1、ISO15189实验室认可系列培训讲座,常见生化检测误差案例分析,牛广华,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,案例分类,全自动生化仪的参数设置问题 全自动生化仪的校准问题 全自动生化仪的质控问题 全自动生化仪的试剂问题 全自动生化仪水供系统水质问题 全自动生化仪的维护和保养问题 标本质量对生化结果的影响 报告前结果的审查,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,案例一,全自动生化仪的参数设置问题,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,DBIL测定精密度差且有负值出现,一、现象：某医院操作人员发现：DBIL测定临床标本出现
2、负数较多（仪器：日立7060）。 试剂参数为： 主波长：450nm；副波长：546nm； S=7ul；R1=196ul；R2=49ul； 分析方法：2 Point End； 测光点为16、31。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,DBIL测定精密度差且有负值出现,二、了解情况：到该院后查看校准结果：S1ABS：-48，K因数：-6215。从校准数据看，校准结果正常。随后查看当天临床标本反应曲线，发现曲线不光滑，有跳点出现，初步怀疑为比色杯不干净或光源不稳定造成对该项目的干扰。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,
3、DBIL测定精密度差且有负值出现,三、处理： 对仪器进行日常维护，通过杯空白及光度计检查，确认仪器性能符合实验要求后，取2例临床标本分别重复测定10次，结果为：从数据看，仍有负值出现且重复性很差，故排除仪器影响因素。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,DBIL测定精密度差且有负值出现,随后再一次核对参数设置情况，发现R1试剂量+样本量为203 ul，而日立7060仪器要求的最小反应量为250ul，所以怀疑测定结果的不好可能与试剂量设置太小有关。 故修改参数为：S=10ul，R1=280ul，R2=70ul，其他参数不变，重新校准，校准结果为：S1ABS
4、：-50，K因数：-6388。 取以上2例临床标本分别重复测定10次，结果如下：,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,DBIL测定精密度差且有负值出现,从数据看，2例标本重复性都较好且无负值出现。在第二天观察的40例标本测定情况看，结果均符合临床要求。四、分析：由此分析造成DBIL测定结果不理想的原因为：样本与试剂的反应体积设置太小。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,DBIL测定精密度差且有负值出现,五、总结： 最小反应体积是指在仪器光度读数要用于结果计算时，反应液液面高度不低于光度计光径的最小体积。它保证仪器
5、的正确读数和计算，也是仪器测定精度和经济性的指针之一。 在单试剂终点法或速率法项目测定时，样品与试剂的总体积不得少于此参数。 在双试剂终点法测定时，若在加R2之前读数，则样品与R1的总体积不得少于该参数。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,ISO15189实验室认可系列培训讲座,DBIL测定精密度差且有负值出现,本案例中，DBIL由于要扣除样品空白，故在加入R2试剂前要读一次吸光度。而日立7060仪器的总反应量要求不得小于250ul，但是该案例中R1试剂量+样品量设置却为203
6、ul，远远小于仪器要求的最小反应量，使光路不能完全通过反应液面，导致测定吸光度不稳定，出现跳点，从而影响结果，造成重复性差甚至负值出现。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,案例二,全自动生化仪的校准问题,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,Hcy在全自动生化仪上校准不能通过,一、现象：某医院反映某品牌HCY试剂（仪器：雅培 C8000），校准无法通过，出现“校准失败”的报警。 试剂参数为：Primary wavelength：340nm； Secondary wavelength：700nm； Main read
