1、2.2 动物细胞工程,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,杂合的原生质体,杂种细胞,愈伤组织,杂种植株,温故知新:,植物体细胞杂交过程,一、动物细胞融合,1.概念：,动物细胞融合（cell fusion）也成细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。,2、原理：,细胞膜的流动性,为什么灭活的 病毒能作诱导剂？,3.融合过程：,诱导融合的方法？,4.结果,杂交细胞,灭活病毒诱导细胞融合的原理：,病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细
2、胞膜打开，细胞发生融合。灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。,P52生物技术资料卡,4.意义：,突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。,5.应用：,最重要的用途是制备单克隆抗体,研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤、和生 物新品种等的重要手段,植物细胞杂交与动物细胞融合的比较,细胞膜的流动性细胞的全能性,细胞膜的流动性,纤维素酶、果胶酶,胰蛋白酶,物理方法 （离心、振荡、电激）化学方法（PEG）,物理、化学方法 灭活的病毒,去除细胞壁后诱导原生质体融合,使细胞分散后诱导细胞融合,1. 抗体由何种细胞产生？如何产生？
3、2. 抗体的化学本质是什么？与抗原作用的特点？主要分布在哪里？ 3. 用传统的方法如何获得抗体？,二、单克隆抗体,1、抗体的传统生产方法,从血清中分离抗体,该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。,多种效应B细胞,动物体内,多种抗体,抗原,单克隆抗体的制备,利用效应B细胞：能产生特异性抗体的功能 利用骨髓瘤细胞：无限增殖的特性 利用杂交瘤细胞：既可以无限增殖的、又能产生特异性抗体的功能 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞,原理：,1、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？,这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，既可以在体外无限增值、又可以分泌单一抗体,2
4、、细胞两两融合后，有哪些类型？,B-B B-瘤(杂交瘤细胞) 瘤-瘤,3、在此过程中需筛选几次？筛选的目的是什么？,两次，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。,4、如何筛选出杂交瘤细胞？,在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有B-(杂交瘤细胞) 存活。而BB,瘤-瘤在此培养基上不能存活。）,6、怎样获得只产生特异性抗体的杂交瘤细胞？,培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。,并进行“单一抗体检测,“克隆化培养”每个杂交瘤细胞,5、筛选出的杂交瘤细胞产生的抗体都一样吗？,否,7、如何利用杂交瘤细胞来大量生产单克隆抗体？,体内培养 体外培养,8、制备单克隆抗
5、体的过程应用了哪些细胞工程技术手段？,动物细胞培养技术,动物细胞融合技术,单克隆抗体,杂交细胞,杂交瘤细胞,骨髓瘤 细胞,特异性杂交瘤细胞,杂交瘤细胞系,提取,经过免疫的 B淋巴细胞,动物细胞融合技术,动物细胞培养技术,单克隆抗体的制备过程：,特点：既能产生专一抗体又能大量繁殖,特点：特异性强灵敏度高可大量制备,3、单克隆抗体的应用,（1）作为诊断试剂最广泛应用 准确、高效、简易、快速,（如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）,（2）治疗疾病和运载药物,生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤）,(“生物导弹” 单抗导向，药物为弹头),图中B为_过程， 常用_作为诱导剂 ，该细胞继承_
6、的遗传特性，既能_,又能_ 。,1.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案,该实验方案的 目是 ；,A是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生 ；,制备单克隆抗体,B细胞,专一抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌专一抗体,无限增殖,1975年Kohler和Milstein的单克隆抗体技术在生产和使用抗体方面开创了新纪元，图10示单克隆抗体制备流程阶段示意图。请据图回答下列问题：图10 （1）该技术是在动物细胞培养技术和 技术的基础上发展起来的。 （2）图10中细胞A体外培养不具有 分裂能力，但能分泌 ， 细胞B体外培养能够 。 （3）动物细胞融合常用的方 法是。
7、,图10,（1动物细胞融合）（2）分泌特异性抗体 、无限增殖（ 3）PEG（灭活的病毒、电刺激）,（4）细胞融合是随机的过程，在HAT培养基中培养，要筛选出 细胞。在细胞培养过程中，为了促进细胞摄取葡萄糖，常向培养液中加入（激素）。 （5）培养2周后，即测定培养细胞 的特征，筛选出 细 胞置于不同孔内（如图所示）培养。 此操作前要将培养细胞稀释到 710个细胞/ml，每孔滴入 0.1ml细胞稀释液，其目的是。 （6）要获得大量的单克隆抗体， 可对获得的杂交瘤细胞进行 培养。,（4）杂交瘤、胰岛素（5）特异性分泌抗X蛋白抗体的、保证每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的（单一细胞培养以保证
8、抗体的纯度）、（6）体外或体内,看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？,A 、 B细胞为动物细胞,请据图回答问题:,A细胞,B细胞,C细胞,D细胞,(1)若A细胞为骨髓瘤细胞B细胞为淋巴细胞,那么D细胞称为 细胞,D细胞具有两个亲本细胞的特征,一方面因具有骨髓瘤细胞的 性质,通过 方式产生大量细胞,我们称之为 过程;另一方面能分泌大量的抗体,我们把该过程分泌的抗体称 .,杂交瘤,有丝分裂,连续分裂,单克隆,单克隆抗体,练一练,(2)D细胞中产生的抗体其化学本质是 ,合成该物质的场所是 ,它是由控制合成的,
9、合成过程包括和 两个重要步骤.,球蛋白,核糖体,基因,转录,翻译,(3)D细胞中产生的抗体具有 作用,与血清抗体相比其优越之处在于 强高.,免疫,特异性,灵敏度,(4)若A为人细胞,B为鼠细胞,用同位素标记A细胞膜上的蛋白质,B不标记,在C细胞时,检测结果发现整个细胞一半有放射性另一半没有.在D细胞时,检测结果发现整个细胞都有放射性,请解释原因 .,构成细胞膜的蛋白质分子大都可以流动,单克隆抗体制备过程,细胞融合、筛选,足够数量的、能产生特定抗体的细胞群,单克隆抗体,单克隆抗体:由单个杂交瘤细胞克隆形成的细胞群分泌的高度纯一的 抗体,1、（只考虑两两融合）融合细胞几种类型？ 2、本过程中进行了两次筛选，目的分别是什 么？第1次筛选要淘汰哪些细胞？ 3、杂交瘤细胞有何特点？ 4、本过程利用的哪些技术？,思考以下问题：,2、单克隆抗体的优点,特异性强、灵敏度高、可大量制备,
