1、疟疾血膜制作及染色技术一、 血片的制作1.材料准备1.1 载玻片：新玻片浸入有液态洗涤剂的清水中 10-20 分钟，干净棉巾逐个擦拭，再用清水冲洗干净，晾干备用。 1. 2. 采血针：一次性 1.3. 玻片盒：防止污染和昆虫吸食血膜 1. 4. 75%酒精棉球：采血前后消毒 1.5. 记号笔：玻片上书写号码2.血片的制作（厚、薄血膜）用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂成薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘状，称厚血膜。最好一张玻片上同时制作厚、薄两种血膜。 2.1 薄血膜涂片薄血膜 取洁净的载玻片 1 张，左手持载玻片平置,右手持推片，推片一端边缘的中点刮取血液1.01.5 微升（相
2、当于 1/4 火柴头大小），使血滴与平置的载玻片中线接触，待血液向两侧扩展约2cm 宽时，以 2535 夹角均匀而迅速地向左推成舌状薄血膜（约 2.5cm 长）。 厚度以薄血膜上的红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳。2.2 厚血膜涂片用推片的一角刮取 45 微升血量（相当于火柴头大小），使血滴涂于载玻片的中央偏右处，由里向外一个方向旋转 2 圈，涂成直径 0.81.0cm 的圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求（厚度以 1 个油镜视野内可见 510 个白细胞为宜）。2.3 血膜位置通常将厚、薄血膜涂在一张载玻片上。方法是将载片分为 6 等分，第 1、2 格备贴标签及编
3、用；厚血膜涂在第 3 格中央；薄血膜涂在第 4 格前缘至第 6 格中部。2.4 血片的制作编号血膜制成后，立即在玻片面上写上受检者的号码（姓名）、单位(地址)、制片日期、以防差错；待血膜干后依次按顺序插入标本盒内。 2.5 血膜制作注意事项1. 清洗玻片，且勿碰撞、磨损 2. 刚涂制的血膜要平放在标本盒内 3. 血膜应自然干燥 ，要充分干燥。 二、血片染色：（吉氏染液的染色方法）1. 血膜染色前的处理固定薄血膜 血片干燥后，用吸有甲醇的吸管在薄血膜表面轻轻涂抹，自然干燥。注意固定时甲醇不要接触厚血膜，否则会影响厚血膜的溶血。溶解厚血膜 血片干燥后，用滴管滴水于厚血膜上，待血膜呈灰白色时，将水倒
4、去，晾干。2. 染色过程：取蒸馏水或缓冲液 1ml 加入吉氏原液 1 滴，混合均匀后涂在厚、薄血膜上，染色 30分钟左右，然用清水轻轻将载玻片上的染液冲洗干净，晾干镜检。 3血片制作注意事项 3.1. 使用前载玻片一定要清洁，否则会影响血片制作和镜检结果。 3.2. 厚血膜干燥时勿加热，加热会使原虫变形，影响镜检结果。 3.3. 固定薄血膜时勿将甲醇触碰到厚血膜。 3.4. 冲洗染液时，水流轻缓，勿冲走厚血膜。4.疟疾检测的注意事项 4.1.同一个病人的血涂片样本要大于等于 5 张。4.2.标本一定要做好标记，上报结果时，一定要把观察到疟疾病原虫的血涂片标本一起交上来。4.3.标本染色时，不要一次把所有标本全部染完，分批次染，找到最好的血涂片进行观察。