7、 time：31-33； Blank read time：26-28； Sample volume：10ul； R1 reagent volume：185ul； R2 reagent volume：50ul；Calibration method：Spline； 校准品个数设置：3； 浓度分别设置为：0、10、33umol/L。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,Hcy在全自动生化仪上校准不能通过,二、了解情况：查看校准结果，发现其每个浓度的吸光度实际在该仪器上已做出测定，分别为：0：-0.0027 10：-0.0344 33：-0.0738，但参与最终
8、结果计算的Cal Factor（校准因数）却显示为0，说明该仪器并未通过所测定的吸光度进行曲线拟合，故出现“校准失败”报警。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,Hcy在全自动生化仪上校准不能通过,三、处理： 分别对10umol/L、33umol/L的校准品进行对倍稀释，得到5umol/L、16.5umol/L浓度的校准品； 把参数中校准品个数修改为：5； 浓度设置修改为0、5、10、16.5、33umol/L。 仍采用Spline定标模式重新进行校准，后校准顺利通过，结果如下：,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心
9、,Hcy在全自动生化仪上校准不能通过,从校准结果看，符合实验要求，因此该院所反映校准无法通过的问题得以解决。随后进行质控测定，结果如下：从以上数据看，两个水平浓度的质控所测得结果均在规定的允许误差范围内，符合实验要求。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,Hcy在全自动生化仪上校准不能通过,四、分析： 全自动生化分析仪的校准模式设置中均有线性或非线性的选择。当我们对其进行设置时，会根据试剂盒的反应原理选择合适的校准模式。 通常情况下，常规的生化项目我们会选择线性模式校准，而免疫比浊项目我们会选择非线性模式校准。 若选择线性校准，往往我们只需带一个校准品进
10、行两点校准即可。 若选择非线性校准时，我们会带多个浓度校准品进行多点校准。 不同的仪器，在做非线性校准时所要求的校准品个数是不同的。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,Hcy在全自动生化仪上校准不能通过,例如： 日立、奥林巴斯等仪器，要求至少带三个浓度的校准品即可进行非线性拟合； 贝克曼、东芝等仪器，则要求至少带四个浓度的校准品才进行非线性拟合。 此次所用的雅培 C8000仪器，在第一次校准时，采用的是三点非线性校准，该仪器不支持计算，出现“校准失败”的报警。后采用五点非线性校准，校准通过。 因此，说明该仪器的性能应与贝克曼、东芝等仪器一致，在进行非线
11、性校准时，校准品的个数不得少于四个。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,Hcy在全自动生化仪上校准不能通过,五、总结：我们在进行新项目实验前，除了选择正确的校准模式外，还要根据该仪器的性能特点，选择符合要求的校准品个数，以保证实验的顺利进行。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,Hcy在全自动生化仪上校准不能通过,非线性校准模式包括：logit(3p)、logit(4p) ,logit(5p)校准模式：非线性校准类型：抛物线型(图12-36)，则多考虑用logic方法拟合，选择logit(3p)或logit(4p
12、)和logit(5p)。 Splain校准模式 Splain也称样条函数，在曲线类型不确定时，或校准曲线类型如图12-37所示的S型非线性校准类型，则多考虑Splain方法拟合。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,案例三,全自动生化仪的质控问题,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TP、ALB试剂作室内质控较差分析,一、现象：某医院操作人员反映使用某公司的检测试剂盒，有些项目如TP、Alb等做室内质控测定时，结果高低不定，有失控现象，检测仪器为日立7170A。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大
13、学附属医院临床检验中心,TP、ALB试剂作室内质控较差分析,二、了解情况：经了解其实际情况为使用某公司进口干粉质控品，质控品复溶后分装成数支冰冻保存，无反复冻融或过效期使用现象，仪器维护良好，但IQC经常失控，常常出现某天大部分项目系统偏低、而次日又正常或系统偏高。综合上述失控可能原因和客户实际情况，分析该实验室 IQC失控原因可能为质控品临用前准备不充分。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TP、ALB试剂作室内质控较差分析,三、处理： 建议准确复溶质控品，复溶混匀至少30分钟后再将其分装成数小支，并在说明书规定的复溶后稳定期内使用。 每次做IQC测
