1、EB病毒感染的实验室诊断方法 及合理运用,儿童EBV感染诊治中存在的问题, EBV实验室诊断方法的选择和结果解读 存在误区 IM的抗病毒治疗较为混乱重症EBV相关疾病（CAEBV、EBV-HLH） 等诊断和治疗缺乏经验,EpsteinBarr virus(EBV), 1964年发现，DNA病毒，疱疹 病毒 人群感染率高，终身潜伏感染， 具有感染-潜伏-活化的特性 肿瘤相关病毒，每年EBV相关 肿瘤死亡病例达15-20万 与很多疾病相关，几乎可引起 所有脏器和组织的相关疾病 细胞免疫非常重要,Khan G et al. Infectious Agents and Cancer, 2014, 9:
2、38.,EB病毒持续感染示意图, 原发感染后， EBV 在人体B淋巴细胞建 立潜伏感染，只表 达潜伏抗原，受感 染者成为终生病毒 携带者 EBV健康携带者咽 部不定时排毒 在机体免疫功能下 降和某些因素触发 下，潜伏的EBV可 以被再激活，引起 病毒复制及临床症 状Rev. Med. Virol. 2008; 18: 305319,EBV感染的流行病学, 在我国，EBV的原发感染的高峰年龄在儿童，10岁时 90%以上血清阳性转化,0.20,0.6 0.4,EBV血清抗体阳性转化率10.8,0-3m,10y,3m-1y 1y-3y 3y-6y 6y-10y 年龄,百分率,CA-IgG NA-Ig
3、GCA-IgM,中华实验和临床病毒杂志，2008,22（1）：30-32,北京儿童医院资料,传染性单核细胞增多症（Infectious mononucleosis，IM） 慢性活动性EB病毒感染（Chronic active EBV infection，CAEBV） EB病毒相关性嗜血细胞综合征（EBV-associated hemophagocytic syndrome, EBVAHS) 伴性淋巴增殖综合征 （X-linked lymphoproliferative syndrom） 鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma） Burkitts 淋巴瘤（Burkitts ly
4、mphoma） 何奇金淋巴瘤（Hodgkins lymphoma） 其他：脑炎，肾炎，间质性肺炎，肝炎，多发性硬化,临床实践诊断EBV感染时需要回答的问题, 是否感染EBV? EBV感染的时相？ 是否EBV活动性感染？ 组织或器官中EBV感染的细胞定位如何？,EBV感染相关的实验室指标, 血常规：淋巴细胞比例50%（学龄以上儿童）, 嗜异凝集抗体, 异型淋巴细胞 EBV特异性抗体, 荧光定量PCR检测EBV核酸, EBERs原位杂交实验：EBV感染受累的组织学证据,特异性 指标,非特异 性指标,实验室指标一：嗜异凝集抗体, 血清嗜异凝集抗体检测 也称“Monospot”试验，1932年引 入临
5、床实践诊断传染性单核细胞增多症该为IgM抗体，在病程第12周出 现，持续约6个月在青少年原发性EBV感染中其阳性 率可达80-90，约10的青少年缺乏对嗜异性抗体的阳性反应,小于12岁者，EBV感染IM患者该试 验的阳性率为25%-50%,J Appl Clin Pediatr, 2007,22(22) N Engl J Med. 2010;362:1993-2000,实验室指标二：异型淋巴细胞, 外周血异型淋巴细胞比例10% 1、在西方国家，其诊断IM的敏感性为75%，特异性为92% 2、学龄前儿童异型淋巴细胞比例较低。外周血异型淋巴细胞 比例 10%的病例在学龄前儿童EBV-IM中只有41
6、.8%；对于较 大年龄儿童异型淋巴细胞的诊断意义更大N Engl J Med. 2010;362:1993-2000 World J Pediatr, 2011, 7(1): 45-49,实验室指标三: EBV特异性抗体,EBV-CA-IgM 检测1、近期EBV感染的指标，广泛应用于临床 2、EBV感染的血清学反应复杂多样，有的病例抗EBV-CA-IgM产生 延迟，有的持续缺失或长时间存在 3、12%-17%大于16岁的青少年原发EBV感染后不能检测到CA-IgM 抗体，且4岁以下幼儿CA-IgM抗体水平低，持续时间短，易见假阴性 结果,Gao Li wei, et al. Chin J Ev
7、id Based Pediatr, 2011,6(6):467-470. Robertson P, J Med Virol, 2003,70(4): 617-623,单份血清VCA-IgM在诊断 小年龄儿童原发性EBV感染IM的局限性,Pediatrics International (2010) 52, 536540,原发EBV感染的体液免疫, 原发性EBV感染过程中首先产 生针对衣壳抗原（capsid antigen，CA）IgG和IgM（抗 CA-IgG/IgM） 在急性感染的晚期，抗早期抗原（early angtigen，EA）抗体出现 在恢复期晚期，抗核抗原 （nuclear ant
