1、 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http:/文 章 编 号 : 1001 - 7658 (2006) 05 - 0420 - 02 【 研 究 报 告 】柠 檬 酸 与 热 力 联 合 杀 菌 作 用 的 研 究邢 书 霞 马 玲 张 剑 李 新 武(中 国 疾 病 预 防 控 制 中 心 环 境 与 健 康 相 关 产 品 安 全 所 ,北 京 100021)提 要 为 观 察 柠 檬 酸 与 热 力 联 合 应 用 杀 菌 效 果 ,探 索 其 用 于 血
2、 液 透 析 机 管 路 消 毒 的 可 能 性 ,采 用 载 体 浸 泡 定 量 杀菌 试 验 和 模 拟 现 场 试 验 进 行 了 研 究 。 结 果 ,将 8200 mg/L柠 檬 酸 水 溶 液 加 温 至 (80 1) 联 合 作 用 20 m in,对 载 体上 枯 草 杆 菌 黑 色 变 种 芽 孢 杀 灭 对 数 值 3. 00。 将 8200 mg/L柠 檬 酸 水 溶 液 加 温 至 (54 1) 联 合 作 用 30 m in, ,对枯 草 杆 菌 黑 色 变 种 芽 孢 杀 灭 对 数 值 仅 为 1. 13。 将 8200 mg/L柠 檬 酸 水 溶 液 加 温 至
3、 38 温 度 联 合 作 用 30 m in,对 枯草 杆 菌 黑 色 变 种 芽 孢 基 本 没 有 杀 灭 作 用 。 将 含 8200 mg/L柠 檬 酸 的 水 溶 液 加 温 至 80 对 透 析 机 管 路 循 环 作 用 7. 5m in,对 污 染 在 管 路 中 枯 草 杆 菌 黑 色 变 种 芽 孢 平 均 消 除 对 数 值 5. 00。 结 论 ,柠 檬 酸 与 80 温 度 联 合 作 用 具 有 良 好杀 灭 细 菌 芽 孢 的 作 用 ,并 可 有 效 杀 灭 血 液 透 析 机 管 路 中 污 染 的 细 菌 芽 孢 。关 键 词 柠 檬 酸 ;热 力 ;枯
4、草 杆 菌 黑 色 变 种 芽 孢 ;血 液 透 析 机中 图 分 类 号 : R187 文 献 标 识 码 : BSTUDY O N COM B INED GERM IC IDAL EFFECT O F C ITR IC AC ID AND HEATX IN G Shu - xia, MA L ing, ZHAN G J ian, L I X in - w u( Institute for Environmental Health and Related Product Safety, Chinese Center forD isease Prevention and Control, Be
5、ijing100021, China)Abstract In order to observe the germ icidal efficacy of combined use of citric acid and heat and to exp lore the possibilityof their app lication to disinfection of the p ipeline of hemodialysis machine, carrier immersion quantitative germ icidal testand simulated field test were
6、 used to carry out study. Results: The killing logarithm value of spores ofB acillus subtilis va r.n iger on carrier exposed to the combined action of 8200 mg/L citric acid water solution heated to ( 80 1) for 20 m inwas 3. 00 and that of the spores exposed to the combined action of 8200 mg/L citric
7、 acid water solution heated to (54 1) for 30 m in was only 1. 13. Combined action of 8200 mg/L citric acid water solution heated to 38 for 30 m in essen2tially had no killing effect on spores ofB. subtilis va r. n iger. W hen the water solution containing citric acid 8200 mg/Lwas heated to 80 and ci
