1、超滤管使用注意事项 1、选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的 1/3，比如目的蛋白分子量为 35kDa，就可以选择 10kDa 截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD 左右，则可以用截留分子量 3kD 的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入超纯水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（
2、离心机预冷至 4 度）。不同离心机的转速 rpm 换算成 g 之后，有所不同。离心机的加速度调至最低档，减小对膜的压力。注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开离心机，否则离心机出问题时，无法第一时间处理。膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。4、当浓缩到剩下 1ml 时，取 50ul 缓冲溶液，加入 10ul 流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管，用 5mgml 的 BSA 离心 10min，再取流穿，跑蛋白胶或
3、 Bradford 粗测，继续加入剩下的蛋白液浓缩（在冰上操作，防止蛋白受热），直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，导致堵管。若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是 Buffer 不合适；前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度的办法解决，后者的方法是换不同的 Buffer，直到蛋白不发生沉淀为止。5、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换 Buffer，在总蛋白液浓缩至 1ml 左右的时候，轻轻加入新的 Buffer（经 0.22um 超滤膜超滤），再 浓缩至 1ml 左右，连续三次，最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于 500ul，也有浓缩至 200ul 以内的情况。按照每次至少 10 倍左右的体积浓缩算，三次达到 1000 倍以上，基本上可以达到换buffer 的目的。自来水过滤器家用超滤机：
