1、T淋巴细胞的分离、计数,中山医学院免疫学教研室,实验目的和要求,掌握 外周血淋巴细胞分离的方法掌握 细胞计数的方法,实验原理,外周血中细胞种类 细胞密度 红细胞和多核白细胞 1.090淋巴细胞和单核细胞 1.075-1.090血小板 1.030-1.035密度梯度离心法：利用一种密度介于1.075-1.092之间而近于等渗的溶液做密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种细胞加以分离。,本实验：淋巴细胞,实验方案,抽取外周血,分离淋巴细胞,细胞计数,实验材料,1. 肝素抗凝血2. Hanks液3. 淋巴细胞分离液4. 水平离心机5. 显微镜6. 细胞计数板,实验步骤,肝素抗凝
2、静脉血1.5ml,加1.5mlHanks液稀释,置于2ml淋巴细胞分离液上,(交界液面：一定不要打乱),稀释后的抗凝血,淋巴细胞分离液,用Hanks液洗、离心 (1000rpm，5min) 重复2次,血浆,分层液,红细胞粒细胞,离心（2000rpm，25min）,淋巴细胞与单核细胞层,用Hanks液重悬细胞,取10ul细胞悬液与90ul白细胞计数液或台盼兰计数液混合,取10ul于细胞计数板上,细胞计数,细胞计数板,细胞计数,数上不数下，数左不数右。,实验结果,2,2个大方格内细胞总数,单个核细胞浓度（细胞数/ml),10410,=,(稀释倍数）,细胞活力检测：（死细胞被染成蓝色，活细胞不着色）,细胞数量：,纯度在90%以上淋巴细胞约占90-95%细胞收获率可达80-90%活细胞百分率在95%以上,密度梯度离心法分离外周血单个核细胞：,注意事项,稀释的肝素抗凝血，沿管壁轻轻叠加于分离液上，使两者形成一个清晰地界面。细胞经离心分层后，缓慢小心吸取，切勿打破形成的细胞层。,细胞计数的仪器,Thanks!,
