1、现 代 预 防 医 学 2 0 0 8 年 第 3 5 卷 第 2 期 M o d e r n P r e v e n t i v e M e d i c i n e , 2 0 0 8 , V o l . 3 5 , N O . 2基 因 芯 片 在 乙 肝 病 毒 检 测 中 的 应 用文 章 编 号 : 1 0 0 3 - 8 5 0 7 ( 2 0 0 8 ) 0 2 - 0 3 1 9 - 0 3 中 图 分 类 号 : R 3 7 3 . 2 文 献 标 识 码 : A 【 实 验 技 术 及 其 应 用 】聂 涌1, 王 长 本2, 丁 显 平1, 冯 天 芬2, 李 良 琼2,
2、 罗 德 生2, 魏 萍1, 朱 一 剑1摘 要 : 目 的 评 价 基 因 芯 片 技 术 在 同 时 进 行 乙 肝 病 毒 基 因 分 型 及 耐 药 突 变 基 因 检 测 中 的 准 确 性 、 敏 感 性 和 临 床应 用 价 值 。 方 法 5 0 例 血 清 标 本 都 用 荧 光 定 量 P C R 和 基 因 芯 片 两 种 方 法 进 行 检 测 , 然 后 对 两 种 方 法 的 结 果 进 行 比较 , 同 时 对 基 因 芯 片 技 术 检 测 结 果 中 乙 肝 病 毒 基 因 分 型 和 耐 药 突 变 基 因 的 情 况 进 行 分 析 。 结 果 荧 光 定
3、 量 P C R 的 阳性 检 出 率 为 4 6 % 。 基 因 芯 片 的 阳 性 检 出 率 为 3 8 % , 其 中 1 0 例 为 B 型 , 9 例 为 C 型 , 结 合 荧 光 定 量 的 结 果 , 在 整 个 基 因芯 片 的 检 测 结 果 中 检 测 到 的 最 低 拷 贝 数 为 1 . 3 8 7 e 3 c o p i e s / m l 。 1 9 例 阳 性 都 存 在 拉 米 夫 定 敏 感 位 点 , 共 检 测 到 3 例 对 拉米 夫 定 耐 药 的 患 者 ( 2 例 为 r t 2 0 4 I 突 变 , 1 例 为 r t 1 0 8 M 、
4、r t 2 0 4 V 突 变 ) 。 结 论 基 因 芯 片 技 术 在 同 时 进 行 乙 肝 病 毒 基因 分 型 和 耐 药 突 变 基 因 的 检 测 中 , 结 果 准 确 、 灵 敏 度 高 、 通 量 性 好 , 适 合 各 大 临 床 单 位 开 展 应 用 。关 键 词 : 基 因 芯 片 ; 乙 肝 病 毒 ; 基 因 型 ; 耐 药 突 变 基 因A P P L I C A T I O N O F M I C R O A R R A Y I N D E T E C T I O N O F H E P A T I T I S B V I R U S N I E Y o n
5、 g ,W A N G C h a n g - b e n , D I N G X i a n - p i n g , e t a l . ( I n s t i t u t e o f M e d i c a l G e n e t i c s , S c h o o l o f L i f e S c i e n c e ,S i c h u a n U n i v e r s i t y , C h e n g d u 6 1 0 0 6 4 , C h i n a )A b s t r a c t : O b j e c t i v e T o e v a l u a t e t h
6、e s e n s i t i v i t y , a c c u r a c y a n d c l i n i c a l a p p l i c a t i o n v a l u e o f m i c r o a r r a y t e c h n i q u e i n s i -m u l t a n e o u s d e t e c t i o n o f h e p a t i t i s B v i r u s g e n o t y p e s a n d d r u g r e s i s t a n c e m u t a t i o n g e n e s . M
