1、青岛科技大学专业实验报告第 1 页 共 11 页药剂学专业实验论文班级：药剂 091 班姓名：杨术娜学号：0901010215青岛科技大学专业实验报告第 2 页 共 11 页复方双黄连胶囊的研制杨术娜，黄蓉，刘心月青岛科技大学 化工学院，山东 青岛 266042摘要：目的:掌握常用的中药提取的方法和原理、掌握湿法制粒的方法和技术；掌握胶囊剂项下的质量检查项目和检查方法及药效学研究方法；掌握薄层色谱的操作技术、崩解仪、及紫外分光光度计的使用。方法：水煎提取法提取金银花、连翘和黄芩，湿法制粒制备胶囊，薄层鉴别法进行胶囊剂鉴别，使用崩解仪测定胶囊的崩解时限，双波长分光光度法测定双黄连胶囊中黄芩苷含量
2、，用小鼠耳肿胀模型进行双黄连胶囊的药效学研究。结果：制备得到了复方双黄连胶囊 40 粒，胶囊质量符合要求，制备的胶囊具有抗炎作用。结论:通过以上制备方法完全可以制备出合格的复方双黄连胶囊，该胶囊具抗炎作用，且药量越大，抗炎效果越好。关键词：复方双黄连，水煎提取法，湿法制粒，鉴别，检查，含量测定，药效学Preparation of compound Shuanghuanglian capsulesYang Shuna，Huang Rong,Liu XinyueQingdao University of Science and Technology College of Chemical Engi
3、neering , Qingdao 266042 ChinaAbstract：objective To master the commonly used extraction methods and principles of traditional Chinese medicine,to master the methods and principles of wet granulation; to master the methods for the examination of the quality of the capsules and pharmacodynamic researc
4、h methods; to master Thin layer chromatography technique and the use of Disintegration apparatus and Uv spect rophotometryMethods Chinese medicine Jinyinhua、Lianqiao and Huangqing were extracted using the method of decocting.The capsules were prepared by wet granulating.and identified using the meth
5、od of TLC identification.The disintegration time of the capsules was examed using Disintegration apparatus. The content of Huangqingan in compound Shuanghuanglian capsules was determined using the method of dual wavelength spectrophotometry. The research of pharmacodynamics of compound Shuanghuangli
6、an capsules was conducted using the model of mouse ear inflammation. Results We got forty compound Shuanghuanglian capsules that conform to the quality criterion and have anti-inflammatory effect.Conclusion We can prepare compound Shuanghuanglian capsules that conform to the quality criterion with t
7、he methods above.These capsules have anti-inflammatory effect ,besides,the greater dose ,the better anti-inflammatory effect it has.Keywords：compound Shuanghuanglian capsules， the method of decocting , wet granulation , identification, examination , content determination , pharmacodynamics青岛科技大学专业实验
