1、输血、手术前传染病筛查自动化检测的临床应用 深圳市南山医院 李江 2015-12-18 输血、手术前筛查 HBV、 HCV、 HIV和 Syphilis TP等是术前筛查的重要指标 2000年卫生部 184号文 颁发了“临床输血技术规范”的通知，特别强调了手术病人术前的筛查项目 乙肝病毒传播途径 (中国 ) 血液传播 药癖者感染 母婴传播 :垂直、围产和水平传播 日常生活和性传播 医源性感染 科室分布 :消化、感染科、肝胆、普外、检验科、胃镜室、血液、慢性肾衰病人 (常需输血和透析 )、肿瘤病人、移植病人 (免疫低下 ) 针刺感染 :受伤者 HBsAb10mIU/ml易感染；传染源 HBeAg
2、(+),感染率 6080% 肾透析传播 :对病人和医护人员同样高危 乙肝病毒传播途径 (中国 ) HCV主要传播途径 Percutaneous（ 经皮肤） 针头刺伤 血液透析 移植 针灸疗法 Permucosal（ 接触性传播） 血液传播 母婴垂直传播 性传播 HCV实验室检测的现状 Anti-HCV IgG 检测 酶联免疫吸附实验 -大批量处理 化学发光技术 -封闭式全自动化 快速检测技术 -试纸条 补充确认实验 -重组免疫印迹实验 (RIBA) Anti-HCV IgM 检测 HCV特异性抗原检测 HCV RNA的 NAT检测 HCV的血清学分析 使用高灵敏度的检测试剂 使用 Ag/Ab联
3、合检测试剂 建立符合中国人群的 Cut-off 值 建立 Anti HCV的确认程序 未来实验室 HCV筛查的进展 HIV主要传播途径 性接触传播 血液传播 母婴垂直传播 其他方式传播 HIV的实验室检测 HIV 特异性抗体检测 酶联免疫吸附实验 -大批量处理 化学发光技术 -封闭式全自动化 快速检测技术 -试纸条 确认实验 -重组免疫印迹实验 (RIBA) HIV 特异性抗原检测 Ag/Ab联合检测 （ 同时定性检测 HIV p24抗原 和 HIV-1或 HIV-2抗体 ） 梅毒螺旋体检测不同方法比较 检测方法 优点 缺点暗视野显微镜检查阳性者可直接诊断1 、操作方法限制 2 、阴性者不能排
4、除 TP （用药、取材不当）3 、窗口期无法检测4 、手工操作非密螺旋体抗原检测抗体( T R U S T / R P R )1 、应用广泛，价格便宜，结果易读 2 、疗效检测，随访1 、晚期梅毒高滴度时 30% 假阴性（前带现象） 2 、特异性差，假阳性 3 、手工操作，增加劳动强度T P H A / T P P A 1 、灵敏度、特异性较好1 、不能区分是既往感染还是现在感染 2 、使用前先使用 R P R 筛选 3 、操作繁琐、耗时长4 、依赖于肉眼观察和判断 5 、结果不易保存 *E L I S A1 、价格便宜2 、适合大批量标本操作1 、耗时长梅毒抗体自动化检测 化学发光技术 全自
5、动重组 TP抗原（ TpN15、 TpN17和 TpN47）包被微粒子 增强的荧光检测信号 真正 两步骤免疫测定法 ，避免钩状效应（ HOOK） 100 灵敏度， 99.76的特异性 全自动化、高通量检测 快速方便，一份样本一次检测完成 传播途径的有效阻断 采用更灵敏的试剂筛查 主动 /被动免疫：用定量试剂评估和监测 手术、血透和内窥镜检查病人的筛查 :采用更灵敏的试剂筛查 灵敏的试剂 准确的结果 阻断传播 阻断传播与检验科有关吗？ 输血、手术病人筛查传统方法 酶联免疫法（ ELISA） 平底 圆底 尖底 微板法固相载体 : 优势 ： 简单，易于自动化 开放试剂 成本低及易于控制 缺陷 ： 包
