧光的寿命小于 100 ns 采用 680 nm红光激发，生物样品中的荧光物质不敏感 发射光的波长比激发光的波长短，能量更高，有别于荧光，有效避免荧光物质干扰 稳定 均相环境使反应更充分 免洗操作杜绝随机误差和交叉污染 感光和发光的有机分子受到微粒的保护，环境稳定和安全 溶液中的氧浓度是一个常数 不易受到 pH值、离子强度和温度的影响 LiCA的技术特点（三） 临床免疫的各项检测 生命科学的基础研究 新药的筛选 标记简便 检测过程简单 广泛应用 基本包被模式 GG-Streptavidin（ SA） FG- Antibody（ Ab） 基本反应模式 biotin-antige
4、n primary Ab secondary Ab (or protein A, G, LA) 应用类型 配体受体 激酶 蛋白蛋白 免疫 蛋白酶 蛋白 DNA 配体受体 (1) TNFa-sTNFR1 Biotin anti-TNFR1 IgG FG -TNFa Protein A- sTNFR1 配体受体 (1) TNFa-sTNFR1 GG-SA Biotin anti-TNFR1 IgG FG -TNFa Protein A- sTNFR1 配体受体 (1) TNFa-sTNFR1 GG-SA Biotin anti-TNFR1 IgG FG -TNFa Protein A- sTNFR
5、1 配体受体 (2) 环磷酸腺苷 cAMP Biotin FG - cAMP anti-cAMP- 配体受体 (2) 环磷酸腺苷 cAMP GG-SA Biotin FG - cAMP anti-cAMP- 激酶 Akt Biotin anti-Gsk3 IgG FG -Gsk3 Protein A- 激酶 Akt Biotin anti-Gsk3 IgG FG -Gsk3 Protein A- 激酶 Akt GG-SA Biotin anti-Gsk3 IgG FG -Gsk3 Protein A- Akt 磷酸化 激酶 Akt GG-SA Biotin anti-Gsk3 IgG FG -
6、Gsk3 Protein A- Akt 蛋白蛋白 Biotin FG -p53 Anti-GST- p53/HDM2 HDM2- GST 蛋白蛋白 GG-SA Biotin FG -p53 Anti-GST- p53/HDM2 HDM2- GST 免疫 (1) 肿瘤坏死因子 TNFa Biotin FG - anti-TNFa anti-TNFa- TNFa 免疫 (1) 肿瘤坏死因子 TNFa GG-SA Biotin FG - anti-TNFa anti-TNFa- TNFa 免疫 (2) Biotin anti-TNFa FG -anti-TNFa Protein A- TNFa 肿瘤坏死因子 TNFa GG-SA 免疫 (2) GG-SA Biotin anti-TNFa FG -anti-TNFa Protein A- TNFa 肿瘤坏死因子 TNFa 蛋白酶 (1) GG-SA Biotin FG - substrate anti-digoxigenin- 组织蛋白酶 Cathepsin D - digoxigenin Cathepsin D 水解 蛋白酶 (2) ACE Biotin FG - angiotensin I anti-angiotensin II- ACE 切割