14、定前，从冰箱中取出一小支室温放置解冻和混匀30分钟左右，然后再进行测定，使用后剩余部分密闭避光置28当天使用或按说明书规定的稳定期内使用，切忌反复冻融使用。 几天后回访，反映近几日观察，大部分项目天间精密度明显好转，IQC未出现失控现象。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TP、ALB试剂作室内质控较差分析,四、分析：就IQC的标本准备工作进行一些实验，实验情况大致如下： 分别取新鲜临床标本1、临床标本2、伯乐公司液体生化质控品、英国朗道干粉质控品复溶后各2mL装入康氏试管中，并即时进行密闭避光冰冻保存； 次日取出室温静置解冻，5分钟后分别吸取上中下层
15、三份液体各300微升，再分别充分混匀并同时进行TP、ALB等20余个生化项目检测。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TP、ALB试剂作室内质控较差分析,结果发现临床标本外观透明度呈明显的梯度变化，上层清亮、底层混浊，干粉质控品透明度也有一定的梯度变化，液体生化质控品由于其在-15-20仍保持液态而没有改变出现外观分层现象，其不同层面液体检测结果见附表。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TP、ALB试剂作室内质控较差分析,从表中可看出临床标本和干粉质控品静态解冻后不同层面液体检测结果差距甚大，而液体生化质控品
16、无明显差异。 分析产生上述结果的可能原因蛋白质冰点低（白蛋白崩解温度为-10左右），先解冻，未解冻冰块由于密度低而始终浮于液面，因此导致蛋白质聚集底部，从而导致外观自上而下逐渐变混浊，进而导致底部蛋白质浓度、酶类活性明显偏高。 综上案例情况和研究结果，得出结论冰冻质控品或不能及时测定的临床标本再经冰冻保存后，测定前应充分解冻和混匀，否则测定结果不理想。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TP、ALB试剂作室内质控较差分析,五、总结：室内质量控制（IQC Internal Qualiti Control） 旨在监测和控制本室常规工作的精密度，并检测其准确
17、度的改变，提高本室常规工作中批间和日间标本检测的一致性。引起室内质控失控的原因众多，常见原因有：,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TP、ALB试剂作室内质控较差分析,质控品的种类：质控品应尽量选用项目多、效期长、项目稳定、均一性好、瓶间差异小的液体质控品，干粉质控品往往由于冻干工艺、复溶液质量及加量准确度、干粉流失、复溶后的保存等等原因而导致结果可能不理想。 质控品临用前准备工作：干粉质控品如果解冻混匀不充分，其液面自上而下将会明显呈现颜色由浅而深、浊度逐渐加深现象，上中下层各种物质含量会有明显差异，进而导致IQC失控。,ISO15189实验室认可系
18、列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TP、ALB试剂作室内质控较差分析,仪器运行状态：仪器光源灯老化、加样系统异常、日维护工作不到位或仪器经检修（更换光源灯、反应杯等零部件）后未重新进行杯空白等维护工作，从而前后几天测定结果差异大，IQC失控。 仪器用水质量改变：仪器加样系统、反应杯等在经指定的酸性或碱性清洗济泡洗后需要用大量水来进行水清洗以防交叉污染，仪器用水一般为去离子水或蒸馏水，并对其pH值、电导率等理化性质有一定要求。如果水质不好，将会对Ca2+等一些检测项目产生不可预计的影响。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TP、ALB试剂作
19、室内质控较差分析,试剂盒因素：试剂过效期或常有将试剂合并使用（将同批号或不同批号新试剂倒入旧试剂瓶中，甚至将新试剂倒入快过期试剂中）现象，此操作往往使结果无法预计。 校准因素：每一种试剂都会有保质期限和开瓶稳定性，随着与空气的接触其pH等理化性质将会不断变化，因此经常校准和尽量减少试剂敞开时间非常必要。如果试剂开瓶使用后长时间未进行校准或更换新试剂后未进行即时校准，则检测结果可能异常。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,案例四,全自动生化仪的试剂问题,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TBA试剂在AU640仪器