7、 e t h o d s 5 0 s e r u m s a m p l e s w e r e d e -t e c t e d b o t h b y F l u o r e s c e n t q u a n t i t i v e P C R a n d M i c r o a r r a y . T h e n r e s u l t s o f t h e s e t w o m e t h o d s w e r e c o m p a r e d , e q u a l l y , h e p a t i t i sB v i r u s g e n o t y p e s a
8、 n d d r u g r e s i s t a n c e m u t a t i o n g e n e s d e t e c t e d b y m i c r o a r r a y w e r e a n a l y z e d . R e s u l t s P o s i t i v e d e t e c t i o n r a t e so f F Q - P C R a n d M i c r o a r r a y w e r e 4 6 % a n d 3 8 % , r e s p e c t i v e l y . A m o n g t h e s e p
9、o s i t i v e s a m p l e s d e t e c t e d b y m i c r o a r r a y , 1 0 c a s e sw e r e g e n o t y p e B , a n d 9 c a s e s w e r e g e n o t y p e C . C o n n e c t e d w i t h t h e r e s u l t s o f F Q - P C R , t h e l o w e s t c o p y n u m b e r s w e r e 1 . 3 8 7 e 3c o p i e s / m l
10、a m o n g t h e t h o s e d e t e c t e d b y m i c r o a r r a y . L a m i v u d i n e s e n s i t i v e g e n e s w e r e f o u n d e d i n a l l 1 9 p o s i t i v e c a s e s a n dL a m i v u d i n e r e s i s t a n c e m u t a t i o n g e n e s w e r e d e t e c t e d f r o m 3 o f 1 9 p o s i t
11、 i v e c a s e s ( t w o c a s e s w e r e r t 2 0 4 I , o n e c a s e w a s r t 1 0 8 Ma n d r t 2 0 4 V ) . C o n c l u s i o n M i c r o a r r a y t e c h n i q u e i s a m e t h o d w i t h h i g h a c c u r a t e , s e n s i t i v e , s p e c i f i c i t y a n d t h r o u g h p u t f o r t h ed
12、 e t e c t i o n o f H B V g e n o t y p e s a n d d r u g r e s i s t a n c e m u t a t i o n g e n e s , w h i c h c o u l d b e a p p l i e d t o b e a d i a g n o s t i c t e c h n i q u e i n t h ec l i n i c a l l a b o r a t o r y .K e y w o r d s : M i c r o a r r a y ; H e p a t i t i s B v
13、 i r u s ; G e n o t y p e s ; D r u g r e s i s t a n c e m u t a t i o n g e n e s乙 型 肝 炎 病 毒 ( H B V ) 感 染 人 类 的 肝 脏 , 它 的 D N A 含 有部 分 双 链 结 构 1 。 根 据 H B V 全 基 因 序 列 的 同 源 性 9 2 % 或 者 S基 因 序 列 同 源 性 9 6 % , 可 将 H B V 分 为 A - H 等 8 种 基 因 型 2 , 3 ,其 中 我 国 常 见 的 为 B 、 C 型 和 少 量 的 D 型 。 临 床 治 疗 应 用