8、报告第 3 页 共 11 页引言双黄连胶囊是日常感冒的常备药，它的主要成分是黄芩、连翘、金银花，它具有辛凉解表，清热解毒功效，常用于外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛。本次试验选用水煎法提取金银花、连翘和黄芩，采用湿法制粒的工艺制备胶囊，采用薄层鉴别法进行胶囊剂鉴别，使用崩解仪测定胶囊的崩解时限，双波长分光光度法测定双黄连胶囊中黄芩苷含量，用小鼠耳肿胀模型进行双黄连胶囊的药效学研究。该实验贯穿天然药物化学、药物分析、药理学和药剂学四大药剂专业主干课程，通过本次实验，能够更加深刻地理解和巩固在课堂中所学到理论知识，掌握各专业实验的基本操作和基本技能，掌握药物制剂过程中常用仪器设备的使用方法，具备一定
9、的分析问题、解决问题和独立工作的能力，熟悉新药研发的基本思路，为将来从事药物制剂及新剂型研究、开发与生产打下良好的基础。1 材料1.1 动物健康雄性小白鼠 4 只，重量（2030）g1.2 药物主药：黄芩（产地：山东，产品批号：100301） 、连翘（产地：山西，产品批号：120601） 、金银花（产地：河南，产品批号：100908）药用辅料：硬脂酸镁、淀粉、微晶体纤维素、羧甲基淀粉钠、0 号胶囊壳（浙江新昌县天林化工胶囊有限公司） 。1.3仪器及试剂1、仪器LD5-2A 低速离心机、 GZX-9240MBE 数显鼓风干燥箱（上海博讯实业有限公司） 、B型玻璃仪器气体烘干仪、SHR-循环水式多
10、用真空泵、KH-2500B 型数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司） 、HH-4 数显恒温水浴锅（常州市华普达教学仪器有限公司） 、YH-1 通风柜（青岛岳海实验室设备有限公司） 、蒸煮锅、KDM 型调温加热套（龙口市电炉制造厂） 、电热炉、紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司） 、粉碎机、BJ-1 崩解时限测试仪（天津市国铭医药设备有限公司） 、布氏漏斗、漏斗、离心管、玻璃棒、蒸发皿、纱布、试管、研钵、容量瓶（100ml 、10ml ） 、分液漏斗（250ml） 、密度计（黄骅市滨海玻璃仪器厂） 、胶头滴管、洗耳球、 14 目筛、16目筛、FA12048 电子天平、YP20
11、2N 电子天平（上海精密科学仪器有限公司） 、YP601ND 电子天平、小铝盆、不锈钢托盘、胶囊板、滤纸、展开缸、玻璃板、量筒（100ml、10ml） 、烧杯（1000ml、500ml、200ml、100ml） 、灌胃器、剪刀、打眼器、喷壶。2、试剂黄芩对照药材溶液、黄芩苷对照品溶液、金银花对照药材溶液、绿原酸对照品溶液、连翘对照药材溶液、连翘苷对照品溶液、氨制硝酸银溶液、10%硫酸乙醇溶液、盐酸酸化的 5%FeCl3 乙醇溶液、醋酸乙酯（分析纯） 、甲醇（分析纯） 、50%甲醇、正丁醇（分析纯） 、冰醋酸、三氯甲烷（分析纯） 、蒸馏水（分析纯） 、二甲苯、双黄连水溶液、2mol/LHCl、7
12、5%乙醇、80%乙醇、无水乙醇、硅胶、羧甲基纤维素钠青岛科技大学专业实验报告第 4 页 共 11 页2 方法2.2黄芩、连翘和金银花的提取2.1.1.黄芩的提取称取黄芩 150g，放入蒸煮锅内，加入适量水（没过药材 1-2cm） ，用电热炉小火加热，保持微沸。水煎煮 2 小时后停止，滤过（2 层纱布） ，取滤液于 500ml 烧杯中。药渣继续加适量水煎煮 30min，滤过（2 层纱布） ，合并两次滤液。将蒸煮锅刷洗干净，并将所得的滤液倒入其中，于电热炉上浓缩，浓缩成约 100 毫升左右的浸膏。用密度计测量其相对密度为 1.057（80） ，并在水浴锅上保持 80用 2mol/LHCl 调节 P
13、H 至 1.0-2.0 之间，在水浴锅上保温 1 小时，然后再在室温下静置 24 小时，得到下层为土黄色的膏状物质，上层为棕红色液体。用胶头滴管小心弃去上层液体，向盛有土黄色膏状物质的烧杯中加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅匀，倒入布氏漏斗中抽滤，用 PH 试纸测试溶液 PH=3，取出滤饼，放入烧杯中再加入蒸馏水若干搅匀，再用布氏漏斗抽滤，取出滤饼，测试溶液的 PH，重复以上步骤，抽滤处理共 4 次。最终，PH 调至 5.0，然后再用 80%的醇洗，按以上步骤，洗至 PH 接近7.0，醇洗 2 次，得到的沉淀用玻璃棒转移至 100ml 烧杯，两个蒸发皿中，放入烘箱中，恒温 60 摄氏度，干燥研细备用。