8、rculated in the p ipeline of hemodialysis machine for 7. 5 m in, the average elim inating logarithmvalue of spores ofB. subtilis va r. n iger contam inating the p ipeline was 5. 00. Conclusion: Conbined action of citric acidand 80 heat has good sporicidal efficacy and can effectively kill the bacter
9、ial spore contam inating the p ipeline of hemodi2alysis machine.Key words citric acid; heat; B actillus subtilis var. niger spore; hem odialysis m achine柠 檬 酸 是 一 种 有 机 酸 ,化 学 名 2 - 羟 基 丙 烷 -1, 2, 3 -三 羧 酸 ,常 用 作 食 品 添 加 剂 ,也 是 重 要 医 药工 业 原 料 。 柠 檬 酸 可 作 为 防 腐 剂 ,具 有 一 定 抗 菌 作用 ,曾 有 关 于 柠 檬 酸 与 微 波
10、联 合 作 用 杀 菌 效 果 研 究报 道 1 ,但 未 见 到 有 关 消 毒 应 用 报 道 。 为 了 解 柠 檬酸 与 热 力 联 合 作 用 杀 灭 细 菌 芽 孢 的 效 果 ,探 索 其 用于 血 液 透 析 机 管 路 消 毒 的 可 能 性 ,在 实 验 室 进 行 杀菌 试 验 和 模 拟 现 场 试 验 研 究 。 现 将 结 果 报 告 如 下 。1 方 法1. 1菌 片 制 备 2将 制 备 好 的 枯 草 杆 菌 黑 色 变 种 (ATCC 9372)芽孢 悬 液 ,用 含 胰 蛋 白 胨 的 稀 释 液 配 制 成 含 菌 量 为1 108 5 108 cfu
11、/m l芽 孢 悬 液 ;取 10 l芽 孢 悬 液滴 染 于 无 菌 脱 脂 白 平 纹 布 片 ( 1. 0 cm 1. 0 cm )上 ,置 37 温 箱 内 干 燥 备 用 。1. 2中 和 剂 鉴 定 试 验以 枯 草 杆 菌 黑 色 变 种 芽 孢 为 代 表 菌 ,设 6组 试验 ,按 载 体 定 量 杀 菌 试 验 在 设 计 的 最 高 试 验 浓 度 下进 行 试 验 。 试 验 结 果 ,以 第 6组 不 长 菌 ,第 3、 4、 5组组 间 菌 数 相 差 不 超 过 10% ,第 1组 不 长 菌 或 菌 数 远少 于 第 2组 ,第 2组 菌 数 100 cfu /
12、片 ,表 明 所 用 中和 剂 及 其 浓 度 适 宜 。1. 3载 体 定 量 杀 菌 试 验将 柠 檬 酸 用 无 菌 蒸 馏 水 稀 释 至 应 用 浓 度 (8200024 Chinese Journal of D isinfection 2006; 23 (5) 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http:/mg/L) ,以 每 1菌 片 5 m l量 将 柠 檬 酸 溶 液 注 入 平 皿内 (阳 性 对 照 为 无 菌 蒸 馏 水 ) ,在 设 计
13、的 3组 不 同 温度 (36 38 、 53 55 和 79 81 )水 浴 中 预 热 10m in。 将 芽 孢 菌 片 浸 没 于 柠 檬 酸 溶 液 中 ,待 作 用 至 规定 时 间 ,取 出 菌 片 放 入 含 有 5m l中 和 剂 试 管 中 。 中和 作 用 10 m in,充 分 振 荡 洗 脱 ,取 1 m l洗 脱 液 接 种培 养 ,进 行 活 菌 计 数 ,计 算 杀 灭 对 数 值 。 试 验 至 少 重复 3次 。1. 4对 血 液 透 析 机 管 路 模 拟 现 场 消 毒 试 验开 启 血 液 透 析 机 ( Fresenius Medical care4
14、800H) ,将 配 制 好 的 枯 草 杆 菌 黑 色 变 种 芽 孢 悬 液 与柠 檬 酸 蒸 馏 水 溶 液 先 后 吸 入 透 析 管 路 中 ,使 枯 草 杆菌 黑 色 变 种 芽 孢 浓 度 为 1 107 5 107 cfu /m l,柠檬 酸 浓 度 为 8200 mg/L。 待 其 在 透 析 管 路 中 循 环 一周 后 ,于 透 析 管 路 中 部 设 采 样 口 采 取 样 液 ,作 为 消 毒前 菌 数 对 照 。 然 后 按 血 液 透 析 机 消 毒 程 序 操 作 ,利用 透 析 机 上 加 热 装 置 加 温 至 80 ,分 别 运 行 作 用7. 5 m i
15、n和 15 m in,分 别 在 采 样 口 ,取 样 液 1 m l加 入9 m l中 和 剂 试 管 内 。 中 和 作 用 10 m in,取 样 液 1 m l接 种 平 皿 作 琼 脂 倾 注 培 养 ,进 行 活 菌 计 数 ,计 算 对 枯草 杆 菌 黑 色 变 种 芽 孢 的 杀 灭 对 数 值 。 试 验 至 少 重 复3次 。2结 果2. 1中 和 剂 鉴 定 试 验 结 果试 验 结 果 表 明 ,用 含 1000 mg/L吐 温 80的 磷 酸盐 缓 冲 液 ( PBS)作 为 中 和 剂 ,可 有 效 中 和 加 温 至80 最 高 试 验 浓 度 的 柠 檬 酸 对
