1、资料常用 pH缓冲溶液的配制和 pH值 常用 pH缓冲溶液的配制和 pH值常用 pH缓冲溶液的配制和 pH值http:/序号 溶液名称 配制方法 pH值1 氯化钾-盐酸 13.0 ml 0.2 mol/L HCl 与 25.0 ml 0.2 mol/L KCl混合均匀后，加水稀释至 100 ml 1.72 氨基乙酸-盐酸 在 500 ml 水中溶解氨基乙酸 150 g，加480 ml浓盐酸，再加水稀释至 1L 2.3 3 一氯乙酸-氢氧化钠 在 200 ml 水中溶解 2 g 一氯乙酸后，加 40 g NaOH，溶解完全后再加水稀释至 1 L 2.8 4 邻苯二甲酸氢钾-盐酸 把 25.0 m
2、l 0.2 mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与 6.0 ml 0.1 mol/L HCl混合均匀，加水稀释至 100 ml 3.6 5 邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠 把 25.0 ml 0.2 mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与 17.5 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至 100 ml 4.8 6 六亚甲基四胺-盐酸 在 200 ml水中溶解六亚甲基四胺 40 g，加浓 HCl 10 ml，再加水稀释至 1 L 5.4 7 磷酸二氢钾-氢氧化钠 把 25.0 ml 0.2 mol/L的磷酸二氢钾与23.6 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至 100 ml 6.
3、8 8 硼酸-氯化钾-氢氧化钠 把 25.0 ml 0.2 mol/L的硼酸-氯化钾与4.0 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml 8.0 9 氯化铵-氨水 把 0.1 mol/L 氯化铵与 0.1 mol/L 氨水以 2：1 比例混合均匀 9.1 10 硼酸-氯化钾-氢氧化钠 把 25.0 ml 0.2 mol/L 的硼酸-氯化钾与 43.9 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至 100 ml 10.0 11 氨基乙酸-氯化钠-氢氧化把 49.0 ml 0.1 mol/L 氨基乙酸-氯化钠与 51.0 ml 0.1 mol/L NaOH混合
4、均匀 11.6 钠 12 磷酸氢二钠-氢氧化钠 把 50.0 ml 0.05 mol/L Na2HPO4与26.9 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml 12.0 13 氯化钾-氢氧化钠 把 25.0 ml 0.2 mol/L KCl 与 66.0 ml 0.2 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml 13.0一、常用溶液的配制（一）溶液配制注意事项1药品要有较好的质量 试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，GR）、分析试剂（Antalytical reagent，AR）化学纯（Chemical pure，CP）和实验试
5、剂（Laboratory reagent，LR）等等。工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。2药品称量要精确。3配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在 50万欧姆以上，pH在 5.57.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。（二）0.067（1/15）Mol/L 磷酸缓冲液11/15Mol/L 磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH 2PO4，AR）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入 1 000
6、ml容量瓶内，再稀释至刻度（1 000ml）。21/15Mol/L 磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na 2HPO4，A.R.）9.47g（或者 Na2HPO42H2O 11.87g）用蒸馏水溶解后，放入 1 000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1 000ml）。3按附表的比例，配制成不同 pH值的缓冲溶液。附表 1 磷酸盐缓冲液配制法（单位：毫升）pH1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO4 pH 1/15Mol/L Na2HPO41/15Mol/L KH2PO45.8 8.0 92.0 7.1 66.6 23.45.9 9.9 90.1 7.2
7、72.0 28.06.0 12.2 87.8 7.3 76.8 23.26.1 15.3 84.7 7.3 80.8 19.26.2 18.6 81.4 7.5 84.1 15.96.3 22.4 77.6 7.6 87.0 13.06.4 26.7 73.3 7.7 89.4 10.66.5 31.8 68.2 7.8 91.5 8.56.6 37.5 62.5 7.9 93.2 6.86.7 43.5 56.5 8.8 94.7 5.36.8 49.6 50.4 8.1 95.8 4.26.9 55.4 44.6 8.2 97.0 3.07.0 61.1 38.9 8.4 98.0 2.0