20、上检测标本出现负值分析,一、现象：某院生化室反映TBA试剂测定临床标本出现负值较多（仪器：AU640）。试剂参数为：S=3ul，R1=202ul，R2=67ul，测光点为14-20。 二、了解情况： 到该院后查看校准结果：空白速率：0.0153，试剂空白：0.2326。 根据以上数据分析，出现负值主要是试剂空白速率较大导致的。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TBA试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析,三、处理： 查看不同时间校准结果,试剂空白速率有时为0.0053，有时空白速率为0.0159。 先单独对TBA进行校准，三次试剂空白速率分别为：
21、0.0053、0.0050、0.0052。 后采取TBA与其他项目一起作校准，试剂空白速率分别为0.0157、0.0086、0.0135。 三次校准结果重复性差，且与单独校准时的空白速率差异非常大，采用此校准结果测定几例临床标本，发现TBA有负值出现。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TBA试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析,最后再单独作TBA校准，试剂空白速率分别为0.0054、0.0056、0.0053，从校准结果上看，此次校准与第一次校准结果相差不大。 随后采用此次校准测定临床标本，其测定结果无负值出现。由此可看出TBA出现负值的主要原
22、因是空白速率过大。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TBA试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析,四、分析： 从单独校准TBA，其空白速率正常而当TBA与其他项目共同作空白校准时其空白速率偏高的现象可说明造成空白速率过大的原因是由于试剂针携带污染造成。 由于该院试剂使用厂家较多，无法通过试剂项目直接分析什么项目对TBA有影响，故根据各项目反应原理不同来与TBA试剂组合进行空白校准，各种组合及TBA校准后空白速率如下：,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TBA试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析,通过
23、以上组合项目校准排查，发现CHO、TG试剂对TBA有污染，发生污染为试剂针携带引起。通过查阅相关文献，发现CHO、TG对TBA造成严重的干扰是因为CHO、TG试剂中通常添加有大量的胆酸钠，由于胆酸钠结构与TBA相似，故会参与TBA反应，造成空白速率偏高。TBA检测时，不能放于CHO、TG试剂后，尽量远离CHO、TG项目，否则会造成TBA测定结果异常。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TBA试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析,五、总结： （一）试剂化学成分污染的途径可分为： 试剂成分的直接污染：上一个测定试剂中含有下一个测试所要测定的物质，直接
24、干扰下一检测的测定结果。如： 淀粉酶（AMY）试剂中含有较高浓度的钙（Ca 2+ ）。对Ca 2+的测定结果造成干扰； 碱性磷酸酶（ALP）（IFCC法）、肌酸激酶（CK）（NAC法）、肌酸激酶-MB（CK-MB）（NAC法）、二氧化碳（CO2） （PEPC法）、AMY（EPS法）、三酰甘油（TG）等试剂中含有镁（Mg 2+）。对Mg 2+的测定结果造成干扰；,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TBA试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析,葡萄糖（GLU）（氧化酶法）、总蛋白 （TP）与酸性磷酸酶（ACP）试剂中含有较高浓度的钾（K + ）。对K
25、+的测定结果造成干扰； 胆碱酯酶（ChE）、总胆固醇（CHOL）、GLU（GOD法）、尿酸（UA）（尿酸酶法）、乳酸脱氢酶（LD）（IFCC法）、羟丁酸脱氢酶 （HBDH）（DGKC法）等试剂中含有磷酸缓冲液。对磷（P）的测定结果造成干扰；,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TBA试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析,CHOL、TG试剂及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂中含有胆酸钠。对总胆汁酸（TBA）的测定结果造成干扰；丙氨酸氨基转移酶 （ALT）（IFCC法）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）（IFCC法）试剂中含有高活性的LD。对LD的测定
