1、党参对鼠 J 774 巨噬细胞吞噬活性的增强效应党参对鼠 J 774 巨噬细胞吞噬活性的增强效应更新日期：2011-01-24 点击： 贾泰元 Benjamin H.S. Lau 摘要：目的：验证党参对机体免疫功能的增强效应并探索其作用机理。方法：用党参水提液加入鼠 J 774 巨噬细胞培养液中作微量细胞培养，以自动微量荧光分析仪直接检测其对细胞吞噬活性的影响。结果：显示党参水提液对巨噬细胞的吞噬活性有明显的增强作用，在浓度 5003 000 g/ml 时，与无药对照组(O)比较都有显著性差异(P0.05)，分别增强 1.331.70 倍。结论：巨噬细胞是重要的免疫活性细胞之一，对机体免疫反应
2、的各个环节都起关键性作用，党参能增强机体免疫的效应，可能是通过其增强巨噬细胞的免疫活性而实现的。 关键词：党参； J 774 巨噬细胞株； 氧爆炸 中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1008-0805(2000)09-0769-02 The Enhancing Effect of Chinese Medicine Radix pilosulae on J 774 Macrophage JIA Tai-yuan （Xian Central Hospital, Xian 710003, China） Benjamin H.S. Lau （Department of Microbi
3、ology, School of Medicine,Loma Linda University, Loma Linda, CA 92354 USA） Abstract：Objective: To probe into the mechanism of the enhancing effect of Chinese medicine Radix Codonopsis (CR) on organic immune activity. Method: The murine macrophage J 774 cell line was chosen to cultured with CR aqueou
4、s extract in different concentrations and then, the phagocytic activity was measured directly using a computerized microplate fluorometer. Result: The phagocytosis of macrophage J 774 was enhanced significantly by CR solution in concentrations 500 g/ml to 3 000 g/ml (P0.05). The peak value was at 2
5、000 g/ml, which increased 170% compared with the control group. Conclusion: It is suggested that the mechanism of the enhancing effect of CR on organism is accomplished probably through the augment of macrophage function. Key words：Radix Codonopsis; Macrophage J 774 cell line; Oxidative burst 党参(Rad
6、ix Codonopsis, CR)为桔梗科党参属植物，干燥根入药，可补气养血、增强机体免疫功能。中医用于“阴虚气弱、气虚”诸证，可以代人参，惟作用较弱1 。为探究党参增强机体免疫功能的作用机理，我们用党参水抽提液加入鼠 J 774 巨噬细胞培养液中，观察其对该巨噬细胞吞噬活性的影响。现将结果报道于下。 1 材料与方法 1.1 药物来源及制备：实验用党参购自西安市药材公司，陕西产。原药烘干，磨细粉。称取干粉 10 g，加蒸馏水 100 ml，置 56水浴箱温浴 1 h，悬液经 2 000 r/min 离心 15 min，上清液经 0.45 m 醋酸纤维滤器(Corning Glass Work
7、s, Corning, NY, USA)过滤消毒。4冰箱保存备用。 1.2 巨噬细胞株：实验用 J 774 A*1 巨噬细胞株来源于 BALA/C 小白鼠网状细胞肉瘤2 ，由 American Type Culture Collection CO. (Rockville, MD, USA)提供。 1.3 细胞培养及分析：J 774 细胞在 Dulbeccos 改良 Eagles 培养液(Dulbeccos 培养液加 10%牛犊血清，青霉素 50 u/ml，链霉素250 g/ml)中，在 37，5% CO2 湿润条件下，温育 34 d，经锥蓝鉴定，活细胞90%者，可用于实验。 细胞悬液加 Han
8、ks 平衡盐溶液(HASS)配制成 2105/ml 的细胞悬液。用 96 穴平底培养板作微量培养，每穴滴细胞悬液 100 l 及不同稀释度(10 g/ml3 000 g/ml)党参药液 10 l，同一浓度滴 3 穴为 1 组，留 1 组不加药液作对照组(O)，每穴再滴加经HASS 稀释成浓度为 10 mg/ml 的酵母多糖 A 10 l 作激发剂，及以二甲基亚酰胺(DMF)配制成浓度为 10 mmol/L 的双醋酸二氯荧光素(DCFA-DA) 10 l 作荧光染色，每穴终体积为 130 l。培养板置震动器上震动 1 min 使悬液混合均匀，然后放到 5% CO2 37温箱内温育 1 h 后，直
9、接经自动微量荧光分析仪(microplate fluorometer model 7610, Cambridge Technology Inc. Waternan MA. USA)在激发光波长(48510) nm 和辐射光(53012.5) nm 下测定其荧光强度，以相对荧光单位(RFU)表示之。获得数据直接转入相连电子计算机作统计学分析并制图。 1.4 统计学分析及制图：统计程序用 Stafgraphics 软件 Version 5 (STSC, Rockville, MD, USA)，取每组 3 穴 RFU 之平均值(s)作单向分析，经 Tukeys 试验，求出显著性差异值，可信度(P0.
10、05)。制图用 Sigmaplod 软件 Version 4.1 (Jandel Scientific Corte Madera CA, USA)。 2 结果 显示党参水提液能增强 J 774 巨噬细胞的免疫活性，在浓度500 g/ml 时出现显著性增强效应(P0.05)。随浓度增加，其效应也相应增强。2 000 g/ml 时达峰值，与无药对照组比较，细胞的吞噬活性增强 1.70 倍，3 000 g/ml 时效果有所降低，详见表1 及图 1。 图 1 党参对 J 774 巨噬细胞吞噬活性的增强作用 图中代表相对荧光单位(s)，*示与无药对照组比较有显著性差异(P0.05) 3 讨论 我们选用巨
11、噬细胞来鉴定党参的生物学活性是由于它是一种主要的免疫活性细胞，在机体免疫反应的各个环节，都起到关键的调节作用2 。在自然免疫中，巨噬细胞和其它吞噬细胞(中性白细胞和单核细胞)吞食并清除入侵异物，保护机体免受损害；在获得性免疫反应，巨噬细胞首先辨认、吞噬和加工抗原性异物，增强其免疫原性，然后分别传递给相应的淋巴细胞，诱发体液免疫或细胞介导免疫。此外，巨噬细胞还能协助或激活细胞毒淋巴细胞和 NK 细胞，溶解破坏突变肿瘤细胞，起免疫监护作用。除上述细胞-细胞相互作用外，巨噬细胞本身还能合成，分泌 50 多种不同的细胞因子，参与机体免疫反应全过程3 。基于上述机理，我们确信党参既能增强巨噬细胞的免疫活性，也必然能增强整个机体的免疫反应。 J 774 巨噬细胞株来源于 BALB/C 小白鼠的网织肉瘤细胞，具有正常巨噬细胞的多种功能，最大优点是性能稳定，易于培养增殖，已被用于检测多种中草药的生物学活性。 吞噬细胞在吞噬异物时，耗氧量突然增加，称呼吸性氧爆炸(Respiratory Oxidative Burst)3 ，伴随有光辐射，可借化学荧光法(Chemiluminescence)作定量分析，其相对荧光强度反应该巨噬细胞的活性强度。