8、 （三）0.15Mol/L PB 液附表 2 0.15Mol/LPB液配制法pH 0.15Mol/L Na2HPO4（ml） 0.15Mol/L NaH2PO4（ml）6.4 26.5 73.56.6 37.5 62.56.8 49.0 51.07.0 61.0 39.07.2 72.0 28.07.4 81.0 19.07.6 87.0 13.0Na2HPO42H2O分子量=175.05 0.15Mol/L 溶液含 26.7g/L。Na2HPO412H2O分子量=358.22 0.15Mol/L 溶液含 53.7g/L。NaH2PO4H2O分子量=138.00 0.15Mol/L 溶液含 2
9、0.7g/L。NaH2PO42H2O分子量=156.03 0.15Mol/L 溶液含 23.4g/L。（四）0.2Mol/L PB 缓冲液附表 3 0.2mol/L PB缓冲液配制法pH 0.2 Mol/L Na2HPO4（ml） 0.2Mol/L NaH2PO4（ml）5.8 8.0 92.06.0 12.3 87.76.2 18.5 81.56.4 26.5 73.56.6 37.5 62.56.8 49.0 51.07.0 61.0 39.07.2 72.0 28.07.4 81.0 19.07.6 87.0 13.07.8 91.5 8.58.0 94.7 5.30.2Mol/L Na
10、2HPO42 H2O溶液 35.61g/LNa2HPO412 H2O溶液含 71.64g/L0.2Mol/LNaH2PO4H2O溶液含 27.60g/LNaH2PO42 H2O溶液含 31.21g/L欲配 0.1Mol/L PB缓冲液则在 0.2Mol/L PB缓冲液的基础上加 H2O稀释 1倍即可。欲配制 PBS液时，则在溶液中加 0.85的 NaCl溶液即可。（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）（0.15Mol/L PH 7.2）NaCl 8.0gKCl 0.2gNa2HPO4 1.15g（如为 Na2HPO412H2O，则为 2.89g）KH2PO4 0.2g将上述试剂依次溶于 1 0
11、00ml去离子水中，完全溶解后，115高压灭菌10min15min，存在 4冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。（六）硼酸盐缓冲液（Borate saline buffer）1硼酸（ 3BO3）0.2Mol/L硼酸：硼酸 12.37g加水至 1 000ml。2硼砂（Na 2B4O7）0.05Mol/L硼砂：硼砂 19.07g加水至 1 000ml。附表 4 不同 pH的 0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法pH 0.05Mol/L硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）pH 0.05Mol/L硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）7.4 1.0 9.0 8.2 3.5
12、6.57.6 1.5 8.5 8.4 4.5 5.57.8 2.0 8.0 8.7 6.0 4.08.0 3.0 7.0 9.0 8.0 2.0（七）巴比妥缓冲液1pH8.2 离子强度 0.05Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥钠 47.6g蒸馏水 3 000ml1.17N HCl 55.0ml（1.17 N HCl=193ml 浓 HCl加 1 807ml蒸馏水） 将 4.76g巴比妥钠溶于 3 000ml蒸馏水。 加 1.17 N HCl 55ml。 用 HCl调节 pH到 8.2，并加蒸馏水至 4 265ml。2pH8.4 0.06Mol/L 巴比妥缓冲液巴比妥 1.84g巴比妥钠 10.30
13、g加蒸馏水至 1 000.00ml3pH8.6 0.06Mol/L 巴比妥缓冲液巴比妥 1.66g巴比妥钠 12.76g加蒸馏水 1 000.00ml（八）0.2Mol/L 醋酸盐缓冲液 见表附表 5附表 5 0.2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法pH pH23 370.2Mol/LTris（ml）0.1Mol/LHCl（ml） 23 370.2Mol/LTris（ml）0.1Mol/LHCl（ml）9.10 8.95 25 5 8.06 7.90 25 27.58.92 8.76 25 7.5 7.96 7.82 25 30.08.75 8.60 25 10.5 7.87 7.73 25 32.
14、58.62 8.48 25 12.5 7.77 7.63 25 35.08.50 8.37 25 15.5 7.66 7.52 25 37.58.40 8.27 25 17.5 7.54 7.40 25 40.08.32 8.18 25 20.0 7.36 7.22 25 42.5（九）三羟甲基甲烷盐酸缓冲液（TrisHCl 缓冲液）不同 pH，0.05Mol/L25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加 ml0.1NHCl，加水稀释至 100ml（见下表）附表 6 TrisHCl缓冲液配制法pH 0.2Mol/L 0.1NHCl pH 0.2Mol/L 0.1NHCl23 37 Tris(m
15、l) (ml) 23 37 Tris(ml) (ml)9.10 8.96 25 5 8.05 7.90 25 27.58.92 8.78 25 7.5 7.96 7.82 25 30.08.74 8.60 25 10.0 7.87 7.73 25 32.58.62 8.48 25 12.5 7.77 7.63 25 35.08.50 8.37 25 15.0 7.66 7.52 25 37.58.40 8.27 25 17.5 7.54 7.40 25 40.08.32 8.18 25 20.0 7.36 7.22 25 42.58.23 8.10 25 22.5 7.20 7.05 25 4