26、结果造成干扰；,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TBA试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析,试剂成分参与反应：上一个试剂中含有的某种试剂成分与下一反应所要测定的底物有作用，因而干扰下一反应的测定结果。如： Mg 2+测定试剂的络合剂亦能与铁（Fe）结合，影响铁与铁络合剂的结合； 直接胆红素（DBil）（重氮法）试剂含有EDTA，Mg 2+试剂中含有 EDTA，均能与Ca结合，从而影响Ca的测定； 以甘油作为酶保护剂的试剂，会对TG的测定带来干扰； 钙（MTB法）试剂对K+有负干扰；,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院
27、临床检验中心,TBA试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析,反应进程相同：上一个试剂所引导的反应对下一个项目的反应进程带来间接的干扰，下一项目所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果。如： 当上一反应产物为H2O2时，则对以Trinder反应产生颜色的测定结果引起干扰，如UA对CHOL结果的影响，CHOL对肌酐（CREA）（酶法）测定结果的影响，GLU（氧化酶法）对CREA测定结果的影响； CK（NAC法）、CK-MB（NAC法）试剂中含有GLU成分，其分析方法的原理中包含GLU的己糖激酶（HK）反应过程，因此可能对GLU的测定带来干扰，尤其对GLU的HK法测定可能带来严重干扰。,ISO1
28、5189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TBA试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析,影响反应条件：如上一试剂缓冲液成分改变了下一反应的pH环境，从而改变反应速率，如： TP（双缩脲法）测定需在pH89时，蛋白肽键才都能与碱性铜溶液作用生成紫色反应，若pH8时，则会导致TP结果偏低，还直接影响球蛋白、白蛋白/ 球蛋白的结果； 酶活性测定有最适pH，大多数酶反应pH在6.07.5之间，ALP、-GT、LDH则在碱性条件下最适宜；,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,TBA试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析,CREA（
29、苦味酸速率法） 反应条件为碱性，果糖胺（动力学法）反应条件为酸性，受到污染后反应速率会减慢。 CREA（酶法）试剂中含有抗坏血酸氧化酶，影响了氧化还原反应的进程， 会对TBA（酶循环法）测定结果有影响。 DBil（钒酸盐氧化法）试剂中含有表面活性剂的酒石酸盐缓冲液会影响ALT活性，对测定结果有负干扰。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,如何判别试剂间存在化学污染？,（二）如何判别试剂间存在化学污染？一般可以以下试验及步骤来加以判别： 追溯可疑检测项目的反应杯序号，在这之前该反应杯做的是什么项目的检测，以此来初步估计是什么反应或什么物质对后项目检测产生干
30、扰；初步确定后可选择同类反应，有针对性地实施交叉污染试验加以验证，并寻找方法避开此污染。如加做清洗，更换试剂顺序，甚至更换检测试剂或方法。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,如何判别试剂间存在化学污染？,将某一试剂作为样本进行全套项目测定，观察各项生化结果的情况， 进而确定发生试剂交叉污染时造成直接干扰的项目。 1份样品分成2份，1份加生理盐水或其他适当的稀释液，另一份加等量的某试剂，同时测定，观察结果 的变化，进而确定可能发生试剂交叉污染时造成干扰的项目。 试剂交叉污染实验。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心
31、,如何消除试剂间的化学污染？,（三）如何消除试剂间的化学污染？要求检验人员对仪器工作流程、试剂组成、测定原理要了如指掌，对试剂交叉污染的各种可能性加以考虑，合理设计程序。更换试剂时，应仔细研究说明书，发现和避免可能存在的试剂交叉污染。 为减少试剂间的化学污染，应定期对仪器进行适当的保养，如更换管道，用去污剂、酸性洗液清洗比色杯，用去污剂擦清试剂针，用无水乙醇擦洗搅拌棒等。 合理安排检测项目的顺序：一般在安排项目顺序时要求两个项目间至少要有一个非干扰项目，由于各厂商试剂盒原理不同，内含成分不同，故无固定的测定顺序格式，需要自己摸索。较好 的做法是将被干扰项目置于干扰项目之前，以消除干扰发生的可能