14、 最 多的 抗 乙 肝 病 毒 药 物 是 核 苷 类 似 物 , 如 拉 米 夫 定 ( L a m i v u d i n e ) 、阿 德 福 韦 ( A d e f o v i r ) 等 。 但 患 者 长 期 服 用 此 类 药 物 可 诱 导H B V 基 因 区 发 生 变 异 , 会 降 低 病 毒 对 药 物 的 敏 感 性 。本 实 验 利 用 P C R 结 和 基 因 芯 片 反 向 点 杂 交 技 术 , 快 速 检测 B 、 C 、 D 3 种 常 见 基 因 亚 型 及 与 拉 米 夫 定 ( L a m i v u d i n e ) 、阿 德 福 韦 ( A
15、 d e f o v i r ) 耐 药 相 关 位 点 的 突 变 。 评 价 基 因 芯 片 技术 在 同 时 进 行 乙 型 肝 炎 病 毒 分 型 和 耐 药 突 变 基 因 检 测 的 特 异 性基 金 项 目 : 重 庆 市 万 州 区 重 点 科 技 项 目 ( 0 3 4 0 5 )作 者 简 介 : 聂 涌 ( 1 9 8 3 - ) , 男 , 在 读 硕 士 研 究 生 , 研 究 方 向 : 医 学 分子 生 物 学通 讯 作 者 : 丁 显 平 , 男 , 博 士 , 教 授 , 研 究 方 向 : 医 学 遗 传 及 分 子 生物 学 , E - m a i l :
16、 B r a i n D i n g 2 6 3 . n e t作 者 单 位 : 1 . 四 川 大 学 生 命 科 学 学 院 遗 传 医 学 研 究 所 / 生 物 资 源 与 生 态环 境 教 育 部 重 点 实 验 室 , 成 都 , 6 1 0 0 6 4 ; 2 . 重 庆 市 三 峡 中心 医 院 检 验 科和 灵 敏 度 , 并 为 这 项 技 术 的 临 床 应 用 做 评 估 。1 对 象 和 方 法1 . 1 对 象5 0 例 重 庆 市 万 州 区 乙 肝 疑 似 病 例 , 其 中 男 性 4 4 例 , 女 性6 例 , 平 均 年 龄 3 4 岁 , 部 分 服
17、 用 过 或 正 在 服 用 拉 咪 呋 啶 。1 . 2 主 要 仪 器 和 试 剂病 毒 D N A 提 取 试 剂 盒 、 H B V D N A 基 因 芯 片 试 剂 盒 ( 亚 能生 物 技 术 有 限 公 司 ) , P C R 扩 增 仪 ( 中 国 杭 州 朗 基 有 限 公 司 ) ,H B V D N A 荧 光 定 量 检 测 试 剂 盒 ( 深 圳 匹 基 生 物 工 程 有 限 公司 ) , F b F T C 2 0 0 0 荧 光 定 量 P C R 仪 ( 上 海 枫 岭 生 物 技 术 公司 ) , F Y Y - 3 型 分 子 杂 交 仪 ( 兴 化 市
18、 分 析 仪 器 厂 ) 。1 . 3 方 法5 0 例 血 清 标 本 都 用 荧 光 定 量 P C R 和 基 因 芯 片 两 种 方 法 进行 检 测 , 然 后 对 两 种 方 法 的 结 果 进 行 比 较 , 同 时 对 基 因 芯 片 技术 检 测 结 果 中 乙 肝 病 毒 基 因 分 型 和 耐 药 突 变 基 因 的 情 况 进 行 分 析 。1 . 3 . 1 荧 光 定 量 P C R 检 测 H B V D N A 荧 光 定 量 P C R 检 测 步骤 参 考 试 剂 盒 说 明 书 进 行 。1 . 3 . 2 基 因 芯 片 检 测 步 骤 基 因 芯 片
19、检 测 操 作 步 骤 参 照 试 剂 盒3 1 9 现 代 预 防 医 学 2 0 0 8 年 第 3 5 卷 第 2 期 M o d e r n P r e v e n t i v e M e d i c i n e , 2 0 0 8 , V o l . 3 5 , N O . 22 . 2 基 因 芯 片 检 测 结 果5 0 例 临 床 标 本 中 有 1 9 例 为 阳 性 , 检 出 率 3 8 % , 其 中 1 0例 为 B 型 , 9 例 为 C 型 。 在 1 2 例 阳 性 标 本 中 ( B 型 和 C 型 各6 例 ) 共 同 出 现 了 r t 1 8 0 L 、
