1、临床微生物检验流程2微生物实验室工作流程待检样本涂片染色血清学检测DNA 探针单克隆抗体接种培养阴性阳性ID涂片染色AST报告报告1.标本 采集2.镜检3.分离 培养4.细菌 鉴定5.药敏试验3标本采集标本 标本收集 病理尿 /痰 尿道感染 /呼吸道感染大便 肠食物中毒，腹泻生殖道标本 拭子 阴道炎 , 宫颈炎 , 前列腺炎 , 尿道炎 , 性病 脓 拭子或注射器 脓肿 , 腹腔液 , 皮肤感染4马上把标本接种 或使用运送培养基为什么 ?-细菌是生物 ! - 有必要 : 保持它们生存 防止它们增长 为什么 ? -实验室与采标本的地点距离很远 : 标本是在家里采， 或在病人床边采标本运送5标本运
2、送如果不能马上接种培养基 , 在运送过程中把标本储存 :4 37 和 /或 运送培养基?尿，大便 生殖道标本 , CSF, 血 , 脓不需要细菌增生 可能是脆弱的细菌 可能是厌氧菌 运送培养基能避免标本干燥6样本运送运送培养基细菌 Amies培养基 Stuarts培养基 Cary Blair培养基 运送拭子： Amies琼脂凝胶、液体运送拭子病毒 M4培养基（制成） M4 RT培养基（制成）7镜 检 细菌的存在和数目 形态和分类特点 动力 细胞学：观察细胞如：白细胞（感染的指使）1 - 直接检查把一滴放在玻片与盖片之间 : 镜片 x 40, dry8紫蓝色革兰氏 - 粉红色2 革兰氏染色细菌学
3、最常用的染色方法用来给细菌分类革兰氏 +镜 检9 Coloration with methylene blue亚甲基蓝染色用于白细胞内的细菌染色eg : 淋病双球菌 Giemsa吉母萨染色用于血液或细胞内的细菌染色 Ziehl - Neelsen 齐 -奈染色用于分支杆菌染色 Acridine orange吖啶橙染色荧光染色用于细菌感染量少的标本其他染色的方法10镜检染液染色试剂 革兰氏染色液套装R40080 250ml*4 抗酸染液套装分枝杆菌（结核）R40112 250ml*6 荧光染液真菌、微孢子虫等BactiDrop染色剂染色质控片 抗酸染色、革兰氏染色、隐孢子虫等11培 养 营养琼脂
4、 正确的空气环境 正确的温度如果要使细菌生长 , 必须满足细菌的需要 :12分离 培养 培养基- 选择正确的培养基 : 视乎要检测的细菌 视乎标本?选择性培养基 ?增菌培养基 ?基础培养基 ? 显色培养基 ?13 不同种类的培养基 基础培养基 : 含最少的营养元素 增菌培养基 : 基础培养基 + 血 , 生长因子 . 选择性培养基 : 加有抗生素或其他 显色培养基 : 加有导致产生有颜色菌落的显色底物培养基可以同时是选择性和增菌 , 或选择性和显色 .分离 培养 培养基14 在固体培养基的生长 : 把细菌放在营养基上会使细菌增长和形成肉眼可见的组 : 菌落 = 1 百万细菌= 20 代用来分离
5、培 养15培养 Oxoid干粉培养基 CM：基础干粉，含有丰富的碳源、氮源、生长因子、选择性抑制因子，显色剂 SR：添加剂，通常包装 10小瓶 /盒，每瓶通常可配制 500ml或 225ml添加的培养基，成分通常是抗生素和热敏感的营养成分16培养 Oxoid制成培养基医院常用品项 ： 滋养性：营养琼脂、血平板、巧克力平板 肠道菌：麦康凯、中国蓝玫红酸、伊红美蓝、 SS平板 分隔平板：血琼脂 /麦康凯琼脂、血琼脂 /中国蓝玫红酸琼脂等 真菌：沙保氏葡萄糖 显色：念珠菌显色培养基、尿路感染显色培养基17培 养例 : 脑心肉汤 , 胰酶大豆肉汤 . 在液体培养基的生长 : 细菌在营养肉汤里会增生 ,
6、 令培养基变得浑浊(可以用肉眼观察 )用肉汤来培养是不能区别多种细菌生长还是一种细菌生长用来增菌19 选择正确的温度 :- 细菌 : 37- 霉菌 : 3030 37培养箱 ?分离 培养 培养温度20不同的呼吸种类1 2 3 4分离 培养 培养条件211 - 绝对需氧菌需要有氧气它 们是利用氧气来产生能量 : 呼吸（一种氧化的代谢作用）例 ： 假单胞菌，分支杆菌2 - 兼性厌氧菌可在有空气或没有空气下生长， 但是主要的能量是靠发酵产生例 ： 肠道杆菌分离 培养 培养条件223 - 绝对厌氧菌只会在没有空气的情况生长。氧气对这些细菌是有毒的。所有的能量是从发酵而来 （发酵代谢）例 : 梭菌属细菌
7、4 - 微需氧细菌较喜欢在少氧气的环境下生长例 ： 弯曲菌， 支原体5 - 嗜二氧化碳的细菌有些细菌较喜欢多二氧化碳的环境生长例 ： 淋病氏菌分离 培养 培养条件23 选择适当的空气环境 :- 需氧菌- 兼性需氧菌- 微需氧菌- 厌氧菌- 嗜二氧化碳的细菌微需氧菌产生器厌氧产生器无需 产生器CO2 产生器分离 培养 培养条件241234时间细菌浓度 细菌生长过程24Hrs 48Hrs分离 培养 培养时间25分离培养目的：获得纯培养后进一步鉴定1. 无菌部位的标本（血液，脑脊液，胸腹水，关节液，尿液）：直接接种在液体 /固体培养基。2. 正常菌群存在部位的标本（各种鼻咽，尿道试子，粪便）：接种至
8、选择或鉴别培养基。培养条件： 37 16-20小时培养，少数需 3-4周（如布鲁菌，分枝杆菌）优点：比直接涂片镜检的阳性率高。26细菌 鉴定需用条件 : 取得一个纯培养(如果是多种细菌标本 )第一步 : 分离把标本接种在营养1 细菌 1 菌落27分纯143242细菌 鉴定28 族 属 种类Micrococcaceae微球菌族Staphylococcus葡萄球菌属aureus金黄色葡萄球菌example :Enterobacteriaceae肠杆菌族Escherichia埃希氏菌属coli大肠（杆）菌E. Coli大肠埃希菌S. Aureus金黄色葡萄球菌细菌 鉴定 细菌分类根据29细菌鉴定 倾向性实验 形态学 :球菌或杆菌（形态）分布情况染色情况 观察平板上的菌落特征：大小，颜色，外型，气味，在血平板上是否溶血 触酶，氧化酶结果能帮助判断细菌的族或属30触酶实验 : 还原过氧化氢2 H2O2 2 H2O + O2触酶氧化酶 : TMPD 氧化的 TMPD阳性呈现紫红色(TMPD = N Tetra methyl - para - phenylene - diamine)细菌鉴定 酶类检测31球菌，革兰阳性，触酶阳性 葡萄球菌球菌，革兰阳性，触酶阴性 链球菌杆菌，革兰阴性 ， 氧化酶阴性 肠杆菌-杆菌，革兰阴性， 氧化酶阳性 非发酵 菌举 例