14、2.1.2.金银花、连翘的提取 称取金银花 160g，连翘 320g，预留 24.0g 干药材粉碎备用（金银花 8.0g，连翘16.0g） 。将连翘和金银花混合药材放入蒸煮锅内，加入适量水（没过药材 1-2cm） ，用电热炉小火加热，保持微沸。水煎煮 1.5h 后停止，滤过（2 层纱布） ，取滤液于 500ml 烧杯中。药渣继续加适量水煎煮 1.5h，滤过（2 层纱布） ，合并两次滤液。将蒸煮锅刷洗干净，并将所得的滤液倒入其中，于电热炉上浓缩，浓缩成约 160mL 的清膏，用密度计测量其相对密度为 1.20-1.25（80） （未测相对密度，只是凭老师指导和实验经验） 。室温冷却至 40时，搅
15、拌下缓缓加入乙醇 480mL,使含醇量达 75%。充分搅拌，静置 12 小时，过滤，将残渣中加入 75%乙醇适量，搅拌，静置 5 小时，过滤，合并两次滤液，回收乙醇至无醇味。将其浓缩成相对密度为 1.34-1.40（60测）的稠膏（未测相对密度，只是凭老师指导和实验经验） 。2.2.双黄连胶囊的制备1处方组成： 提取的黄芩粉末 8.7g金银花、连翘粉碎粉末 22.2g金银花、连翘稠膏 所提取量微晶纤维素 5.0g羧甲基淀粉钠 5.0g硬质酸镁 2.0g淀粉 适量乙醇 适量制备 80 粒 2. 制法：向上述制得的金银花、连翘稠膏中加入预留的金银花连翘粉末，并且迅速用玻璃棒搅拌均匀，然后再向其中加
16、入提取的黄芩粉末，并迅速搅匀。加入微晶纤维素、羧甲基淀粉钠，淀粉，硬脂酸镁适量，搅拌均匀，用喷雾法喷入无水乙醇适量，迅速用手搅拌均匀并制成软材，过 16 目筛，湿粒在 60温度下烘干，干粒过 14 目筛整粒，青岛科技大学专业实验报告第 5 页 共 11 页最后用胶囊板装入胶囊壳制备胶囊。2.3 复方双黄连胶囊的鉴别、质量检查和含量测定2.3.1 复方双黄连胶囊的质量检查1、装量差异：取 14 粒胶囊，分别精密称定重量后，倾出内容物（不得损失囊壳） ，囊壳用小刷拭净，置通风处使溶剂自然挥尽，再分别精密称定囊壳重量，求出每粒内容物的装量与平均装量。每粒的装量与平均装量相比较，超出装量差异限度的不得
17、多于 2 粒，并不得有 1 粒超出限度 1 倍。平均装量 重量差异限度 0.3g 以下 10 0.3g 或 0.3g 以上 7.5 2、崩解时限：取供试品 6 粒，按中国药典2010 年版二部附录 XA 进行崩解时限检查。硬胶囊应在 30min 内全部崩解。如有 1 粒不能完全崩解，应另取 6 粒复试，均应符合规定。2.3.2 复方双黄连胶囊的鉴别1黄芩的鉴别供试液的制备：取双黄连胶囊 4g，甲醇 30mL，超声处理 30min，滤过，滤液浓缩至近干，加甲醇 2mL 使溶解。黄芩对照药材溶液的制备： 黄芩对照药材 1g，同上法，制成黄芩对照药材溶液。黄芩对照品：精密称定，加甲醇制成 1mg/m
18、L 的溶液。TLC：点样量各 2L，硅胶薄层板（硅胶 3g、羧甲基纤维素 10mL）展开剂：正丁醇：冰醋酸：水（7:1:2）,展开，晾干，喷以盐酸酸化的 5%FeCl3 乙醇溶液，供试品色谱中，在与黄芩对照药材和黄芩对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。2 金银花的鉴别供试品的制备：取双黄连胶囊 4g，加热水 40mL 使溶解，加醋酸乙酯提取两次，每次15mL，合并醋酸乙酯提取的水溶液，加 0.3ml2M 的盐酸溶液调节 pH 至 1.0，用醋酸乙酯提取二次，每次 15mL，合并醋酸乙酯提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇 2mL，使溶解，滤过，滤液作供试品溶液。金银花对照药材溶液的制备：金银花
19、对照药材 5g，加水 50mL，煎煮 1h，滤过，滤液加盐酸调节 pH 至 1.0，同法制成金银花对照药材溶液。绿原酸对照品溶液的制备：精密称定，加甲醇制成 1mg/mL 的溶液TCL: 点样量各 2L,硅胶 G 薄层板（用前活化处理）展开剂：醋酸丁酯：甲酸：水（7：2.5：2.5）的上层溶液为展开剂，展开，晾干喷以氨制硝酸银试液，立即检视。供试品色谱中，在与金银花对照药材和绿原酸对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。3连翘的鉴别供试品溶液的制备：双黄连颗粒 4g，研细，加 75%乙醇 10ml，超声处理 10min，滤过，滤液作为供试品溶液连翘对照药材溶液的制备：取连翘对照药材 0.