20、 r t 2 0 4 M 、 r t 2 0 7 V 、 r t 1 8 1 A 、 r t 2 3 6 N 5个 敏 感 检 测 位 点 为 阳 性 的 情 况 ; 4 例 阳 性 标 本 ( B 型 3 例 、 C型 1 例 ) 为 r t 1 8 0 L 、 r t 2 0 7 V 、 r t 1 8 1 A 、 r t 2 3 6 N 4 个 敏 感 位 点 阳性 ; 2 例 阳 性 标 本 ( C 型 2 例 ) 为 r t 1 8 0 L 、 r t 2 0 7 V 、 r t 1 8 1 A 、r t 2 3 6 N 、 r t 2 0 4 I 阳 性 , 其 中 r t 2 0
21、 4 I 为 拉 米 夫 定 耐 药 检 测 位 点 ;1 例 ( B 型 ) 标 本 为 r t 2 0 7 V 、 r t 1 8 1 A 、 r t 2 3 6 N 、 r t 1 0 8 M 、 r t 2 0 4 V阳 性 , 其 中 r t 1 0 8 M 、 r t 2 0 4 V 为 拉 米 夫 定 耐 药 检 测 位 点 。 一 共检 测 到 3 例 对 拉 米 夫 定 耐 药 的 患 者 ( 2 例 为 r t 2 0 4 I 突 变 , 1 例为 r t 1 0 8 M 、 r t 2 0 4 V 突 变 ) 。 见 图 1 。2 . 3 两 种 方 法 的 结 果 比
22、较1 9 例 阳 性 为 两 种 方 法 共 同 检 出 , 另 外 , 用 荧 光 定 量 P C R法 检 测 出 的 4 例 阳 性 都 约 为 ( 甚 至 小 于 ) 1 1 03c o p i e s / m l , 而在 基 因 芯 片 检 测 结 果 中 呈 阴 性 ; 结 合 荧 光 定 量 的 检 测 结 果 , 在整 个 基 因 芯 片 的 检 测 结 果 中 检 测 到 的 H B V D N A 最 低 拷 贝 数 为1 . 3 8 7 e 3 c o p i e s / m l 。3 讨 论说 明 书 进 行 。 1 . 3 . 3 结 果 判 定 结 果 判 定 见
23、 表 1 。2 结 果2 . 1 H B V D N A 荧 光 定 量 P C R 结 果5 0 例 临 床 标 本 中 有 2 3 例 为 阳 性 , 检 出 率 4 6 % , 检 出 的 最低 拷 贝 数 为 4 . 7 3 5 e 2 c o p i e s / m l 。 其 敏 感 度 和 试 剂 盒 说 明 一 致 ,H B V D N A 拷 贝 数 和 C t 值 。 见 表 2 。3 2 0 现 代 预 防 医 学 2 0 0 8 年 第 3 5 卷 第 2 期 M o d e r n P r e v e n t i v e M e d i c i n e , 2 0 0
24、 8 , V o l . 3 5 , N O . 20 1 : 感 染 H B V B 亚 型 , 拉 米 夫 定 耐 药 突 变 位 点 r t 1 0 8 M 、 r t 2 0 4 V ;0 6 , 1 4 : 感 染 H B V C 亚 型 , 拉 米 夫 定 耐 药 突 变 位 点 r t 2 0 4 I ; 0 0 : 阴 性对 照图 1 基 因 芯 片 拉 米 夫 定 耐 药 突 变 基 因 检 测 结 果H B V D N A 的 定 量 检 测 可 以 用 来 对 治 疗 中 H B V 的 复 制 和 反应 进 行 评 估 , 所 以 广 泛 的 应 用 于 临 床 。 在
25、 已 被 用 来 检 测 血 清 中的 H B V D N A 多 种 检 测 方 法 中 , P C R 法 是 最 为 灵 敏 的 , 能 检 测到 1 0 - 5 p g 的 H B V D N A 4 。 目 前 临 床 上 尚 无 统 一 规 范 的 检 测H B V 基 因 型 及 耐 药 突 变 位 点 的 方 法 , 国 内 外 已 建 立 的 H B V 基因 分 型 方 法 主 要 有 直 接 测 序 法 、 基 因 型 特 异 性 线 形 探 针 检 测法 、 基 因 型 特 异 引 物 P C R 法 、 S / p r e S 区 P C R - R F L P 法