32、。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,如何消除试剂间的化学污染？,一般检测顺序有以下原则： 不受上一试剂的干扰； 不影响下一试剂测定； 不影响测试速度； 充分运用剩余试剂位开展新项目； 利用好仪器的功能。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,如何消除试剂间的化学污染？,当合理设置测试顺序无法消除交叉污染时，可使用生化分析仪的试剂针、比色杯清洗程序，对 试剂针、比色杯进行2次或多次清洗。用碱性清洗液及酸性清洗液交叉冲洗试剂针可以有效地避免携带污染。 选用具有抗交叉污染的试剂盒：如在游离胆固醇 试剂中添加胆固醇酯酶抑
33、制剂，以减少胆固醇酯酶水解胆固醇酯而引起对游离胆固醇测定的污染。 部分大型全自动生化分析仪有多个模块或通道，可以将有化 学污染干扰的项目排在不同的模块或通道中检测。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,案例五,全自动生化仪的水供系统水质问题,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,钙测定结果不稳定,一、现象：生化室操作人员反映近日钙测定结果不稳定、重复性不好。 二、了解情况： 检查水质：电阻率18.2M.cm 更换试剂、重新校准，没有改善 检查仪器硬件,没有问题 三、处理： 取水样做微生物检测，呈阳性。 更换反渗膜，再
34、检测钙，结果正常，重复性符合要求。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,钙测定结果不稳定,四、分析： 水中存在的钙： 产水电阻在10M.cm左右 最高钙浓度：10-15ppb 储水箱中的水： 水在水箱中水质会劣化： 1M.cm 最高钙浓度：500ppb 与监测钙的浓度相比(100ppb): 如果电阻率正常,不太可能会是水中钙离子影响检测结果(比例仅占1%),ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,钙测定结果不稳定,有机物也是干扰的关键参数 钙可以和很多有机物螯合 小分子有机酸:草酸、柠檬酸 蛋白来自细菌 离子来自进水和
35、细菌中的磷酸盐 对PH的影响 大量来自空气中碳酸盐/碳酸氢盐的溶解可形成缓冲液，可能会改变反应中使用的缓冲液的PH。因而会影响一些对PH敏感的项目。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,钙测定结果不稳定,五、总结： 尽管钙是离子，但不是纯水中的离子导致了检测中的问题 问题的产生来源于水中存在的其他污染物 避免高有机物负载是非常重要的 净化过程去除了水中存在的细菌代谢物也是解决问题的关键,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,钙测定结果不稳定,实验室对于水质的关注习惯 在对于水质的关注中，一般的客户只关注纯水装置的显示
36、器上的数字：电导率或者电阻率。电导率/电阻率显示是水中的导电率/电阻率，间接反映的是水中存在的离子数量，但仅仅是离子数量不能够完全反映出水质的好坏。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,评价水质的常用指标 电阻率：衡量实验室用水导电性能的指标，单位为M/cm，随着水内无机离子的减少，电阻加大。电阻率的导数称为电导率，单位为s/cm。水的电阻率或电导率反映了水中离子含量的多少。 总有机碳（TOC）：反映水中氧化的有机化合物的含量，单位为ppm或ppb。 其他，如细菌、内素素、吸光度、颗粒等。,纯水的分级与应用领域 三级水：电阻率0.2M/cm，主要用于冲洗
37、玻璃器皿，水浴等； 二级水：电阻率1M/cm，常用于制备常用试剂、缓冲液等；一级水：电阻率18.25M/cm，常用于HPLC、原子吸收、分子生物学、细胞和细菌培养等。 生化用水 CLSI C3-P4.Preparation and Testing of Reagent Water in the Clinical Laboratory.2005. 电阻率10M/cm ，细菌10clu/ml，TOC500ng/g(ppb），不含0.22um的微粒。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,钙测定结果不稳定,钙测定结果不稳定,水质保证至关重要 监测并记录实验室纯水
