1、西安市中心医院输血科ABO 血型鉴定（正定型法）SOP 文件编号：A1执行日期：2006-01-01编辑版本：第二版ABO 血型鉴定（正定型法）标准操作规程1.目的 规范 ABO 鉴定实验，确保 ABO 血型鉴定结果的准确。2.适用范围 发血室，血型血清学实验室。3.职责 具有初级以上职称（检验） ，在血型鉴定和交叉配血工作岗位的工作人员有权执行本规程。出现血型鉴定结果本人无法判定，不能发出实验结果时，应当向上一级职称的检验人员或直接向本部门负责人报告并寻求技术上指导和帮助。4.监督 交叉配血试验审核者及实验室负责人监督工作人员是否遵从此项规程。5.原理 根据 IgM 类特异性血型抗体与红细胞
2、上特异性抗原结合能够出现凝集反应的原理，用已知 IgM 类特异性标准抗血清与被检红细胞在盐水介质中反应，若出现凝集现象，表明被检红细胞膜上有与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定被检者的血型。6.材料 （1）抗 A、抗 B 血型定型试剂（单克隆抗体）规格：10ml/支保存：于 2-8避光保存，有效期内使用效价：1128包装：抗 A 抗 B 各一支/盒塑料瓶有效期：自成品鉴定合格之日起 1 年。批准文号：国药准字 S10960081厂商：长春博德生物技术有限责任公司（2）受检者 3%-5%红细胞盐水悬液。（3）经过校准的台式离心机。7.操作5%被检红细胞生理盐水悬液制备；抗凝血离心或红细胞自然沉
3、降后取下层红细胞 2 滴于小试管中，加入生理盐水 2ml 用尖滴管将红细胞与生理盐水充分混匀，2500r/min 离心 3min 后弃去上清液，重复洗涤 3 次后，自管底吸取 1 滴压迹红细胞加入 19 滴生理盐水中，此即为 5%的红细胞生理盐水悬液。（1）平板法（玻片法）标记玻片或白瓷板 取洁净的玻片或白瓷板 1 块，用蜡笔划出小格，做好编号标记抗 A、抗 B。加标准抗血清 在玻片或白瓷板已标记的区域内分别滴加抗 A、抗B标准抗血清 1 滴。加被检红细胞悬液 在滴加抗 A、抗 B 标准抗血清的小格中分别加被检者 5%的红细胞生理盐水悬液各 1 滴，不断摇动玻片或白瓷板，使血清与红细胞充分混匀
4、，室温放置 15-30min。观察结果先轻轻摇动玻片，肉眼观察有无颗粒状凝集及凝集程度，再用低倍镜观察，判定阴阳性及阳性程度。判断结果凝集结果判断标准：.凝集判断标准：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，显微镜下红细胞分散存在，无凝集靠拢现象为阴性；红细胞出现凝集为阳性。凝集强弱程度判断标准：有助于 A、B 亚型，类 B 抗原的发现，在低倍镜下凝集程度强弱判断标准如下：一片或几片凝块，仅有少数游离单个红细胞（+）呈数个大颗粒状凝块，有数个游离单个红细胞（+）数个小凝集颗粒和一部分微细凝集颗粒游离红细胞约占 1/2 为（+）肉眼可见无数细纱状小凝集颗粒，周围有较多的游离红细胞，于镜下观察，每个凝集团中
5、有 5-8 个以上的红细胞凝集为（+）可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞（）可见极少数红细胞凝集，而大多数红细胞仍呈分散分布为混合凝集外观镜下未见红细胞凝集，红细胞均匀分布为（-）（2）试管法标记试管 取小试管 2 支，分别标记抗 A、抗 B加标准抗血清分别加入抗A、抗B标准血清各1滴于相应标记的试管中加入红细胞悬液分别加入被检者5%红细胞生理盐水悬液1滴于各试管中，混匀，立即以 1000r/min，离心 1 分钟。观察结果先观察上层液有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或轻轻弹动，使管底的红细胞慢慢浮起，肉眼观察有无凝集，再用低倍镜观察凝集强弱程度，如有轻微凝集或不见凝集，必须将反
6、应物倒于玻片上，再以低倍镜观察判断结果判断标准：.凝集判断标准：完全凝集管，上层液体清亮、无色，底部有红细胞凝块，管底细胞呈花边状，轻弹试管凝块分布散开。完全不凝集管，上层液体清亮、无色，血细胞均匀地沉到管底，边缘整齐，用手指轻弹试管，红细胞像一缕烟似的立即上升，随即成均匀的悬液。.凝集强弱程度：判断标准与玻片法一致。8.结果发出根据实验结果，填写实验记录、血型鉴定报告单，审核无误后，发出报告单。9.标本的采集与处理对输血前检查血液标本的严格要求，是安全输血的关键性措施之一送检标本的要求、检查及核对（1）标本必须标记，确实无误的来自患者和献血者。并和血液申请单上的内容核对确认。 （2）标本必须有正确的标签符合患者的体内状态。（3）防止血样的稀释和溶血的产生，溶血标本一般不能使用。（4）血清或血浆均可做检查，但是使用血浆标本时，应注意纤维蛋白原和补体的干扰。（5）患者标本一般要求不超过2天的期限，反复输血的受血者应抽取新的标本。（6）如果患者使用肝素治疗，则应用鱼精蛋白，使标本凝结。（7）如果患者使用右旋糖酐、聚乙酰吡咯烷酮（PVP）等治疗应注意将红细胞洗涤。（8）输血后所有的标本均应妥善保存于2-8中，至少一周。9.注意事项（1）为了便于鉴别，抗A血型试剂染色呈蓝色，抗B血型试剂染色呈黄