20、5g，加甲醇 10mL，置水浴上加热回流20min，滤过，滤液作为对照药材溶液。青岛科技大学专业实验报告第 6 页 共 11 页TCL：吸取对照药材溶液供试品各 2L，分别点于同一硅胶薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 105加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。2.3.3. 复方双黄连胶囊含量测定对照品溶液的制备：精密称取真空干燥至恒温的黄芩苷对照品 12.5mg 置 50mL 容量瓶中，加 50%甲醇适量，置水浴中振摇，使溶解，放置至室温，稀释至刻度即得浓度为0.25mg/mL 的溶液。供
21、试品溶液的制备：取重量差异下双黄连颗粒研细，用电子天平称取供试品M=3.0000g，置 100ml 容量瓶中加 50%甲醇适量，超声处理 20min，放置至室温，稀释至刻度，摇匀。滤过，精密量取滤液 2ml 置 100ml 容量瓶中至刻度，摇匀，滤过，再精密量取续滤液 2ml 置 100ml 容量瓶中摇匀。滤过，精密量取滤液 1ml 置 10ml 容量瓶中，稀释至刻度，摇匀即得。标准曲线的绘制：精密量取对照品溶液 2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml, 分别置 100ml 容量瓶中，加 50%甲醇至刻度，摇匀，于 277nm 和 377nm 波长处分别测吸光度 A 值，并且计算A，以A
22、 对浓度 y 进行线性回归，得标准曲线方程。供试品吸光度测定：取供试品溶液于 277nm 和 377nm 波长处分别测吸光度，分别为A、A，得A=AA，根据回归方程计算样品中黄芩苷的含量。2.4 复方双黄连胶囊的药效研究选用健康雄性小白鼠 4 只，称重，并分别用苦味酸标记。随机分成给药组（1 号，2 号，3 号）和对照组，并且标号。每鼠左耳两面涂二甲苯约 0.02mL，右耳做空白对照。分别取0.0836g，0.1672g，0.2508g 药配成 7ml 溶液,并且分别标上标签 1 号，2 号，3 号。30min后，两组分别灌胃给药 0.7ml(最大给药量为 0.3ml/10g)。给药组：取相对
23、应的配置的 1 号，2 号，3 号药液灌胃。对照组：给等量蒸馏水（代替生理盐水） 。4h 后，将小鼠处死，剪下双耳并在同一部位打圆耳片，扭力天平称重，以（左耳重-右耳重）/右耳重 作为肿胀率，比较差异。3 结果与讨论3.1黄芩、连翘和金银花的提取【结果】提取得到黄芩粉末 8.7g，一定量金银花、连翘稠膏。【讨论】1、水煎法提取出的连翘，金银花，黄芩的量相对超声提取法、回流提取法等其他溶剂提取法得到的量较多，并且设备简单，操作简单，是中药提取的好方法。但同时要注意的是：提取出的药量大，多糖、鞣质等杂质也较多，多糖等成分粘性很大，会造成后期制粒时软材粘性过大，影响制粒。2、煎煮时要注意补充水分，保
24、持药液微沸即可，不要过大的火力加热，并且在煎煮过程中经常用玻璃棒搅拌，防止药材煎糊使药物有效成分减少，产生毒副物质。3、黄芩提取过程中，采取 80保温一小时的措施，目的是便于黄芩苷的析出，凝集成较大的颗粒易于沉降和过滤，注意保温尽量保持静止稳定，使之充分受热沉降。3.2双黄连胶囊的制备青岛科技大学专业实验报告第 7 页 共 11 页【讨论】1、 制软材和制湿粒的过程中出现较多问题：在制软材时候，由于没有预先查好资料，导致崩解剂羧甲基淀粉钠和润滑剂硬脂酸镁过早的加入，影响了其崩解和润滑效果，这样不但不能加快胶囊崩解，而且还会延迟胶囊崩解。由于采用水煎法提取的金银花和连翘，因此含多糖、鞣质等杂质比
