1、Transwell 实验步骤1 将小室放入培养板中，在上室加入 300 l 预温的无血清培养基，室温下静置1530 min，使基质胶再水化。再吸去剩余培养液。2 消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用 PBS 洗 2 遍，用含 BSA 的无血清培养基重悬。调整细胞密度至 1-10105，个人认为不要超过 5105。如果需要对细胞预处理而不得不分开计数，那么计数一定要多重复几次，力求准确，尽量保证对照组和处理组细胞密度一致。3 取细胞悬液 200 l 加入 Transwell 小室。4 24 孔板下室一般加入 500 l 含 FBS 或趋化因子的培养基，这里要特别注意的是，下层培养液和小室间常会
2、有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。个人建议，最好接种细胞后 12 h把培养板从培养箱里拿出来看看，确信没有大气泡产生。 5 培养细胞：常规培养 1248 h（主要依癌细胞侵袭能力而定） 。时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。6 固定细胞：用枪头吸弃小室培养液，用 PBS 缓冲液洗细胞 2 次, 枪头吸尽残余的液体，加入 4%多聚甲醛（上室 200ul，下室 500ul）固定 30 分钟,7 染色： 弃固定液 ,PBS 洗 2 次，晾干几分钟加入结晶紫染液,染色 20 分钟, 弃染色液,用 PBS 冲洗 2 次，晾干，倒置显微镜下计数。
