1、实时实时实时实时 荧光定量荧光定量荧光定量荧光定量 PCR技术原理技术原理技术原理技术原理王秋泉王秋泉王秋泉王秋泉Field Application ScientistTel: 800 820 8982 / 400 820 8982什么是实时荧光定量什么是实时荧光定量什么是实时荧光定量什么是实时荧光定量什么是实时荧光定量什么是实时荧光定量什么是实时荧光定量什么是实时荧光定量 PCR?一种实时监控核酸扩增的技术在 PCR反应体系中加入荧光基团 ，利用荧光信号的变化对 PCR过程进行实时监控 ，以此实现对初始模板的定量分析 。2 Life Technologies定量定量定量定量定量定量定量定量
2、PCR如何工作如何工作如何工作如何工作如何工作如何工作如何工作如何工作 ?PCR PCR反应液加入了各种类型的 荧光标记物3一个 循 环Life Technologies定量定量定量定量定量定量定量定量 PCR如何工作如何工作如何工作如何工作如何工作如何工作如何工作如何工作 ? 在扩增过程中 ,荧光信号随着 PCR产物的增加而增强4PCR PCR大量大量大量大量 PCR产产产 产 物物物 物PCR 产物Life Technologies 无论是哪个型号 ,所有的定量 PCR仪器都有三个共同的组成部分定量定量定量定量定量定量定量定量 PCR如何工作如何工作如何工作如何工作如何工作如何工作如何工作
3、如何工作 ?2. 光源51. 热循环模块3. 检测器Life Technologies定量定量定量定量定量定量定量定量 PCR如何工作如何工作如何工作如何工作如何工作如何工作如何工作如何工作 ? 每个循环结束后 ,定量 PCR仪器通过光学系统记录荧光信号的增加6循循循 循 环环环 环 1滤滤滤 滤 光片光片光片光片 A样样样 样 品品品 品 1Level:Life Technologies 最后 ,定量 PCR软件计算出数据 ，用于实验结果的分析定量定量定量定量定量定量定量定量 PCR如何工作如何工作如何工作如何工作如何工作如何工作如何工作如何工作 ?7 Life Technologies定量
4、定量定量定量定量定量定量定量 PCR的化学原理的化学原理的化学原理的化学原理的化学原理的化学原理的化学原理的化学原理8定量定量定量定量定量定量定量定量 的化学原理的化学原理的化学原理的化学原理的化学原理的化学原理的化学原理的化学原理Life Technologies两种化学方法两种化学方法两种化学方法两种化学方法两种化学方法两种化学方法两种化学方法两种化学方法染料法染料法染料法染料法染料法染料法染料法染料法TaqMan探针法探针法探针法探针法探针法探针法探针法探针法9 Life TechnologiesTaqMan水解探针 ： 5 端 荧光报告基团与靶基因特异性结合的序列3 端 荧光淬灭基团T
5、aqMan探针法探针法探针法探针法探针法探针法探针法探针法10报告基团报告基团报告基团报告基团 淬灭基团淬灭基团淬灭基团淬灭基团Life Technologies完整的探针 ：检测不到报告荧光TaqMan水解探针作用机理水解探针作用机理水解探针作用机理水解探针作用机理水解探针作用机理水解探针作用机理水解探针作用机理水解探针作用机理切断的探针 ：检测到报告荧光11能量激发光激发光荧光共振能量转移 ， FRETLife Technologies变变 性性 (95C)12 Life Technologies退火退火 (60C)13 Life Technologies14 Life Technolog
6、ies15 Life Technologies16 Life Technologies17 Life Technologies18 Life Technologies?19 Life TechnologiesTaq is special . . .head2right5-3外切酶活性外切酶活性外切酶活性外切酶活性20head2right水解探针水解探针水解探针水解探针 ，使报告基团和淬 使报告基团和淬使报告基团和淬使报告基团和淬灭基团分离灭基团分离灭基团分离灭基团分离Life Technologies21 Life Technologies22 Life Technologies23 Life Technologies24 Life Technologies25 Life Technologies26 Life Technologies27 Life Technologies28 Life Technologies29 Life Technologies30 Life Technologies