26、等 , 这些 传 统 的 方 法 虽 各 有 特 点 但 由 于 它 们 各 自 都 存 在 不 同 程 度 的 缺陷 而 在 临 床 应 用 中 受 到 限 制 。 一 些 杂 交 技 术 包 括 条 形 斑 点 杂交 、 交 联 分 析 和 分 支 D N A 信 号 扩 增 技 术 , 虽 然 敏 感 但 都 比 较复 杂 。基 因 芯 片 ( g e n e c h i p ) , 又 称 基 因 微 矩 阵 ( m i c r o a r r a y ) , 其原 理 是 将 大 量 特 定 的 基 因 片 段 或 寡 核 苷 片 段 作 为 探 针 有 序 地 和高 密 度 地 排
27、 列 固 定 于 玻 璃 或 膜 等 载 体 上 , 然 后 与 待 测 有 标 记 的样 品 核 酸 按 碱 基 配 对 的 原 则 进 行 杂 交 , 最 后 通 过 检 测 得 出 结 果 5 。由 于 基 因 芯 片 可 以 一 次 性 对 大 量 序 列 进 行 检 测 分 析 , 具 有 高 通量 、 并 行 、 快 速 等 特 点 , 解 决 了 传 统 核 酸 印 迹 杂 交 技 术 操 作 繁杂 、 自 动 化 程 度 低 、 检 测 序 列 少 、 效 率 低 的 缺 点 , 因 而 在 病 毒学 研 究 特 别 是 病 毒 基 因 表 达 谱 研 究 、 病 毒 感 染
28、的 诊 断 、 病 毒 流行 病 学 研 究 等 方 面 广 泛 应 用 6 。H B V 基 因 型 反 映 了 H B V 自 然 感 染 史 发 生 的 变 异 特 点 , 是病 毒 变 异 进 化 的 结 果 。 H B V 基 因 型 有 一 定 地 域 分 布 特 征 , 我国 有 A 、 B 、 C 、 D 型 , 主 要 是 B 型 和 C 型 , 既 往 研 究 认 为 北方 以 C 型 为 主 , 南 方 以 B 型 为 主 , D 型 仅 见 于 少 数 民 族 地 区如 西 藏 和 新 疆 , 本 文 检 测 的 标 本 中 基 因 B 型 占 5 3 % 、 基 因
29、C型 占 4 7 % , 此 结 果 与 上 述 相 符 。拉 米 夫 定 是 一 种 口 服 的 核 苷 类 似 药 物 , 它 能 抑 制 H B VD N A 的 合 成 。 前 期 的 临 床 实 验 表 明 拉 米 夫 定 可 快 速 抑 制 H B VD N A 的 复 制 , 使 转 氨 酶 的 正 常 化 并 且 有 较 高 的 安 全 性 7 。 拉 米夫 定 的 耐 药 情 况 常 常 发 生 在 H B V 逆 转 录 酶 C 区 上 的 Y M D D 基序 与 保 守 B 区 ( 主 要 包 括 r t 1 0 8 M 、 r t 2 0 4 V 、 r t 2 0
30、4 I 3 个 突 变 位点 ) , 这 就 导 致 了 拉 米 夫 定 与 其 干 扰 H B V 病 毒 复 制 的 药 物 结 合位 点 多 聚 酶 的 亲 和 力 下 降 或 消 失 8 。 阿 德 福 韦 是 一 种 腺 苷 酸 的类 似 物 , 具 有 广 谱 抗 病 毒 的 活 性 , 主 要 作 用 于 疱 疹 病 毒 、 逆 转录 病 毒 和 肝 脱 氧 核 糖 核 酸 病 毒 。 它 仅 仅 只 需 要 两 步 磷 酸 化 作 用就 能 达 到 它 的 活 性 代 谢 水 平 , 而 核 苷 类 似 物 则 需 要 3 步 。 此 种药 物 是 通 过 竞 争 性 的 抑
31、制 d A T P 结 合 到 病 毒 D N A 上 , 从 而 起到 阻 止 病 毒 D N A 链 合 成 的 作 用 9 。 阿 德 福 韦 耐 药 变 异 主 要 是H B V 逆 转 录 酶 B 区 的 r t A 1 8 1 V / T 和 D 区 的 r t N 2 3 6 T 产 生 的 1 0 。本 次 实 验 用 基 因 芯 片 技 术 同 时 检 测 了 拉 米 夫 定 和 阿 德 福 韦的 敏 感 及 耐 药 检 测 位 点 。 虽 然 只 检 测 到 3 例 对 拉 米 夫 定 耐 药 的患 者 而 未 检 测 到 阿 德 福 韦 耐 药 位 点 , 但 是 敏 感
32、 位 点 和 耐 药 位 点是 对 应 的 。 这 说 明 了 r t 1 0 8 M 、 r t 2 0 4 V 、 r t 2 0 4 I 、 r t 1 8 1 V 、 r t 2 3 6 T这 5 个 位 点 为 最 常 见 的 检 出 位 点 , 与 上 述 一 致 , 证 明 了 基 因 芯片 检 测 的 准 确 和 高 通 量 的 特 性 。通 过 比 较 基 因 芯 片 检 测 结 果 与 荧 光 定 量 P C R 检 测 结 果 ,可 以 得 到 基 因 芯 片 技 术 能 检 测 的 最 低 拷 贝 数 为 1 . 3 8 7 e 3 c o p i e s /m l ,