16、 试 验 菌 的 残 留 作 用 ,且 中 和 剂 和 中 和 产 物 对 试 验 菌 及 培 养 基 无 不 良 影 响(表 1)。2. 2加 热 不 同 温 度 柠 檬 酸 溶 液 杀 菌 试 验 结 果将 8200 mg/L柠 檬 酸 水 溶 液 加 温 至 (80 1) 联 合 作 用 20 m in,对 载 体 上 枯 草 杆 菌 黑 色 变 种 芽 孢杀 灭 对 数 值 3. 00。 将 8200 mg/L柠 檬 酸 水 溶 液 加温 至 (54 1) 联 合 作 用 30 m in, ,对 枯 草 杆 菌 黑 色变 种 芽 孢 杀 灭 对 数 值 仅 为 1. 13。 将 820
17、0 mg/L柠檬 酸 水 溶 液 加 温 至 38 温 度 联 合 作 用 30 m in,对 枯草 杆 菌 黑 色 变 种 芽 孢 基 本 没 有 杀 灭 作 用 (表 2)。表 1 柠 檬 酸 中 和 剂 鉴 定 试 验 结 果组 别 平 均 生 长 菌 数 ( cfu /片 )消 毒 剂 菌 片 65(消 毒 剂 菌 片 ) +中 和 剂 125中 和 剂 +菌 片 1 683 000(消 毒 剂 中 和 剂 ) +菌 片 1 775 000稀 释 液 菌 片 1 808 000阴 性 对 照 0表 2 不 同 温 度 下 柠 檬 酸 对 枯 草 杆 菌 黑 色 变 种 芽 孢 杀 灭效
18、 果作 用 温 度( )阳 性 对 照 组平 均 对 数 值作 用 不 同 时 间 (m in)平 均 杀 灭 对 数 值10 20 3036 38 6. 11 0. 10 0. 24 0. 4753 55 6. 04 0. 18 0. 64 1. 1379 81 5. 72 2. 42 3. 00 3. 00注 :柠 檬 酸 浓 度 均 为 8200 mg/L。2. 3柠 檬 酸 与 热 力 联 合 作 用 对 血 液 透 析 机 管 路 模 拟现 场 消 毒 试 验 结 果试 验 结 果 表 明 ,将 含 8200 mg/L柠 檬 酸 的 水 溶液 加 温 至 80 对 透 析 机 管 路
19、 循 环 作 用 7. 5 m in,对污 染 在 管 路 中 枯 草 杆 菌 黑 色 变 种 芽 孢 (含 细 菌 芽 孢对 数 值 为 7. 49)平 均 消 除 对 数 值 5. 00。3讨 论加 热 可 以 提 高 化 学 消 毒 剂 的 杀 菌 活 性 、 可 扩 大杀 菌 谱 、 加 快 杀 菌 速 度 ,这 已 经 得 到 多 数 研 究 证 实 。某 些 有 机 酸 可 以 用 作 食 品 防 腐 剂 ,具 有 一 定 抗 菌 作用 ,杀 菌 力 较 弱 ,不 可 直 接 用 作 消 毒 剂 ,但 在 加 热 条件 下 显 示 出 较 强 的 杀 菌 作 用 ,且 无 毒 、
20、无 腐 蚀 。 本 研究 结 果 发 现 , 8200 mg/L柠 檬 酸 溶 液 加 热 到 55 即显 示 出 杀 芽 孢 作 用 ,且 随 温 度 升 高 杀 芽 孢 作 用 明 显增 强 ,此 与 林 军 明 等 的 报 道 相 一 致 3 。 微 波 照 射 与柠 檬 酸 协 同 杀 灭 细 菌 芽 孢 的 作 用 ,早 有 研 究 报道 1 ,将 5000 mg/L柠 檬 酸 溶 液 经 500 W 功 率 的 微波 照 射 3. 0 m in,对 其 中 载 体 上 枯 草 杆 菌 黑 色 变 种 芽孢 杀 灭 率 可 达 100%。血 液 透 析 机 消 毒 目 前 主 要 使
21、 用 次 氯 酸 钠 、 甲 醛或 过 氧 乙 酸 消 毒 化 学 消 毒 剂 消 毒 处 理 ,既 存 在 毒 性问 题 ,也 有 损 坏 性 。 利 用 透 析 机 内 配 装 的 加 热 系 统 ,将 某 些 无 毒 无 腐 蚀 物 质 加 热 消 毒 即 可 降 低 这 些 副 作用 。 本 研 究 证 明 ,将 8200 mg/L柠 檬 酸 稀 释 液 在 透析 机 内 加 温 至 80 时 ,循 环 作 用 7. 5 m in,即 可 杀 灭混 入 柠 檬 酸 溶 液 内 的 枯 草 杆 菌 黑 色 变 种 芽 孢 达 5. 00log以 上 。 结 果 提 示 ,带 加 热 系
22、统 的 血 液 透 析 机 可 以与 柠 檬 酸 等 有 机 酸 类 物 质 协 同 作 用 ,解 决 消 毒 问 题 ,值 得 进 一 步 进 行 系 统 研 究 。参 考 文 献 1 刘 怀 田 , 丁 兰 英 , 杨 华 明 . 微 波 与 柠 檬 酸 协 同 杀 菌 作 用 的 研究 J . 中 国 消 毒 学 杂 志 , 1995; 12 (4) : 242. 2 卫 生 部 法 制 与 监 督 司 . 消 毒 技 术 规 范 M . 北 京 :中 华 人 民 共和 国 卫 生 部 , 2002: 16 17. 3 林 军 明 ,魏 兰 芬 . 费 森 尤 斯 消 毒 剂 杀 灭 微 生 物 效 果 观 察 J .预 防 医 学 情 报 杂 志 , 2000; 16 (3) 196.(2005 - 12 - 31收 稿 )124中 国 消 毒 学 杂 志 2006年 第 23卷 第 5期
