1、猪肉中磺胺类药物残留检测 南充农产品质量监测检验中心 李国烈 2018年 5月 内容提要 1 磺 胺 类 药物简介 2 磺胺类药物残留限量 3 GB 29694-2013标准解 读 1 磺 胺类药物简介 1.1 药物概况 N 1N4R 1HSO 2 NR 4HN磺胺间甲氧嘧 啶 (SMM) 磺 胺二甲基嘧啶 (SM2) 磺胺甲噁唑(SMZ) 磺胺二甲氧嘧啶 (SDM) 磺胺喹噁啉(SQX) 1 磺胺类药物简介 1.1 药物概况 N 1N4R 1HSO 2 NR 4HNS O 2 N H 2H 2 N H 2 C磺胺米隆 Sulfamylon 1、磺胺类药物简介 1.2、 发现及发展史 H 2
2、N SOON H 2N H 2H 2 NNNSON H 2OO HNNSON H 2OH NN a O 3 SH 3 C OS O 3 N a 1908年 ， 德国化学家 Gelmo合成了对氨基苯磺酰胺 。 1932年德国人 Fritz Mietzsch和 Josef Klarer首先合成了红色的磺胺偶氮染料，即2,4 -二氨基偶氮苯 -4-磺酰胺，盐酸盐为百浪多息。 至 1946年合成的磺酰胺类化合物已达 5500多种，并有 20余种在临床上使用。 1935年， Domagk公开了发表百浪多息的抗菌作用 ， 1939年 ，获 得了诺贝尔医学奖。 2,4 -二氨基偶氮苯 -4-磺酰胺 对氨基苯
3、磺酰胺 可溶性百浪多息 1 磺 胺类药物简介 1.3 理化性质 一 般为白色或微黄色结晶粉 末，无臭，基 本无味； 多 具芳伯胺 基，遇 光易变 质，色 渐变 深，故 需避光 保； 微 溶于 水，较 易溶于稀 碱，但 形成钠盐后则易溶于 水，易 溶于乙醇和丙 酮，在 氯仿和乙醚中几乎不溶 解； 除 磺胺脒为碱性 外，因含 有伯胺基和磺酰胺 基而呈酸碱两性，可溶于酸、碱溶液中； 因 其结构中带有苯环 ,各 种磺胺类药物均 具有紫外吸 收。 1 磺 胺类药物简介 1.4 药理学 H 2 NO HO对氨基苯甲酸（ PABA） HN SR 1OOHN R 2磺胺类药物具有氨基苯磺酰氨 基结构 1 磺
4、胺类药物简介 1.4 药 理 学 NN NNHO HNH 2O POO HO POO HO H二氢喋啶焦磷酸酯 NNNNHO HNH 2N H SO 2 NHRNH 2 C OOHNNNNHN HO HNH 2C O O H二氢叶酸 四氢叶酸 二氢叶酸还原酶 二氢叶酸合成酶 二氢叶酸合成酶 L-谷氨酸 叶酸辅酶 F 嘌呤嘧啶 蛋白质 HN SR1OOHN R21 磺 胺类药物简介 1.4 药 理 学 1 磺 胺类药物简介 1.5 药动学 药 物体 内过程 1 磺 胺类药物简介 1.5 药动学 进入血液 的磺胺类药物广 泛分布于全身各组织细胞和体液中，以肝、肾为主。 磺胺类药物在 体内通过乙酰化
5、、羟基化和结合等三种途径进行代谢，代谢周期因结构不同而差异较大。 1 磺 胺类药物简介 1.6 毒 理学 通过任何途径摄入的磺胺都有可能在人体中蕃积，蓄积浓度超过一定值时将对人体机能造成损害。其毒理作用主要包括肾损伤、致肿瘤作用、过敏反应、造血机能破坏、消化系统障碍、中枢神经系统损害、幼畜和雏离免疫抑制等。 1 磺 胺类药物简介 1.7 耐药性 1 磺 胺类药物简介 1.7 耐药性 由于生产中不 合理使用、误用甚至滥用 ，导致该类药物耐 药菌日益增多。研究表明与其它常用抗生素相比，磺胺类药物可能更易诱导菌株产生耐药性 。另外， 病原菌对某一种磺胺药产生耐药后，对其 它磺 胺药也易产生交叉耐药性
6、。 1 磺 胺类药物简介 1.7 耐药性 长期以来，兽药被广泛用于畜禽疾病预防、治疗及其它方面，在促进畜牧业发展方法起到了重要作用。与此同时，相当比例 的兽以 母体药物或代谢产物的形式通过畜禽类便进入环境，对农田生态系统造成污染，影响土壤微生物和农田良性循环，并在环境中产生大量耐药致病菌 ，最 终将影响人类的健 康。 2 磺 胺类药物残留限 量 2.1 名 词定义 动 物性食 品： 全部可食用的动物组织以及蛋和 奶 。 可食组 织： 全部可食用的动物组织，包括肌肉和脏器 。 肌 肉： 仅指肌肉组 织 。 兽药残 留： 指食品动物用药后，动物产品的任何食用部分中与所有药物有关的物质的残留，包括原
7、型药物或 /和其代谢产 物 。 总残 留： 指对食品动物用药后，动物产品的任何食用部分中药物原型或 /和其所有代谢产物的总 和 。 最高残留限量 MRL： Maximum Residue Limit：对食品动物用药后产生的允许存在于食物表面或内部的该兽药残留的最高量 /浓度（以鲜重计，表示为g/kg） 。 2 磺 胺类药物残留限 量 2.2 残 留限量 限量 (单位 mg/kg)标 准见下 表： 3 GB 29694-2013标准解 读 3.1 适用范围 本标准适用于猪和鸡的肌肉和肝脏组织中的磺胺醋酰、 磺胺吡啶、磺 胺噁唑 、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧 啶（ SM2） 、 磺胺甲氧哒嗪、苯酰