38、质量参数，能够提高实验室风险管理能力 -定期监控电阻率、有机物含量和细菌指标 水纯化系统需要优异的设计 -保证高水平的纯水质量 -系统能够提供方便的质量监测 细菌是一个主要的问题来源：适当的清洗和维护分析仪器是至关重要的,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,案例六,全自动生化仪的维护和保养问题,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,生化分析仪空白2X、3X报警分析,一、现象：某医院使用仪器HITACHI 7080，近两天经常出现杯空白报警2X、3X 。二、了解情况：现场检查仪器，发现比色杯污染并有液体溢出、恒温槽中有
39、异物。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,生化分析仪空白2X、3X报警分析,三、处理： 在仪器执行清洗程序时，通过观察冲洗机构1#针给反应杯打水时，如比色杯出现溢水现象，停机后用次氯酸钠清洗1#、2#、3#针和管道，重新安装后，执行恒温槽换水，再执行仪器清洗程序，如不出现杯空白2X、3X报警，则为冲洗针阻塞造成比色杯污染。 经观察仍然出现杯空白2X、3X报警。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,生化分析仪空白2X、3X报警分析,观察清洗反应杯动作过程，发现清洗机构针再下到反应杯底部吸取比色杯中废液时，电磁阀21
40、#没有出现“嘭嘭”吸合动作声，分析为21#电磁阀工作状态不好，真空负压无法吸走废液，分解、清洗21#电磁阀内部污垢，重新装上后，执行恒温槽换水，再次做清洗反应杯程序动作，不再出现杯空白2X、3X报警。 判断判断为电磁阀21#阻塞造成比色杯污染。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,生化分析仪空白2X、3X报警分析,四、分析：当仪器出现杯空白报警时，一定要注意观察仪器的状态。上面的案例中，工作人员从听电磁阀的吸合声判断出21#阀工作状态不好，造成部分反应杯在洗杯过程中没有吸走废液，1#针打水溢出，使比色杯污染及脏物溢流至恒温槽，出现该报警。,ISO1518
41、9实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,生化分析仪空白2X、3X报警分析,五、总结：在平时工作中，生化分析仪经常出现并难以处理的问题就是杯空白报警，操作人员若能够正确分析并处理杯空白报警，则能减少仪器的系统误差，保证检测结果准确并缩短维修时间。下面把这一现象众多原因及处理方法整理出来以供同仁参考：,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,生化分析仪空白2X、3X报警分析,杯空白测定原理： 日立分析仪在每个实验开始做三次杯空白，以免污染过重的比色杯影响结果的准确性。运行过程中，分析测试前测得的杯空白的值和储存在硬盘（或参数软盘）里的杯空白
42、值（我们一般称为静止杯空白）相差1000ABS 时，就会杯空白报警。 连续两次发生 2X 报警；连续三次 发生 3X 报警；连续十次则发生 10X 报警。 2X、3X 报警是警告级别，10X 报 警则会发生停机。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,分析的流程,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,生化分析仪空白2X、3X报警分析,生化分析仪空白2X、3X报警分析,原因分析及处理： 可分为光路问题、反应杯问题、磁电路问题及操作问题四类 光路因素：包括温浴液、光源灯、水浴质量、透光窗、光栅的不稳定：,ISO15189实
43、验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,生化分析仪空白2X、3X报警分析,温浴液不良： HITERGENT 应该放置在 2D3 位置，每次开机加入 6ml。有除气泡、提供电导率、杀菌的作用，如果质量不良必然影响光路稳定性。 例如：误把 HIACALID 加入 HITERGENT，造成 10X 报警。 应对：更换HITERGENT后工作正常。另外 HITERGENT 变质或有气泡造成加入量不足，也会发生上述报警。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,生化分析仪空白2X、3X报警分析,试剂针阻塞： 会造成 HITERGENT 的加量不足，水
44、浴系统除气泡不良。 应对：关闭仪器后， 用通针从下往上清通试剂针,然后再执行水浴槽换水程序， 然后再做一次标空白即可。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,生化分析仪空白2X、3X报警分析,光源灯： 光源灯的损坏有两种情况： 一种情况是烧断， 一种是灯丝损耗较大变得不稳定。 光源灯灯丝烧断后，光度计检查吸光度会非常高； 灯丝不稳定的情况发生较多见。轻度光源灯损坏可造成一些项目重复性不良，中度则发生杯空白报警，重度损坏则会发生吸光度超过限制报警。 应对：每天做光度计检查，每周要做杯清洗（可在开机程序中完成）， 340nm光度计值要求小于 19000，在吸光
