1、1,吸 光 光 度 法 原理,一 吸光光度法的基本原理,特点 灵敏度高：测定下限可达105106mol/L, 10-4%10-5% 准确度能够满足微量组分的测定要求：相对误差25 （12） 操作简便快速 应用广泛,吸光光度法是基于被测物质的分子对光具有选择性吸收的特性而建立起来的分析方法。,3,1.光的基本性质 电磁波的波粒二象性,磁场向量,电场向量,传播方向,Y,Z,X,与物质作用,4,波粒二象性,结论:一定波长的光具有一定的能量，波长越长(频率越低)，光量子的能量越低。 单色光：具有相同能量(相同波长)的光。 混合光：具有不同能量(不同波长)的光复合在一起。,真空中:,5,光学光谱区,10
2、nm200nm,200nm380nm,380nm 780nm,780 nm 2.5 m,2.5 m 50 m,50 m300 m,6,2. 溶液中溶质分子对光的吸收与吸收光谱,不同颜色的可见光波长及其互补光,7,300,400,500,600,700,/nm,350,525 545,Cr2O72-,MnO4-,Cr2O72-、MnO4-的吸收光谱,350,8,3. 光吸收基本定律: Lambert-Beer定律,A=lg(I0/It)=kbc,朗伯定律(1760) A=lg(I0/It)=k1b,比尔定律(1852) A=lg(I0/It)=k2c,9,吸光度A、透射比T与浓度c的关系,10,
3、吸光度与光程的关系 A = bc,11,吸光度与浓度的关系 A = bc,12,溶液浓度的测定,A bc,工作曲线法 (校准曲线),朗伯-比尔定律的分析应用,13,二 光度分析的方法和仪器 (一) 光度分析的几种方法,方便、灵敏，准确度差。常用于限界分析。,1.目视比色法,14,2. 光电比色法,通过滤光片得一窄范围的光(几十nm),15,3. 吸光光度法和分光光度计,通过棱镜或光栅得到一束近似的单色光. 波长可调, 故选择性好, 准确度高.,16,分光光度计的主要部件,光源：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够 的光强度,稳定。可见光区：钨灯，碘钨灯(3202500nm)紫外区：氢灯，氘灯(
4、180375nm) 单色器：将光源发出的连续光谱分解为单色光的 装置。棱镜:玻璃3503200nm, 石英1854000nm光栅:波长范围宽, 色散均匀,分辨性能好, 使用方便,17,吸收池：(比色皿)用于盛待测及参比溶液。可见光区：光学玻璃池紫外区：石英池 检测器：利用光电效应，将光能转换成电流讯号。光电池，光电管，光电倍增管 指示器：低档仪器：刻度显示（p307，图8.12)中高档仪器：数字显示，自动扫描记录,18,(二) 分光光度计的类型,19,多通道仪器（Multichannel Instruments）,光电二极管阵列(通常具有316个硅二极管)photodiode arrays (PDAs) 同时测量200820nm范围内的整个光谱, 比单个检测器快316倍,信噪比增加 316 1/2 倍.,其他类型分光光度计,将光度计放入样品中, 原位测量. 对环境和过程监测非常重要.,纤维光度计,20,新年快乐！,
