1、实验步骤：1叶绿素的提取 将新鲜菠菜（Spinacia ）叶片洗净擦干，去叶柄及叶脉。称取样品8g，剪碎置研钵内，加入8cm3 丙酮及少许固体碳酸钠，迅速研磨成匀浆；然后再加入20cm3 丙酮充分研磨。 在一玻璃漏斗底部垫一小团脱脂棉，将匀浆通过脱脂棉过滤至已装有20cm3 石油醚的分液漏斗中，再用少量的丙酮冲洗叶片残渣及研钵，合并滤液。 沿分液漏斗的壁小心加入40cm3 蒸镏水，轻轻摇动，使色素转移到上面的石油醚层静置数分钟，待分层清楚后弃去下面的丙酮一一水层。如发生乳化现象可加入23cm3 饱和NaCl 溶液。 在分液漏中再加入40cm3 蒸镏水，轻轻摇动，以洗去石油醚中残留的丙酮，共洗两
2、次。然后将叶绿素的石油醚提取液放入具塞锥形瓶中，置暗处或用黑纸包好备用。2叶绿素理化性质的观察 光对叶绿素的破坏作用分别在两支具塞试管中注入2cm3 叶绿素的石油醚提取液，盖紧塞子。一支置暗处，一支置强光(如太阳光)下，23h 后，观察比较两者的变化差异，或在分光光度计的 663nm 处图 17.1 叶绿素分子式17 叶绿素的提取及理化性质的鉴定67比较二者的吸光度值的差异，将结果记录在实验报告中。 叶绿素的皂化反应在一支试管中先加入2cm3 叶绿素石油醚提取液，再加入2cm3 新配制的30 KOH甲醇溶液，用力摇动混匀后静置，待分层清楚后观察各层的变化，将观察结果记录在实验报告中。 去镁叶绿
3、素的形成在一支试管中加2cm3 叶绿素石油醚提取液，然后小心加入3cm3 6mol/dm3 HC1，摇动混匀后静置，待分层后观察各层的变化，记录观察结果。 铜的取代作用在一支试管中加入3cm3 叶绿素丙酮提取液，然后加入3cm3 6mol/dm3 HC1，摇匀后再加入一小块醋酸铜结晶，将试管在水溶中微微加热，观察溶液的颜色变化，记录观察结果。 叶绿素的荧光在一支试管中加入2cm3 叶绿素石油醚提取液，在与入射光( 如窗口的自然光)相垂直的方向观察叶绿素荧光，记录观察结果。4、方法和步骤1、叶绿体色素的提取 将新鲜菠菜叶片洗净擦干，去叶柄及中脉，称取 10g 去中脉的叶片，剪碎置研钵内，加入少许
4、固体碳酸钠或碳酸钙和 10cm 3 丙酮，迅速研磨成匀浆，再加 15cm 3 丙酮充分研磨提取叶绿素。 在玻璃漏斗底部垫一小团脱脂棉，将匀浆通过脱脂棉过滤到已装有 15cm 3 石油醚的分液漏斗中，再用少量丙酮冲洗叶片残渣和研钵，合并滤液。 沿分液漏斗的壁小心加入 30cm 3 蒸馏水，轻轻转动加入 4 -8cm 3 饱和 NaCL 水溶液，静止几分钟待分层清楚后，弃去下面的丙酮一水层。再加入 30cm 3 蒸馏水，轻轻晃动分液漏斗，以洗去石油醚中残留的丙酮，弃去水层。共洗两次。将色素的石油醚提取液放入具塞锥形瓶中，置暗处或用黑纸包好备用。2、叶绿素理化性质的观察 光对叶绿素的破坏作用，在 2
5、 支具塞试管中各放入 2cm 3 上述色素石油醚提取液，盖好塞子。一支试管置暗处，一支试管置强光（如太阳光）下，经 23h 后，取出 2 支试管观察溶液颜色有无变化，或在分光光度计上测定 663nm 处吸光度值后进行比较。 叶绿素的荧光，取 2cm 3 上述色素的石油醚提取液放入一支小试管中，可在窗口与入射光相垂直的方向观察叶绿素暗红色的荧光。 叶绿素的皂化反应，取 1 -2cm 3 上述色素的石油醚提取液一试管中，逐步加入 2 -5cm 3 新配制的30% 3KOH-甲醇溶液，用力振动试管后静止分层，观察上下层溶液的变化。 去镁叶绿素的形成，取 1 -2cm 3 上述石油醚提取液放入试管中，
6、小心加入 3cm 36mol/dm3HCL，摇动后静止分层观察溶液颜色变化。 铜的取代作用，取 1 -2cm 3 色素的丙酮提取液于试管中，加入 3cm 36mol/dm3HCL，摇动试管，再逐步加入醋酸铜结晶（把试管放进水浴中微微加热） ，可观察到溶液的颜色由褐色变成鲜亮绿色，说明铜取代了氢占据在镁在叶绿素中的位置。在实验中加入少许二氧化硅的目的是为了研磨充分。加入少许碳酸钙的目的是为了防止在研磨过程中，叶绿素受到破坏。具体的情况是这样的：叶绿体中的色素所处的环境具微碱性，实验中，由于研磨会使细胞结构遭到破坏，细胞液（具微酸性）流出，酸性的细胞液就会直接接触叶绿体中色素，致使叶绿素的分子结构
7、遭到破坏，使叶绿素失镁，呈黄褐色，所以加入少许碳酸钙是为了中和细胞液的酸性，可起到保护叶绿素的作用防止叶绿素的变化叶绿素是一种天然色素，对光热、酸碱等比较敏感。因此，在加工或贮藏过程中常易褪色或变色，对蔬菜成品感官质量影响巨大。叶绿素的防护：碱处理。将蔬菜在0.01%的氢氧化钠等稀碱溶液中浸泡 20分钟-30分钟，叶绿素生成叶绿酸盐、叶绿醇等，颜色仍为鲜绿色。但这种方法保绿时间不太长，会导致营养成分的严重损失。用铜或锌取代叶绿素中的镁。可选用醋酸铜、硫酸锌溶液，浓度以0.1315%最好，ph 值为9，浸泡30分钟。生成铜和锌的衍生物可以长期保持绿色。铜比锌活性高，取代反应速度快，但铜的残留量受质量标准限制，而锌的安全性较高，护绿效果也不差，成本也较低，可优先考虑使用锌制剂来保护蔬菜的绿色。