33、 稍 低 于 荧 光 定 量 P C R 的 灵 敏 度 , 但 高 于 类 似 相 关 文 献 1 1 报 道 的 1 1 05c o p i e s / m l 的 灵 敏 度 , 说 明 此 项 基 因 芯 片 技 术 检测 H B V D N A 提 高 了 检 测 的 敏 感 性 。此 外 , 本 实 验 采 用 D N A 芯 片 反 向 膜 杂 交 技 术 , 针 对 H B V基 因 设 计 3 种 亚 型 和 耐 药 突 变 位 点 的 探 针 , 并 固 定 在 固 相 支 持物 ( 硝 酸 纤 维 素 膜 ) 上 , 然 后 以 标 记 了 生 物 素 的 引 物 扩 增
34、 该 区段 序 列 , 其 P C R 产 物 与 膜 条 进 行 杂 交 , 再 通 过 过 氧 化 物 同 工酶 ( P O D ) 的 信 号 放 大 作 用 即 可 进 行 检 测 。 检 测 结 果 可 直 接 用肉 眼 分 辨 , 这 样 就 使 得 操 作 变 得 更 为 简 便 且 节 省 了 成 本 。综 上 所 述 , 用 基 因 芯 片 技 术 同 时 进 行 乙 型 肝 炎 病 毒 分 型 和耐 药 突 变 基 因 检 测 具 有 高 特 异 性 、 高 灵 敏 度 以 及 高 通 量 的 特点 , 并 具 有 常 规 检 测 方 法 所 不 具 备 的 突 出 优 势
35、 和 良 好 的 临 床 应用 前 景 , 适 合 广 大 医 院 开 展 。参 考 文 献 :M a h o n e y F J . U p d a t e o n d i a g n o s i s , m a n a g e m e n t , a n d p r e v e n t i o n o fh e p a t i t i s B v i r u s i n f e c t i o n J . C l i n . M i c r o b i o l , R e v , 1 9 9 9 , 1 2 :3 5 1 - 3 6 6 .S t u y v e r L , G e n d
36、 t S D , G e y t C V , e t a l . A n e w g e n o t y p e o f h e p a t i t i sB v i r u s : c o m p l e t e g e n o m e a n d p h y l o g e n e t i c r e l a t e d n e s s J . J G e nV i r o l , 2 0 0 0 , 8 1 : 6 7 - 7 4 .A r a u z - R u i z P , N o r d e r H , R o b e r t s o n B H , e t a l . G e
37、n o t y p e H : an e w A m e r i n d i a n g e n o t y p e o f h e p a t i t i s B v i r u s r e v e a l e d i n C e n t r a lA m e r i c a J . J G e n V i r o l , 2 0 0 2 , 8 3 : 2 0 5 9 - 2 0 7 3 .K a n e k o S , F e i n s t o n e S M , M i l l e r R H . R a p i d a n d s e n s i t i v e m e t h o
38、 df o r t h e d e t e c t i o n o f s e r u m h e p a t i t i s B v i r u s D N A u s i n g t h e p o l y -m e r a s e c h a i n r e a c t i o n t e c h n i q u e J . J . C l i n . M i c r o b i o l , 1 9 8 9 ,2 7 : 1 9 3 0 - 1 9 3 3 .S c h e n a M . D N A m i c r o a r r a y s , a p r a c t i c a l
