1、使用全自动免疫组化机的体会摘要：免疫组化在病理诊断中起着非常重要的作用。免疫组化技术在肿瘤分类、诊断、预后判断方面广泛应用。随着全自动免疫组化机广泛应用，作者把使用了一段时间全自动免疫组化仪后的体会与大家探讨。本文通过对免疫组化技术的原理的探讨，分析了全自动免疫组化机在应用中注意事项及优点，从而探讨其应对措施。 关键词：免疫组化技术；全自动免疫组化染色机 免疫组织化学染色技术是病理技术中的一项重要染色方法，固免疫组织化学染色技术在目前病理诊断中起着非常重要的辅助作用，病理医师在很多情况下需要借助免疫组化来明确病变的性质、类型以及累及范围等。免疫组化技术的应用，为相关肿瘤组织抗原的治疗以及预后供
2、了重要的依据。可是，在当前全自动免疫组化仪广泛应用的同时，也伴随着一些注意事项及优点。下面从免疫组化染色原理来探讨以下几点注意事项及优点。 1 免疫组化染色技术的原理 免疫组化染色技术是通过抗体结合特殊抗原用 DAB 显色及苏木素复染的染色技术。这些抗体抗原的相互结合往往是以与这抗体相结合的酶元素来进行显示。主要是因为没有着色物质的特性，抗原与抗体的结合使得一些有色物质在抗体-抗原相结合的位置进行沉淀。酶沉淀的物质主要包括蛋白质、多肽、激素、病原体等，用光学显微镜才能看到。目前使用甲醛固定促使了蛋白的交和凝固，使蛋白质的结构发生了变化，但对抗原决定镞的结构（苯环）不会产生影响。在使用蛋白酶进行
3、消化后，将抗原决定镞中的一些杂蛋白行清除，从而使其打开交联，在通过使用微波和高压锅等热抗原的修复工，使抗原决定镞发生最大程度的暴露。从而提升免疫组化染色的敏感性1。 2 全自动免疫组化仪染色中注意以下几个问题 2.1 抗体的浓度，在滴加一抗时的量，一般在100ul（23 滴） 。 2.2 组织的前期处理 组织固定时间以 46h 为宜，最长不超过 24h，过长过短都会对染色结果产生不良影响。因组织固定时间过长会封闭或破坏组织的抗原活性，而固定时间过短则抗原弥散和组织结构不清晰。目前一般都用中性福尔马林固定，其组织蜡块中心出现凹陷现象，且凹陷处组织变软，不易切全。固定欠佳的组织免疫组化染色往往失真
4、，某些较脆弱的抗原（如 Ki-67 等核抗原）易丢失，而细胞间的裂隙形成也容易造成膜抗原的假阳性。2.3 冷冻过的组织，冷冻过的组织经过常规固定，石蜡包埋后，原则上是可以用于免疫组化检测，但冷冻过程有可能造成抗原的结构发生变化，因而在一定程度上可能会影响到某些抗原的检测效果。 2.4 切片的选择 满意的切片质量是保证染色质量的基本要求，切片时要做到平整和厚薄适中，以 46um 为宜，避免出现皱褶，气泡。为避免脱片对染色结果的影响，需染色前对玻片进行处理。最好使用配套的涂胶玻片，目前常用的是用 APEs 与多聚赖氨酸（PolyLLysine）制成的涂胶玻片，其防脱效果较为满意；因免疫组化修复时需
5、要高温，固选择干净的涂胶切片，如涂胶不均匀或切片不干净，在封盖缓冲液上滴加一抗会出现水纹状，不会广泛覆盖组织上，固出现组织上斑块状着色。 2.5 定时清洗保养仪器上的加热片，去除污垢，防止加热片加热不均匀，检查废液管是否通畅，防止（苏木苏杂质及脱落的组织堵塞管道）排液不畅导致夜间机器自动停止，检查试剂桶与仪器的连接是否严密2。 3 全自动免疫组化仪的优点2 采用全自动免疫组化染色仪进行免疫组化制片的有点，具有以下的优点：工作效率提高。全自动免疫组化染色机通过程序预设，可从脱蜡、抗原修复、滴加一抗、DAB显色直至复染自动满意运行；免疫组化操作标准化。在Ventnaa BenchMarkGX 全自
6、动染色机上，实验步骤均由电脑程序控制。机器本身带有吹气与液体封盖膜混匀过程，已保证切片的染色均匀性，避免边缘不着色；液体封盖膜保护了滴加一抗后孵育时的温度及抗原修复；每一步后都要清洗减少了切片的非特异性着色 3；免疫组织化学试剂的标准化，全自动免疫组化机所有使用的试剂包括苏木素、DAB 显色液、清洗缓冲液、油性封盖膜、修复液、脱蜡液，都由 Ventnaa 公司生产，并进行严格的质量检测。确保每批试剂的稳定性3；便于玻片归档，自动打号机，标签不退色；安全环保，配有废液回收系统，可集中处理废液；全自动免疫组化仪有完整的质控记录，每张玻片都有详细的实验过程，可查看实验时间，试剂的批次和效期。对于已经
7、过期的试剂，仪器会自动发出警报，避免过期试剂造成的实验误差；方便科室的库存管理，可以快速查看到库存清单，及时订购试剂。 全自动免疫组化机从质量、速度、稳定性等诸多方面，实现了病理检查结果的标准化，可随时开机进行实验，自己调配时间，机器运行大约 2h 左右可以完成一批，既加快了实验步骤，又减少了手工工作的繁琐，并使免疫组化染色标准化，实验步骤省力又省时，更加迅速病理报告的发出，更好的为临床服务。Ventnaa BenchMarkGX 全自动免疫组化染色仪备有废液桶，可将实验步骤所产生的废液由有资质的公司集中回收。为临床病理诊断提供有力依据和可靠保证，为病理实验室与国际标准化发展接轨起到重要作用4。 参考文献： 1罗玉凤，曹金伶.简介免疫组化染色机J.诊断病理学杂志，2012，19（4）：31. 2余琦，李宁，杨江辉，等.全自动免疫组化染色仪与手工免疫染色的比较J.局部手术学杂志，2010，19（2）：83-85. 3杨月红，袁静萍，袁修学，等.自动免疫组化仪的使用体会J. 临床与实验病理学杂志，2011，27（3）：333-334. 4余琦，李宁，杨江辉，等.全自动免疫组化染色仪与手工免疫染色的比较J.局部手术学杂志，2010，19（2）：83-85.编辑/冯焱