6、被表面积小及有限（灵敏度和速度） 包被均一性不足（精密度） 检测技术多为颜色反应（特异性和灵敏度） 反应时间不一致 ,造成结果的偏差 (特别在手工操作时 ) 包被均一性，清洗残留和制作成本的平衡 微粒子包被抗体 被检测物 连接物 其它物质 输血、手术病人筛查自动化方法 化学发光免疫法（ CMIA） 方法学的不同 检测线性范围宽 高特异性 、高灵敏度 精密度好 方便快速缩短出结果时间 定量检测 动态观察结果 化学发光 VS酶标试剂的主要区别 高特异性、高灵敏度 2006年深圳无偿献血乙肝筛查阳性结果确证分析结果： 进口试剂检出率 0. 68 % ,国产试剂 0. 55 % 有必要提高目前国产试剂
7、的特异性和灵敏度 ; 血液筛查有必要采用 高灵敏度特异性较好 的进口试剂 南京市两对半 ELISA中标试剂与美国进口试剂的比较 : 五家公司中标试剂与美国 进口 试剂相比特异性一致 但敏感性前者稍低，五家中标试剂之间也存在质量上 的差别 Source: 1.（ 实用预防医学 2006 年 4 月 第 13 卷 第 2 期 Practical Preventive Medicine ,Apr. 2006 ,Vol 13 ,No. 2 2.2005-10-8 12:09:46 河北医学杂志 2005 年 10 月 第 8 卷 第 10期 传统流程： 样本分类 样本集中 每天检测一次 12小时取报告
8、 快速方便 改变传统的工作流程 现在流程： 收到样本 立即上机 随时检测 随时打印报告 急诊 1小时出报告 充分满足急诊和手术病人需求 采用 WHO校准品 和配套质控品，易于标准化 真正的两步免疫检测步骤，避免 HooK效应 高特异性、高灵敏度，避免漏检误诊 结果准确，确保临床和手术病人输血安全 方便快速，充分满足急诊病人的需求 自动化检测优势 控制医疗风险，降低检测误差 采用灵敏度高、特异性好的检测手段。 检验科的工作已完成？其它与我们没关？ 结束语 感染筛查的实验室检测结果解释 深圳市南山区人民医院检验科生化免疫组 李江 Sy 医嘱申请 需输血有创手术（感染筛查 八 项）。 无需输血有创手
9、术（感染筛查 四 项）。 单独输血（感染筛查 八 项）。 有针对性的感染性疾病筛查（感染筛查 HIV抗体、感染筛查 HCV抗体、感染筛查梅毒抗体、乙肝两对定量（原倍）、乙肝二对半定量（稀释 ）。 梅毒高危人员筛查或治疗（感染筛查梅毒抗体、甲苯胺红梅毒血清学试验、甲苯胺红梅毒血清学试验5次） 急诊医嘱（ 急诊 术前感染四项）。 梅毒螺旋体抗体不同方法学结果解释 方 法 甲苯胺红梅毒血清学试验 （ TRUST） 阳性反应 解 释 有梅毒感染的可能性，一期或二期梅毒，生物学假阳性反应分 为急性反应（持续时间 6个月）和慢性反应（持续时间 6个 月）。急性生物学假阳性反应可见于孕期妇女、近期进行过免
10、疫接种、近期发生过心肌梗塞以及发热性感染性疾病。慢性生 物学假阳性反应可见于静脉药瘾者、自身免疫病、麻风、慢性 肝病（慢性乙型和丙型肝炎等）以及老年人。可采用特异性抗 体实验验证确认。 不能排除梅毒一期早期和三期。可采用 TPPA、 ELISA等特异抗 体检测方法排除 有梅毒感染的可能性，可为各期梅毒，假阳性反应性常见于感 染性疾病、自身免疫病和慢性肝病等。可采用蛋白印迹（ WB） 方法确认。 未检出梅毒抗体。患者未感染梅毒。除非有其他证据证明感染 的存在。 阴性反应 梅毒螺旋体特异 阳性反应 抗体 (发光法 ) 或 (凝集法 ) 阴性反应 梅毒抗体两种方法学结果不一致的解释 A 梅毒抗体两种方法学结果一致的解释 B 丙型肝炎病毒抗体结果及备注解释 甲苯胺红梅毒血清学试验结果及备注解释 HIV和 Syphilis TP抗体检测流程图 艾滋病抗体检测流程图 艾滋病毒抗体检测流程图 .doc 梅毒抗体检测流程图 梅毒抗体检测流程图 .doc 与阳性患者交流技巧。 避 免 错 误 结 果 避 免 漏 检
