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茶多酚的提取计算.doc

1、1茶多酚的提取计算【实验目的】 1、了解茶多酚的性质及用途; 2、了解植物天然产物常规提取和精制的方法; 3、掌握茶多酚提取与精制的原理和方法; 4、掌握茶多酚的分析检测方法。【实验材料和仪器】 1、仪器 电动搅拌器 离心机 酸度计 真空干燥箱 抽滤瓶 真空蒸发浓缩装置 水环式真空泵 电子天平 水浴锅 紫外分光光度计 电热恒温干燥箱 分液漏斗 微量吸管器 2、试剂 氯化钠 碳酸氢钠 柠檬酸 硫酸铝 盐酸 亚硫酸氢钠 乙酸乙酯 维生素 C 磷酸氢二钠 磷酸二氢钾 硫酸亚铁 酒石酸钾钠 硫酸 没食子酸丙酯 、工艺过程及操作方法【实验原理】 茶多酚是茶叶中 30 多种多酚类物质的总称,是一类富含于茶

2、叶中、主要由表儿茶素、表没食子儿茶素及没食子酸酯类等组成的多羟基化合物,含量约占茶叶干物质总量的 2030。茶多酚分子中带有多个活性羟基(-OH),可终止人体中自由基链式反应,清除超氧离子,类似 SOD 之功效。茶多酚对超氧阴离子与过氧化氢自由基的清除率达 98以上,呈显著的量效关系,其效果优于维生素 E 和维生素 C。茶多酚还有抑菌、杀菌作用,能有效降低大肠对胆固醇的吸收,防治动脉粥样硬化,是艾滋病毒(人类免疫缺陷病毒,HIV)逆转录酶的强抑制物,有增强机体免疫能力,并具抗肿瘤、抗辐射、抗氧化、防衰老机理。茶多酚安全、无毒,是食品、饮料、药品及化妆品的天然添加成分。目前茶多酚已在医药、饮料、

3、食品、保健等行业中广泛应用。由于茶多酚易溶于热水,因此本实验首先用热水在一定温度下将茶多酚从茶叶中提取出来;然后对茶叶浸提液盐析处理除去部分杂质;再利用某些金属离子与茶多酚形成的络合物在一定 pH 值下溶解度最低的特性,将茶多酚从浸提液中沉淀出来并高效地与咖啡碱等杂质分离;经过稀酸转溶将茶多酚游离出来后,用2对茶多酚具有很好选择性的有机溶剂再次对其进行萃取分离;最后将茶多酚萃取液通过真空浓缩、真空干燥得到茶多酚精品。【实验步骤】 1、浸提:称取一定重量过 20 目的茶叶末,加入其重量 20 倍的 7095的热水,搅拌下恒温浸提 60min,过滤得茶叶浸提液。取样分析浸提液中茶多酚的含量,计算浸

4、提液中茶多酚的总量、茶多酚的浸提率。 2、盐析:加氯化钠于茶叶浸提液中,使其质量分数为 6,静置盐析 1.5h 后过滤。 3、沉淀:在上述滤液中加入茶叶重量 25的 NaHSO3 ,然后加入茶叶重量 20的硫酸铝饱和水溶液,加热至 7080 ,用 15%NaHCO3 溶液在快速搅拌下调节 pH 至 56,此时有大量沉淀析出,沉淀自然沉降一段时间后过滤,最后用等体积 70 热水洗涤沉淀三次。 4、酸溶:将沉淀在快速搅拌下放入到茶叶重量 3 倍的 pH2.54.5 的盐酸水溶液中溶解沉淀,控制酸转溶液的 pH2.54.5,酸溶时间 50min,少量胶状沉淀经离心分离除去。取样分析计算酸转溶液中茶多

5、酚的含量和总量,计算茶多酚经过盐析、沉淀及酸溶后的回收率。5、萃取:加入茶叶重量 3的 NaHSO3 至酸转溶液中,然后用其体积 0.5 倍的乙酸乙酯萃取 3 次,每次萃取时间为 10min,合并萃取液。取样分析计算萃余相中茶多酚的总量,计算茶多酚的萃取率。 6、洗涤:加入茶叶重量 2的维生素 C 至萃取液体积 0.4 倍的水中,用柠檬酸调节水溶液的 pH2.53.0,等分成二份对乙酸乙酯萃取液洗涤两次。 7、蒸发浓缩:将洗涤后的乙酸乙酯相在 5070 下真空蒸发回收乙酸乙酯,待浓缩成膏状物时,加入膏状物 2 倍体积的无水乙醇洗涤挂在壁上的物料,继续浓缩成稠的膏状物。 8、干燥:将膏状物放入真

6、空干燥箱中,在 6090下进行真空干燥,在前12h 内,将物料搅动几次,当物料干燥成粉状或干的块状时,结束干燥。干燥时间一般 48h。 9、包装保存:将干燥好的茶多酚产品转移至自封塑料袋中,称重、取样后立即密封,置入棕色玻璃干燥器中于低 (室) 温下避光保存。产品取样用于分析产品中茶多酚含量,计算出茶多酚的最终得率。、提取精制过程中及产品中茶多酚含量的分析检测方法(一) 、提取精制过程中茶多酚含量的分析检测 【实验原理】 在一定 pH 值条件下,酒石酸铁能与多酚类物质反应形成蓝紫色络合物,该络合物在 540nm 波长下具有最大吸光度。在适当的浓度范围内,茶多酚的含量与络合物的吸光度成正比,符合

7、朗伯比尔定律,因此可用分光光度法对茶多酚定量分析。【实验材料及步骤】 31、酒石酸亚铁溶液:称取 1g(准确至 0.0001g)硫酸亚铁和 5g(准确至0.0001g)酒石酸钾钠,用水溶解并定容至 1L(此液放置过夜后使用,可稳定 1 星期) 。 2、pH7.5 的磷酸盐缓冲液:a 液(1/15mol/L 的磷酸氢二钠溶液):称取磷酸氢二钠 23.877g,加水溶解并稀释至 1L;b 液(1/15mol/L 的磷酸二氢钾溶液):称取经 110烘干 2h 的磷酸二氢钾9.078g,加水溶解并稀释至 1L。 取 a 液 85mL 和 b 液 15mL 混匀,即得 pH7.5 磷酸盐缓冲溶液。 3、

8、供试液的制备与测定:准确吸取待测溶液 1mL,将其稀释 125 倍,再从稀释液中准确吸取 1mL,注入 25mL 的容量瓶中,加水 4mL 和酒石酸亚铁溶液 5mL,充分混合,再加 pH7.5 的磷酸盐缓冲溶液至刻度,用 1cm 比色杯,在波长 540nm 处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度。 【实验结果】 待测溶液中茶多酚的含量用下式计算: 茶多酚(g/mL)=1.957AX/500 式中 1.957 用 1cm 比色杯,当吸光度等于 0.50 时,每毫升茶汤中含茶多酚相当于 1.957mg;A 试样的吸光度X 待测溶液的稀释倍数 酒石酸亚铁分光光度法测定茶多酚含量(见生物分离工程实验P128129)

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