8、磺胺、 磺胺间甲氧嘧 啶（ SMM） 、 磺胺氯哒嗪、 磺胺甲噁 唑（ SMZ） 、 磺胺异噁唑、 磺胺二甲氧哒 嗪（ SDM） 和 磺胺吡唑单个或多个药物残留量的检 测。 3 GB 29694-2013标准解 读 3.2 原理 试样中磺胺类药物，用乙酸乙酯提取， 0.1 mol/L 盐酸溶液转换溶剂，正己烷除脂，MCX固相萃取柱净化，高效液相色谱 -紫外检测器测定， 外标法定量。 3 GB 29694-2013标准解 读 3.3 灵敏度、准确度和精密度 灵敏度 肌肉组 织： LOD 5g/kg， LOQ 10g/kg 。 肝 脏组 织： LOD 12g/kg ,LOQ 25g/kg 。 准确
9、 度 肌肉组织 ： 10 200g/kg添加水平，回收率 60%120%；肝 脏组 织： 25 200g/kg添 加水平，回收率 60% 120%。 精密度 CV：批内 15%，批 间 20%。 3 GB 29694-2013标准解 读 3.4 试剂耗材 标品：配制单标和混合标准储备液，有效期6个月。 提 取试剂：乙酸乙酯 净 化试剂：盐酸溶液、正己烷、甲醇、甲醇乙腈溶液、氨化甲醇 净 化小柱： MCX柱 定 容试剂： 0.10%甲酸乙腈溶液 3 GB 29694-2013标准解 读 3.5 质量控制 试剂空白 空 白样品（阴性对照） 添 加样品（阳性对照） 添 加浓度的确定（有 MRL要求的
10、添加 MRL值，没有 MRL值的，一般添加 2 5倍 LOD/LOQ） 3 GB 29694-2013标准解 读 3.6 测定步骤 3 GB 29694-2013标准解 读 3.6 测定步骤 称量 用 洁净的称样勺将试样搅匀，用感量为0.01g的天平准确称 取 称取试料 5 士 0.05 g，于50 mL聚四氟乙烯离心管中并 记录。 若 为冷冻的试样必须提前从冰箱中取出，置于 4C冰箱 冷减 室中融化，称量前需将完全融化的试样搅拌均匀。 3 GB 29694-2013标准解 读 3.6 测定步骤 提取 加乙酸乙酯 20 mL，涡旋混 合 2 min， 4000 r/min离心 5 min，取
11、上 清 液于 100 mL鸡心瓶中 。残 渣中加乙酸乙酯 20 mL，重 复提取一次，合并两次提取液。 3 GB 29694-2013标准解 读 3.6 测定步骤 浓缩除脂 鸡 心瓶中加 0.1mol/L盐酸溶液 4 mL，于 40 下旋转蒸 发浓 缩至少于 3 mL，转至 10 mL离心管 中； 用 0.1mol/L盐酸溶液 2 mL洗鸡心瓶，转至同一离心管 中； 再 用正己烷 3 mL洗鸡心瓶，将正己烷转至同一离心管中 ，涡 旋混合 30 s， 3000 r/min离心 5 min，弃 正己 烷； 再 次用正已烷 3 mL洗鸡心瓶，转至同一离心管中，涡 旋混 合 30 s， 3000 r/
12、min离心 5 min，弃 正己烷，取下层液备用 。 3 GB 29694-2013标准解 读 3.6 测定步骤 浓缩除脂 利用磺胺类药物在 盐酸相和正己烷中 溶解 性的差异， 使药物转 移到盐酸相 中； 使 用正己烷脱脂时，涡旋时间不 能过 长，涡旋力度也不能过大，否则 易造成乳化； 萃 取中应防止乳化现象，以 免乳 状液溶解的部分组分不能回收 ，降 低组分的回收率和重复 性； 破 乳常用方法 : 离心、加热、超声、冷冻、加盐 等。 3 GB 29694-2013标准解 读 3.6 测定步骤 净化 MCX柱依次用甲醇 2 mL和 0.1mol/L盐酸溶液 2 mL活 化； 取 备用液过柱，控
13、制流速 1mL/min； 依 次用 0.1mol/L盐酸 溶液 1mL和 50% 甲醇 乙腈溶液 2 mL淋 洗； 氨化甲醇 4 mL洗脱 ，收 集洗脱液，于 40 下氮吹干 。 3 GB 29694-2013标准解 读 3.6 测定步骤 复溶及上机分析 加 0.1%甲酸乙腈溶液 1.0 mL溶解残余物，滤膜过滤，供 高效 液相色谱测 定。 3 GB 29694-2013标准解 读 3.7 液相色谱参考条件 色谱柱 : ODS-3 C18(250 mmx4.5 mm，粒 径 5 m)。 流 动相 : 0.1%甲酸溶液 -乙腈，梯度洗 脱。 流速 : 1.0 mL/min。 柱温 : 30 。 检测器 : 紫外检测器或二极管阵列检测 器。 检测波长 : 270 nm。 进样体积 : 100 L。