39、 a p p r o a c h M . L o n d o n :O x f o r d U n i v e r s i t y P r e s s , 1 9 9 9 . 1 2 2 2 0 .彭 俊 平 , 金 奇 . 基 因 芯 片 技 术 在 病 毒 学 研 究 中 的 应 用 现 状 J . 病毒 学 报 , 2 0 0 3 , 1 9 ( 3 ) : 2 8 1 - 2 8 3 .L a i C L , C h i e n R N , L e u n g N W , e t a l . A o n e - y e a r t r i a l o f l a m i v u -d
40、i n e f o r c h r o n i c h e p a t i t i s B J . N E n g l J M e d , 1 9 9 8 , 3 3 9 : 6 1 - 6 8 .A h m e d S N S , T a v a n D , P i c h o u d C , e t a l . E a r l y d e t e c t i o n o f v i r a lr e s i s t a n c e b y d e t e r m i n a t i o n o f h e p a t i t i s B v i r u s p o l y m e r a
41、s e m u t a -t i o n s i n p a t i e n t s t r e a t e d b y l a m i v u d i n e f o r c h r o n i c h e p a t i t i s B J .H e p a t o l o g y , 2 0 0 0 , 3 2 ( 5 ) : 1 0 7 8 - 1 0 8 8 .D e l a u g e r r e C , M a r c e l i n A G , T h i b a u l t V , e t a l . H u m a n I m m u n o d -e f i c i e
42、n c y V i r u s ( H I V ) T y p e 1 R e v e r s e T r a n s c r i p t a s e R e s i s t a n c eM u t a t i o n s i n H e p a t i t i s B V i r u s ( H B V ) - H I V - C o i n f e c t e d P a t i e n t sT r e a t e d f o r H B V C h r o n i c I n f e c t i o n O n c e D a i l y w i t h 1 0 M i l l i
43、g r a m s o fA d e f o v i r D i p i v o x i l C o m b i n e d w i t h L a m i v u d i n e A n t i m i c r o b J . A -g e n t s C h e m o t h e r , 2 0 0 2 M a y , 4 6 : 1 5 8 6 - 1 5 8 8 .B a r t h o l o m e u s z A , T e h a n B G , C h a l m e r s D K . C o m p a r i s o n s o f t h eH B V a n d
44、H I V p o l y m e r a s e , a n d a n t i v i r a l r e s i s t a n c e m u t a t i o n s J .A n t i v i r . T h e r , 2 0 0 4 , 9 : 1 4 9 - 1 6 0 .陈 伟 烈 , 蔡 晓 莉 , 魏 绍 静 , 等 . 基 因 芯 片 技 术 在 乙 肝 病 毒 基 因 型及 Y M D D 变 异 检 测 中 的 应 用 J . 中 国 实 验 诊 断 学 , 2 0 0 7 , 1 1( 2 ) : 2 0 7 - 2 1 2 .( 收 稿 日 期 : 2 0 0 7 - 0 6 - 2 1 ) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 3 2 1
