1、1一般项目方法学验证方案表一 原料药检测项目及方法学验证方案名称 检测项目 方法学验证起始原料 性状、溶解度、鉴别、比旋度（手性中心） 、干燥失重、炽灼残渣、残留溶剂、重金属、有关物质、含量残留溶剂、有关物质、含量中间体 性状、有关物质、纯度 有关物质、纯度API 性状、溶解度、引湿性、熔点、比旋度（手性中心） 、鉴别、干燥失重或水分、硫酸盐、氯化物、重金属、炽灼残渣、残留溶剂、粒度、晶型、有关物质、含量残留溶剂、粒度、有关物质、含量表二 片剂检测项目及方法学验证方案名称 检测项目 方法学验证片剂 性状、鉴别、水分、重量差异、有关物质、溶出度、含量均匀度、含量、微生物限度有关物质、溶出度、含量
2、均匀度、含量、微生物限度2表三 有关物质方法学验证内容名称 有关物质色谱条件摸索有关物质方法学验证 HPLC起始原料 检测波长的初选、分离度、检测波长的确定分离度、仪器精密度、LOD、溶液稳定性、空白干扰不加校正因子的主成分自身对照法中间体 检测波长的初选、分离度、检测波长的确定分离度、仪器精密度、LOD、溶液稳定性、空白干扰面积归一化法分离度、强制降解试验、仪器精密度、LOD、溶液稳定性、空白干扰、耐用性不加校正因子的主成分自身对照法分离度、强制降解试验、系统适用性、仪器精密度、LOD 、LOQ、线性、溶液稳定性、空白干扰、耐用性加校正因子的主成分自身对照法API 检测波长的初选、分离度、检
3、测波长的确定分离度、强制降解试验、系统适用性、仪器精密度、方法精密度、中间精密度、溶液稳定性、空白干扰、LOD、 LOQ、线性、外标法3回收率表四 有关物质色谱条件摸索名称 试验内容 备注检测波长的初选 分别取各杂质及供试品加甲醇（或乙腈）溶解并稀释制成各约含 XXug/ml（一般 10ug/ml）的溶液，进行 UV 扫描（200nm400nm）溶剂：能溶解供试品或各杂质的单一溶剂（可向合成咨询溶剂及供试品或各杂质的溶解情况）浓度：吸光度读数以在 0.30.7 之间为宜色谱条件摸索（流动相、色谱柱的摸索）先查文献或各国药典 API 的保留时间一般在 515min，主峰峰型好，理论板数 5000
4、 以上。API 的配制浓度：根据扫描结果分离度 分别取各杂质及供试品配成一定浓度，分别进样。分离度溶液：配制成含 API 的浓度及各杂质浓度为 1%（API 的有关物质测定浓度） （进 6针）杂质与主峰的分离度应大于 1.5检测波长的确定 在流动相条件下进行 UV 扫描4表五 有关物质方法学验证具体内容试验内容 溶液配制方法 溶液配制份数 进样针数 评定标准 备注系统适用性 分别取供试品、各杂质适量，加流动相超声溶解，并稀释配制成约含供试品 XXmg/ml和含杂质各 1%（相当于供试品浓度 XXmg/ml）的混合溶液作为系统适用性溶液。供试液 1 份 进 6 针 杂质峰峰面积 RSD 2.0%
5、；保留时间 RSD 1.0%；杂质峰的拖尾因子2.0 ；分离度及理论塔板数应符合质量标准的规定 杂质为订入标准中的杂质方法专属性 1 精密量取流动相 供试液 1 份 每份各 1 针 空白溶剂应无干扰； 精密度 在规定的测试条件下，同一均质供试品，经多次取样进行一系列检测所得结果之间的接近程度（离散程度）自身对照液 1 份 进 6 针 峰面积 RSD2.0%仪器精密度 供试液及自身对照液供试液仪器精密度供试液 1 份进 6 针 峰面积 RSD2.0%；保留时间 RSD1.0%检测限 供试品或杂质适量，用流动相溶解并逐级稀释供试品溶液 1 份 检测限 2 针； S/N 3 或 2。 研究的所有杂质
6、定量限 供试品或杂质适量，用流动相溶解并逐级稀释供试品溶液 1 份 定量限 6 针； S/N 10。主成分及杂质峰保留时间的相对标准差应不大于2.0%，峰面积的相对标准差应不大于 5.0%。外标法测定的杂质溶液稳定性 供试液 供试液 1 份 0、 1、2、4、6 主成分的含量变化的绝对值5、8、24 小时各进 1 针 2.0%；杂质含量的绝对值在 0.1以内，并不得出现新的大于报告限度的杂质 峰面积及峰面积的归一化含量调流动相 pH 变化0.2调流动相配比变化5%柱温5（如有柱温）不同（批号）色谱柱流速相对值变化20耐用性 供试液系统适用性溶液缓冲液中盐的浓度101 份供试液和 1 份系统适用
7、性溶液，各条件下进 2 针主峰的拖尾因子不得大于 2.0；主峰与杂质峰必须达到基线分离；主峰与杂质峰分离度符合质量标准；各条件下的峰面积 RSD 符合规定；杂质含量的绝对值在0.1 以内 方法精密度 供试液杂质对照品溶液供试液 6 份杂质对照品溶液 1 份供试品进 1 针杂质对照品溶液进 3 针报告限以上的杂质个数一致，外标法计算杂质的含量，RSD不得大于 15%。中间精密度 供试液杂质对照品溶液供试液 6 份（另一个人员、不同仪器、不同时间）杂质对照品溶液 1 份供试品进 1 针杂质对照品溶液进 6 针报告限以上的杂质个数一致，外标法计算杂质的含量，12 个数据 RSD 不得大于 20%。线
8、性 不同浓度的各杂质对照品溶液至少 5 个浓度（LOQ限度的 150%）各进 2 针 相关系数（R）不得小于0.9990，Y 轴截距应在 100%响应值的 25%以内，响应因子的相对标准差应不大于 10%。回收率 供试液杂质对照品溶液供试液 9 份（三个浓度：50%、限度、120%各 3 份）供试液各进 2 针杂质对照品进 6 针各浓度下的平均回收率应在80%-120%（低浓度为定量限，6杂质对照品溶液 1 份 放宽至 70%-130%） ，RSD(%)不大于 10.0%强制降解试验 供试液 控制溶液、空白溶液、酸破坏、碱破坏、光破坏、氧化破坏、热破坏、酸碱空白溶液、氧化空白溶液各进 1 针 空白不干扰降解产物的检出，7