25、较多，而多糖等的粘性本身就很大，并且加入辅料的次序及用量不太恰当，金银花连翘稠膏过于黏稠，其中的水分太少，导致在制备软材的过程中，加入黄芩、金银花连翘药材粉末和各种辅料的时候，越搅拌粘性越大，最后直接搅拌不了，并且冷却后制备的软材特别硬（像石头一样硬） 。制软材失败，只能用粉碎机将其粉碎，然后再加辅料进行制备。制湿粒时，经过反复过筛、加辅料、用手混合的过程才勉强制成的。由于没有掌握好制备软材和湿粒的技巧，导致在此过程中浪费了大量的药材和辅料。由于提取的金银花和连翘稠膏本身粘性就很大，所以在选择辅料的时候就要选择粘性不大的辅料，如微晶纤维素，和稀释剂淀粉。我认为要想得到比较理想的软材和湿粒除了要
26、掌握相应的理论知识以外，更重要的是需要一定的制备软材的经验。有时候，辅料多一点或者是少一点都会导致软材的制备失败，因此，我们就需要多加练习，积累制备经验。2、 处方分析：金银花+黄芩+连翘粉 主药微晶纤维素 填充剂和粘合剂羧甲基淀粉钠 崩解剂硬质酸镁 润滑剂乙醇 润湿剂淀粉 填充剂和稀释剂3.3 复方双黄连胶囊的鉴别、质量检查和含量测定结果3.3.1.复方双黄连胶囊的质量检查结果1、装量差异结果胶囊总重量：6.5005g 胶囊平均重量：0.4643g 胶囊壳重量：1.3942g 囊壳平均重量：0.0996g表 3-3-1 胶囊装量差异统计标号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1
27、12 113 14胶囊重量(g)0.47010.45030.47610.46170.45900.45870.46640.47220.44720.47100.467300.4655000.455330.4729囊壳重量（g）0.10590.09730.10620.09550.09660.09840.09620.09510.09640.10800.095800.1022100.100000.1007内容物装量（g0.36420.35300.36990.37160.36240.36030.37020.37710.35080.36300.371500.3622900.355330.3722青岛科技大学
28、专业实验报告第 8 页 共 11 页）装量差异（%）0.14 3.21 -1.43-1.890.63 1.21 -1.51-3.403.81 0.47 -1.8600.49 22.58 -2.06【讨论】由以上数据可得：本组胶囊的平均装量均0.3g，装量差异均在7.5%范围内，因此本组胶囊装量差异符合要求。2、崩解时限结果6 粒胶囊崩解时限：4min 内全部崩解【讨论】由以上数据可得：本组胶囊均在 30min 之内崩解完全，因此崩解时限符合规定。3.3.2 复方双黄连胶囊的鉴别结果连翘薄层鉴别结果如下： 金银花波层鉴别结果如下：黄芩薄层鉴别结果如下：青岛科技大学专业实验报告第 9 页 共 11
29、 页【讨论】1、 连翘：如以上薄层层析结果所示，供试品与连翘对照药材和连翘苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色（紫黑色）的斑点，即制备的复方双黄连胶囊中含有连翘。2、 金银花：如以上薄层层析结果所示，供试品的薄层结果为 3 个斑点(棕黄色)，而金银花对照药材只出现一个斑点，绿原酸对照品没有出现斑点。这样的结果不能说明制备的复方双黄连胶囊中含有金银花。分析其原因：点样的过程中，点样量过低配制的金银花对照黄芩苷药材溶液和和绿原酸对照品溶液有问题，可能在配制的过程中出现差错。3、 黄芩：如以上薄层层析结果所示，供试品与对照药材均出现 3 个斑点（绿色） ，但是不是在相应位置上，对照药材出现的斑点的
