1、实验十 微生物的分离与纯化,一、实验目的 掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术。,实验十 微生物的分离与纯化,二、实验原理 从杂居混生的微生物群体中获得只含有一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。 常用的方法有： 1、简单的单细胞挑取法。 2、平板分离法 该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化。其基本原理包括两方面：,实验十 微生物的分离与纯化,二、实验原理 （1）选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养、酸碱度、温度和氧等要求或加入某种抑制剂造成只利于该微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。,实验十 微生物的分离与纯化,二、实
2、验原理 （2）微生物在固体培养基上形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获得单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。 纯培养的确定：观察菌落特征再结合显微镜检测个体形态。,实验十 微生物的分离与纯化,二、实验原理 土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物生物多样性的重要场所，是发掘微生物的重要基地，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。,实验十 微生物的分离与纯化,三、实验仪器与用具 显微镜、擦镜纸、双层瓶、载玻片、盖玻片、镊子、无菌吸管、玻璃珠、无菌培养皿、恒温培养箱等 四、实验材
3、料与试剂 分离纯化用培养,实验十 微生物的分离与纯化,五、实验操作 1、 稀释涂布平板法 （1）倒平板 将培养基加热溶化，待冷至50，将1520ml的培养基倒入培养皿中。,实验十 微生物的分离与纯化,五、实验操作 2、制备土壤稀释液,实验十 微生物的分离与纯化,五、实验操作 （3）涂布 取菌液0.1ml放入已写好稀释度的平板中，静置510min，使菌液吸附近培养基，用无菌的玻璃涂布器将菌液先沿一条直线轻轻地来回推动，使之均匀分布，然后改变方向沿另一垂直线来回推动，平板内边缘处可改变方向用涂棒再涂布几次。,实验十 微生物的分离与纯化,五、实验操作 （4）培养 放线菌、真菌，28培养35天； 细菌
4、，37 培养23天,实验十 微生物的分离与纯化,五、实验操作 （5）挑菌落 将培养后长出的单个菌落分别挑取少许细胞接种到培养基的斜面上，培养，待菌苔长出后，检查其特征是否一致，同时将微生物细胞涂片染色后用显微镜检查是否为单一的微生物，若发现杂菌，需再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。,实验十 微生物的分离与纯化,五、实验操作 2、平板划线分离法 （1）倒平板 标明培养基名称、土样编号和实验日期。 （2）划线 用无菌的接种环挑取上述10-1倍的土壤悬液一环在平板上划线。,实验十 微生物的分离与纯化,六、实验作业 1、如何确定平板上的单个菌落是否为纯培养？请写出实验的主要步骤。 2、怎么判断稀释涂布平板计数数据是否可靠？需要掌握几个关键点？,