8、igen，NA）抗体 产生抗CA-IgG和抗NA-IgG可持续终身,JMD, 2008, 10(4):279-292,不同时间段的抗体谱不同,5% 的EBV新近感染 抗CA抗（IgM）阴性,在罕见的病例中抗CA 抗体(IgM)会持续阳性,20-30% 的EBV新近感染 抗 EA抗体（IgG）阴性,抗EBNA抗体(IgG)阴性,体液免疫的特殊情况,实验室指标四：EBV病毒核酸检测, Real-time PCR是目前最主要的监测EBV载量的方法，可以指导治 疗和判断疗效，如PTLD/EBV-HLH/CAEBV等 样本：血样本（包括全血、单个核细胞、或血清/血浆），非鼻 咽拭子或鼻咽吸取液，不同疾病
9、所需的适宜样本不同注意：Real-time PCR阳性，只能提示机体存在活动性EBV感 染或病毒活动性复制，不能鉴别是原发EBV感染还是既往EBV感染 再激活，如淋巴瘤患者、免疫抑制患者、HIV感染者，因此，单 纯Real-time PCR阳性在IM诊断中价值有限,实验室指标五：EBERS原位杂交试验, EBV潜伏感染的细胞含有大量的EBER1/EBER2（EBERS） 转录子 每个EBV潜伏感染的细胞含有大约106拷贝EBERS，被认 为EBV潜伏感染的最好标志物 原位杂交试验检测肿瘤细胞中EBERS是诊断肿瘤是否EBV 相关的金标准,阳性对照,阴性对照,EBV-EBERS,阳性样本,阴性样
10、本,不同EB病毒相关肿瘤中EBERS的检出情况,Rev. Med. Virol. 2008; 18: 305319., 是否感染EBV? EBV感染的时相？,临床实践需要回答的问题（一）,EBV血清抗体 谱检测,HH Balfour, et al. Clinical & Translational Immunology, 2015, 4(2) , e33.,EBV抗体谱检测，可以初步判断是否感染EBV，以及感 染的大致时间 如EBNA-IgG阳性，提示机体至少已感染EBV近2-3个月,免疫功能正常患者EBV血清学特点,注：1 有待进一步确定,World J Virol,2012,1(1):31
11、-43.,CAEBV患者EBV抗体检测,Chin Med J 2009; 122(3):262-266.,CAEBV患者EBV抗体谱呈现多种类型，多数患者 EA-IgG阳性，提示活动性感染,EBV-HLH患者的EBV抗体检测,Chin Med J. 2010;123(11) :1426-1430.,临床实践需要回答的问题（二）, 机体是否存在EBV活动性感染？ EBV核酸检测 何种标本送检？血清/血浆？全血？PBMC? 不同疾病需要的送检标本不同,J Mol Diagn. 2008,10(4):279-92.,EBV既往感染的健康人群，血清/低血浆中检测不到EBV- DNA ；但全血/PBMC
12、标本中常有拷贝的EBV-DNA,Rev. Med. Virol. 2008; 18: 305319,不同EBV相关疾病中，EBV核酸在外周血中存在区间不同,Expert Rev. Clin. Immunol. 2013, 9(2), 139151., IM患者外周血中EBV载量在2周内达到峰值，至病程14天，多数IM 患者血清中已检测不到病毒核酸，病程22天后，所有IM血清中均 检测不到EBV核酸 J Med Virol, 2003, 70(4): 617-623 但外周血单个核细胞中EBV核酸阳性可持续6个月以上，需要1年 或更长时间达到EBV健康携带者的全血EBV-DNA水平（1-50拷贝
13、 EBV-DNA/106 个WBC） J Infect Dis, 2013, 207: 80-88 J Mol Diagn. 2008,10(4):279-92 标本：血清或血浆，不建议使用全血或PBMC标本 重症病例监测EBV载量有助于鉴别EBV-HLH, 绝大多数CAEBV患者PBMC中EBV-DNA水平高于102.5拷贝/g DNA， CAEBV患者血浆/血清中EBV-DNA水平与病情严重程度和预后有关 CAEBV患者血浆和PBMC中EBV核酸载量存线性关系,CAEBV患者EBV-DNA检测,Blood ,2001 , 98 : 280-286, EBV-HLH患者外周血单个核细胞（PB
14、MC）和血浆/血清均含有很高的 EBV-DNA载量，监测EBV-HLH患者血清中EBV-DNA载量有助于评估疗效,EBV-HLH患者EBV-DNA检测,Leukemia & Lymphoma, 2002, 43: 173-179,临床实践需要回答的问题（三）, 组织或器官中EBV感染的细胞定位如何？ EBERs检测,J Hepatol. 2006, 44(5):879-85.,EBERRISH 显示， EBERs阳性的细胞为浸润 的淋巴细胞（如箭头所 示），而肝细胞、胆管 上皮细胞和内皮细胞中 未见,EBV相关肝损害中，EBV感染的细胞为淋巴细胞,临床实践诊断EBV感染时需要回答的问题, 是否感染EBV? EBV感染的时相？ 是否EBV活动性感染？ 组织或器官中EBV感染的细胞定位如何？,小 结, 外周血异型淋巴细胞比例及嗜异凝集抗体对于 我国儿童IM诊断的敏感性较低, EBV血清学抗体谱检测比单纯IgM检测具有更大 的诊断价值 EBV-DNA定量检测有助于判断是否存在活动性 感染和指导治疗,不同疾病所适用的标本不同 EBERS是器官组织EBV感染细胞定位的金标准,
