1、 Biacore X100 简易操作指南 目 录 1. Biacore X100 系统组件简介 2 2. 仪器常规操作 (Basic instrument operation) 3 3. Biacore X100 实验操作： (I) 向导模式 (Wizard Mode) 5 (II) 手动模式(Manual Run) 8 4. 系统定期维护 ( System Maintenance) 9 * 本手册仅供简单操作参考，实际内容请参照说明书中的相关内容 1 1. BIAcore X100 系统组件简介 主机（正面） 样品盘 2 2. 仪器常规操作 (Basic instru ment operat
2、ion) 2.1 开机 2.1.1 从关机状态开机 （1） 启动电脑和打印机， 打开 Biacore X100 主机电源 （右后侧下方） ， 待主机面版上 TEMP 指示灯停止闪烁，即表示温度已稳定； （2） 启动 Biacore X100 Control Software，登入； （3） 待软件和主机建立连接，约 30 秒； （4） 确认左侧缓冲液瓶已装入新鲜缓冲液且两根缓冲液管均插入瓶中； （5） 确认右侧废液管已插入废液瓶中； 2.1.2 从待机状态开机 （1） 确认左侧缓冲液瓶已装入新鲜缓冲液且两根缓冲液管均插入瓶中； （2） 确认右侧废液管已插入废液瓶中；启动控制软件并登入； *关于
3、缓冲液： （1） 请使用新鲜配置的缓冲液，200l 缓冲液约可使用 24 小时； （2） 缓冲液必须用 0.22m 进行过滤，去除杂质； （3） 缓冲液或去离子水必须经过脱气处理（装有 X100 Plus Package 用户无需脱气） ； （4） 在 Standby 状态调换缓冲溶液时，先在 Tools 中选择 Stop Standby，换上缓冲液后，选择 Prime 即可。 2.2 芯片的放置 （1） 打开芯片室的门； （2） 点击 Undock Chip 按钮 ，弹出对话框； （3） 拉开芯片槽导轨，图 A； （4） 取出旧芯片，图 B； （5） 把新芯片按箭头朝内方向插入，放平，图 C
4、； （6） 推入芯片槽导轨，图 D； （7） 关上芯片室的门； （8） 点击谈话框内的 Dock Chip 按钮。 （9） 确认缓冲液瓶中有足够的溶液； （10）点击 ToolsPrime，用缓冲液润洗整个管道系统。 3 2.3 调节温度 装备 Plus Package 的用户可在 ToolsSet Temperature 选择所需的实验温度（4-40） 。待温度指示灯 Temp 停止闪烁后表明系统已达到设置温度。 2.4 样品的放取 （1） 点击 Load Samples 图标 ； （2） 待 Rack Locked 指示灯熄灭后，将样品盘轻轻提起取出； （3） 将样品放入正确的位置： 1-
5、15 号可放置 1.5ml 标准 EP 管 （必须剪去盖子， 为防止溶液挥发， 最好加上 Biacore 专配的橡皮塞） 。 H2O处放置专配的 4ml塑料管，每次实验前加入去离子水（切勿加盖） ，用于清洗进样针。 （4） 放回样品盘，点击 OK。 4 3. Biacore X100 实验操作模式 Biacore X100 实验设置和控制全部通过 Control Software 实现。实验可通过两种模式进行：向导模式和手动模式。 向导模式又分为两种：Workflow 模式和 Template 模式。Workflow 模式是将一个完整实验的所有步骤都通过一个流程图贯穿起来，结构十分清晰，适合初
6、学者使用。 Templatem 模式是将每一个实验步骤分开设置， 便于操作，适合有经验的使用者。 3.1 WorkFlow 向导模式 3.1.1 建立 Workflow （1） 根据实验目的， 选择正确的流程。 如果要测定生物分子间的亲和力和动力学，选择 ；如果测定两者间有无结合作用，点击 图标。以下只以亲和力/动力学流程为例说明。 （2） 点击模式按键后，弹出对话框 根据提示，输入正确的配体(Ligand)名称，种类等信息。 （3） 软件根据输入的信息， 会推荐适合的芯片和偶联方式。 请根据实际情况选择（例如：直接偶联或捕获方式偶联） 。选择后下方和右侧会出现示意图和流程图。 （4） 点击
7、Continue 键，保存。 此时，完整的实验流程图出现。图中黄色对话 框是必要的实验步骤，浅蓝色对话框内的是可选择的实验步骤。 主流程分为两大部分： Sensor Surface Prepairation（芯片表面准备）和 Assay（实验） 。 5 3.1.2 芯片表面准备 该步骤主要是将配体偶联到芯片表面。如果是 首次偶联一个新样品，需要找到合适的偶联 pH 条件。 3.1.2.1 Find Immobilization pH 如果样品等电点（PI）未知，推荐顺序使用 pH 5.5、5.0、4.5、4.0 的醋酸钠溶液进行测试，样品浓度可选择 10-50g/ml，但四个样品浓度需保持一致