16、5.08.14 8.00 25 25.0 25三羟甲基氨基甲烷（Tris）分子量=121.140.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷：Tris24.23g，加水至 1 000ml。0.1NHCl：取 HCl8.6ml，加水至 1 000ml。 （十）0.5Mol/L pH9.5 碳酸盐缓冲液NaHCO3 3.70gNa2CO3 0.60g溶于 600.00ml蒸馏水中即得。不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使 PH下降。最好小量配制。（十一）甘油磷酸缓冲液1配制 pH8.0磷酸缓冲液0.1Mol/L Na2HPO4 94.50ml0.1N NaH2PO4 5.50ml混合即可29 份甘油与 1份
17、 pH8.0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。用途：用于免疫荧光试验。（十二）Hanks 液1贮存液NaCl 80.00gKCl 4.00gNa2HPO412 H2O 1.52gKH2PO4 0.60g葡萄糖 4.00g0.4酚红液 50.00ml双馏水加至 100.00ml115高压灭菌 15min，冰冻保存。2工作液贮存液 1 份双馏水 9 份115高压灭菌 15min。临用时用灭菌的 5.6NaHCO 3液调 pH值至 7.2左右（溶液呈橙红色）。（十三）萘（钠）氏试剂（Nesslers reagent）配方 1：氯化汞 6.0g碘化钾 12.4g20NaOH 30ml加蒸馏水至 10
18、0ml配方 2：碘化汞 11.5g碘化钾 8g蒸馏水 50ml（完全溶解后）过滤，加 20NaOH 50ml。用途：检测溶液中氨离子。（十四）阿氏（Alsevers）液葡萄糖 2.05g柠檬酸钠 0.80g氯化钠 0.42g蒸馏水 100ml溶解后，以 10%柠檬酸调节 pH至 6.1，过滤，分装，10 磅 10min灭菌，4保存。（十五）青、链霉素混合液（简称 SP液或双抗液）青霉素（40 万 U） 5 支链霉素（200 万 g） 1 支分别溶于 100ml灭菌无离子水中或共同溶于 200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10-20冰箱保存备用（1 万单位 g/ml）。临用时，按 1%
19、的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素 100U/ml，链霉素 100ug/ml。（十六）洗液（清洁液）配方 1：重铬酸钾 150g蒸馏水 300ml浓硫酸 3 000ml将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。此为强洗液。盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，以保安全。洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。配方 2：浓硫酸 50%蒸馏水 50%重铬酸钾 5%此为中等强度洗
20、液。配方 3：重铬酸钾 100g蒸馏水 1 000ml加热溶解，冷却后缓慢加入工业硫酸 100ml此液为弱洗液，为棕红色。使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效。缓冲液名称及常用浓度 缓冲 pH 范围 主要物质分子量MES (2 吗啉代乙磺酸) 5.5-6.7 195.2Bis-Tris 5.8-7.2 209.2HEPES 6.8-8.2 238.3PIPES 6.1-7.5 302.4MOPS 6.5-7.9 209.3Tricine 7.4-8.8 179.2TEA (三乙醇胺) 7.4-8.3 149.2甘氨酸-盐酸缓冲液（0.
21、05mol/L ） 2.2-5.0 甘氨酸 Mr=75.07邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05mol/L ） 2.2-3.8 邻苯二甲酸氢钾 Mr=204.23磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液 2.2-8.0 磷酸氢二钠 Mr=141.98柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液 2.2-6.5 柠檬酸 Mr=192.06柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（0.1mol/L） 3.0-6.6 柠檬酸 Mr=192.06 柠檬酸钠Mr=257.96乙酸-乙酸钠缓冲液（0.2mol/L） 3.6-5.8 乙酸钠 Mr=81.76 乙酸 Mr=60.05邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液 4.1-5.9 邻苯二甲酸氢钾 Mr=204.2
22、3磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（ 0.2mol/L） 5.8-8.0 磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液（ 1/15 molL） 4.92-8.18 磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（ 0.05mol/L） 5.8-8.0 巴比妥钠-盐酸缓冲液(18 ) 6.8-9.6 巴比妥钠 Mr=206.18Tris-盐酸缓冲液(0.05mol/L 25) 7.10-9.00 三羟甲基氨基甲烷（ Tris）Mr=121.14甘氨酸-氢氧化钠缓冲液(0.05mol/L) 8.6-10.6 甘氨酸 Mr=75.07硼砂-氢氧化钠缓冲液(0.05mol/L) 9.3-10.1 硼砂 Na2B4O7?10H2O Mr=381.43碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(0.1mol/L) 9.16-10.83 碳酸钠 Mr=286.2 碳酸氢钠Mr=84.0碳酸钠-氢氧化钠缓冲液(0.025mol/L) 9.6-11.0 磷酸氢二钠-氢氧化钠缓冲液 10.9-12.0 氯化钾-盐酸缓冲液（0.2mol/L） 1.0-2.2 氯化钾 Mr=74.55氯化钾-氢氧化钠缓冲液（0.2mol/L） 12.0-13.0 氯化钾 Mr=74.55