45、度不稳或超过界限时要更换光源灯。 每周至少做一次杯空白：长期不做或未做完杯空白维护则会造成杯空白报警。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,生化分析仪空白2X、3X报警分析,水质不良： 标本量与水机损耗成正相关，水浴污染会发生杯空白报警 。 水质不好的影响有两种： 一种是水去离子能力的问题，这会导致很多项目不良和检测不到样本和试剂； 另一种就是水中含有杂物，会影响测定，以 340nm 波长最为严重，最严重可导致10X 报警。 应对：更换水机耗材或维修水机，以达到解决水质问题的目的。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中
46、心,生化分析仪空白2X、3X报警分析,光窗及反应杯问题： 水浴光窗不良：光窗不良会导致涡流、吸光度上升、造成 10X 报警。 应对：修复或更换光窗。 反应杯污染因素：试剂样本污染，清洗机构清洗不良；清洗液添加不良或废液排除不良。两种情况都会清洗不完善，造成反应杯的污染。 应对：检查清洗针出水量、吸水量是否合格，如发生阻塞则通针，如发生压力不够则检测电磁阀。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,生化分析仪空白2X、3X报警分析,反应杯损坏或污染 ： 反应杯损坏时抗污染能力下降，做杯空白和实验的差异会非常大，造成杯空白报警。 另外，反应杯破裂也可造成实验试剂
47、外渗，污染水浴发生杯空白报警。 应对：更换反应杯。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,生化分析仪空白2X、3X报警分析,标本不良： 不可用一些污染性、腐蚀性较大的标本如：氯仿等。 标本前处理过程中，一些质量较差的血清分离胶具有水溶性，在实验过程中这些分离胶会附着在反应杯表面造成杯空白报警。 应对：不要使用这样的标本或试剂。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,生化分析仪空白2X、3X报警分析,试剂污染： 第四代以前的循环酶法胆汁酸、一些重金属染料以及一些有机染料由于污染性强，对反应杯污染比较严重，清洗机构清洗不彻
48、底，造成杯空白异常报警。 应对： 加入特殊清洗程序； 不要使用污染特别严重的试剂； 必要时可与厂家联系，做仪器污染实验可发现污染源； 及时以污染性小的实验方法替换掉这些项目可排除报警。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,生化分析仪空白2X、3X报警分析,清洗机构不良： 当清洗机构出水不足，吸液不顺畅或清洗机构滴水时，可发生此报警。 应对： 检查清洗机构出水量是否可达反应杯四分之三以上； 检查吸水压力是否正常； 检查杯空白针出水量是否正常； 检查是否有废液外溢现象。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,生化分析仪空
49、白2X、3X报警分析,光、电、磁场的干扰： 仪器附近闪烁的强光、运动的电梯及 CT、核磁共振设备的使用都可能造成仪器信号的不稳定，产生杯空白报警，一般情况下,仪器有接地可屏蔽干扰，但过强的干扰也会穿透屏蔽。 应对：由于检验设施比较精密，一定要安置于光电磁场稳定的地点，如遇电磁信号不稳定地区要想办法回避。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,生化分析仪空白2X、3X报警分析,讨论： 导致杯空白问题的原因为光路稳定性、反应杯问题、干扰问题及操作问题四个方面。 定期做好仪器维护、做好环境保障工作可有效减少杯空白报警。 每年要进行仪器校准，以修正仪器杂散光，检验
50、光源是否正常,吸光度是否准确等。,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,案例七,标本质量对生化结果的影响,ISO15189实验室认可系列培训讲座,辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,患者血清的AST测定值出现负值,一、现象：某患者血清的AST测定反复出现负值。 二、了解情况： 该患者为60岁，男性。因怀疑是心力衰竭来医院心血管内科就诊。诊断为大动脉瓣狭窄症，风湿因子的检测显示强阳性(613 IU/ml，参考范围：0-20IU/ml)。 各免疫球蛋白的定量值：IgG为78 g/L (参考范围：11.52-14.2g/L)，IgA为2.31g/L (参考范围：2.01-2.69g/L)，IgM为1.02g/L (参考范围：0.84-1.32g/L)。,