8、。进样时间 180 秒，用 50mM NaOH 作为清洗溶液。最后可根据结果，选择合适的 pH 浓度作为偶联条件。 3.1.2.2 Immobilization 该步骤将配体偶联到芯片上。点击 ，弹出对话框 （1） 选择芯片种类（flowwork 模式下不可用） 。 （2） 选择通道（flowwork 模式下不可用） ，通常将 Flow Cell 1 作为参照通道，Flow cell 2 作为样品通道。 （3） 选择偶联方法，通常为氨基偶联 Amine。 （4） 选择偶联方式： Aim for immobilized level：以偶联量为目标，输入配体名称，偶联水平（很重要，根据公式计算）
9、，洗脱液 50 mM NaOH。 Specify contact time: 以固定的接触时间为偶联标准。 （5） 点击 next，选 load sample，取出样品盘 （6） 按照表格中的示意图， 一一对应放入所需试剂。 加入试剂的量不得少于软件要求的用量。 试管要去除盖子， 样品加入试管后离心一下， 去除气泡。 （7） 将样品盘放回托架， 点击 next； 检查缓冲液等， 保存方法和结果文件；点击 Run，开始正式偶联。 （8） 偶联完成后会显示最终偶联水平。 6 3.1.3 实验 3.1.3.1 Find Sample Conditions 该步骤为可选步骤，可帮助用户了解： （1）
10、配体是否有活性； （2）确定适合的浓度和接触时间； （3）确定是否需要再生； （4）观察是否有非特异性结合现象存在。 3.1.3.2 Find Regeneration Conditions 该步骤为可选步骤，可帮助用户选择合适的再生条件。 3.1.3.3 Run Kinetics/Affinity Assay 点击 ，设定测定亲和力的实验参数。 （ 1） 选择 Flow Call 和芯片种类 （ Work Flow 模式下不可选） 。 根据实验要求，选择实验的流程和再生的次数。点击 Next。 （2） 建议勾取 prime before run，用缓冲液冲洗管道。 Startup 的 sul
11、ution 可用缓冲液，次数建议为 3-5 次，点击 Next。 7 （3） 输入进样的参数： 进样时间（ contact time）推荐在 180 秒，解离时间长短需视样品而定，对未知样品可用 600 秒尝试。 填写再生试剂名称， 进样时间通常在 30-60秒间。如果再生试剂为 SDS，之后需要稳定 30-60 秒时间。点击 Next。 （ 4） 填写样品名称，分子量，浓度。注意，必须要有一个零浓度和一个重复浓度的样品。点击 next。 （5） 按照要求放置样品， 检查缓冲液， 保存文件， 点击 Run 开始实验。 （6） 实验结束后，结果文件会自动在 Evaluation 软件中被打开。
12、3.1.4 Template 模板模式 点击 ，可打开模板向导模式。上文 Workflow 中所有的功能模块都可在模板中找到，并且独立运行。对照如下： 3.2 手动模式 Manual Run 点 击 ，打开手动模式。 详细的按钮功能请参阅 Support Navigator。 8 4系统定期维护 ( System Maintenance) 4.1 每日或每次实验结束： 任务: 清空废液。将芯片取出， 用保鲜膜包好置于密闭的塑料袋中，放入 4度冰箱冷藏。 将缓冲液换成去离子水， 确认系统处于 Standby 状态。 请每隔 3-4日置换一次去离子水，避免生长细菌。如果超过 4 天无人值守换水，请
13、关机。 4.2 每周 任务：清洁流路系统。使用 ToolsMore ToolsDesorb；放入维护芯片（Maintenance Chip） ；根据程序指令完成清洗工作。 所需试剂：BIAdesorb Solution 1&2；Maintenance Chip；去离子水。 4.3 每月 任 务 ： 清 洁 流 路 系 统 ， 除 菌 。 使 用 Tools More Tools Desorb and Sanitize；放入维护芯片（Maintenance Chip） ；根据程序指令完成清洁工作。 所需试剂： BIAdesorb Solution 1&2 ； BIAdisinfectant so
14、lution ； Maintenance Chip；去离子水。 4.4 系统检测 任务： 定期检测系统状态。 使用 Tools More Tools System Check and Pump Calibration。放入新的 CM5 芯片，根据程序指令完成检测工作。 所需试剂：BIAtest Solution，新 CM5 芯片，HBS-EP buffer。 4.5 关机 任务：关机系统。 （1） 准备一瓶去离子水和一瓶 70%乙醇； （2） 退出芯片； （3） 选择 ToolsShutdown，根据程序要求完成指令； （4） 程序将冲洗流路并排空 IFC 内的液体， 约十分钟。 当系统要求打开管道夹时，请打开前部下方面板，翻起管道夹，如图； （5） 关闭控制软件，清空玻瓶 9