30、Rf 值比对应的供试品斑点的 Rf 值大，即对照药材在薄层板上跑的比较快。原因分析：在薄层板展开的过程中，薄层板没有放平，导致对照药材一边展开速度比较快。黄芩苷对照品的斑点极其浅，几乎看不到。原因可能是点样量过少或是黄芩苷对照品溶液的配置有问题。这样也稍微能够得出制备的复方双黄连胶囊中含有黄芩。4、 在展开前，应该将展开缸用展开剂进行预饱和，防止在展开的过程中出现边缘效应。并且，在展开前，应该振摇展开剂，否则展开剂会出现分层现象，影响展开效果。3.3.3. 复方双黄连胶囊含量测定结果1、标准曲线方程：y=0.0332A +0.0061 ，R 2=0.9979表 3-3-3 供试品吸光度测定结果
31、波长（nm） 277 377吸光度 A 0.356 0.070A(AA) 0.286青岛科技大学专业实验报告第 10 页 共 11 页2、黄芩苷的含量%计算代入标准曲线计算公式得黄芩苷浓度：y=0.0156mg/ml稀释倍数为：50000 倍黄芩苷的重量计算：m=y50000=0.015650000=780g,即 0.78g黄芩苷的含量计算：黄芩苷的含量%=m/M100%=0.78/3.0000100%=26.0%【讨论】1、 一般情况下，每粒胶囊中黄芩苷的量为50mg，含量约为 11.6%,可见制备的复方双黄连胶囊黄芩苷的含量偏高。之所以偏高是因为，在制软材的时候，加的辅料量太少。2、 含量
32、测定的时候，本来制备的黄芩苷溶液稀释倍数为 5000 倍，但是由于所测得的吸光度 A 值为 2.345，而正常情况下 A 值的范围为 0.30.7，A 值太大，影响吸光度的精确性，因此又稀释了 10 倍。3.4 复方双黄连胶囊的药效研究结果表 3-4-1 4 只小鼠的重量编号 空白 1 号 2 号 3 号小鼠重量g 21.79 21.81 23.30 24.08因为 4 只小鼠重量均接近 22g,因此近似取小鼠的重量为 22g 来计算每只小鼠的给药量。并且，一般一粒双黄连胶囊约为 0.53g,黄芩苷含量约为 50mg，而制备的黄芩苷为 26.0%，换算出来的含黄芩苷为 50mg 的胶囊剂为 0
33、.19g。给药量分别为：1 号：(0.19g23/75000g)22g250.00836g2 号：(0.19g23/75000g)22g500.01672g3 号：(0.19g23/75000g)22g750.02508g表 3-4-2 4 组小鼠肿胀率结果编号 小鼠给药量g 左耳重g 右耳重g 肿胀率空白 0.00000 0.0088 0.0048 83.31 号 0.00836 0.0065 0.0050 30.02 号 0.01672 0.0058 0.0046 26.13 号 0.02508 0.0053 0.0048 10.4表 3-4-3 全班小鼠肿胀率统计结果1 2 3 4 5
34、6 7 8 9 10空白 83.3 55.4 55.36 44.64 291.4 50.88 50.88 28.8 87.7小剂量 30.0 36.8 12.24 27.27 109.1 28.33 28.33 5.7 62.3组别肿胀率%给 药量青岛科技大学专业实验报告第 11 页 共 11 页中剂量 26.1 27.6 10.64 18.37 96.1 17.54 17.54 3.5 6.7大剂量 10.4 3.5 7.84 12.50 70.7 5.45 5.45 -3.5 0【讨论】通过上述数据可知， （1）给药组比对照组的小鼠左右耳重量差异小，即肿胀率小：（2）给药量越大，小鼠左右耳重量差异越小，即肿胀率越小，药物消炎效果越好。4 结论本实验采用水煎提取法提取黄芩、连翘、金银花，方法简便可行，采用湿法制粒制备得到了复方双黄连胶囊 40 粒，胶囊质量符合要求，制备工艺简单，制备的胶囊具有抗炎作用，且在一定范围内，给药量越大，抗炎效果越好。参考文献：1 老师提供的讲义2 2010 版中国药典3 网上查询的相关资料
