1、克隆介绍 目录 克隆的概念 克隆的发展史 克隆的意义 概念 welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience 克隆：是英文 “clone“或 “cloning“的音译，而英文 “clone“则起源于希腊文 “Klone“，是“小树枝叶”的意思。 原意：指以幼苗或嫩枝插条，以无性繁殖或营养繁殖的方式培育植物，如扦插和嫁接。 概念 welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years exper
2、ience 克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖，以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体或种群。 现在则指个体、细胞、基因等不同水平上的无性增殖物，涉及到动物、植物、微生物的范围。 发展史 1952年起， Briggs和 King首先采用青蛙开展细胞核移植克隆实验，先后获得了蝌蚪和成体蛙。 1963年，中国童第周教授研究了鱼类胚胎细胞核移植技术，获得成功。 1964年，英国科学家格登（ J.Gurdon)将非洲爪蟾上皮细胞核移植到经紫外线破坏了细胞核的未受精卵中，其中有 1.5%移核卵分化发育成为正常的成蛙。格登的试验第一次证明了动物的体细胞核具有全面性。 发展史 他们 利用玻璃针穿刺
3、受精卵 ,使之旋转 ,动物极朝上 ,并将细胞核去掉 ;再用一个内径比供体细胞小的玻璃针吹吸囊胚期的细胞 ,使细胞膜破裂取出细胞核并直接注入去核的卵子里面 ,这也就是最初的利用注射法进行核移植。 发展史 1981年，卡尔 伊尔门泽和彼得 霍佩用鼠胚胎细胞培育出发育正常的小鼠，他们先用直径 10m的吸管从囊胚的内细胞团内吸出细胞核并移入到受精卵里 ,同时 ,在吸管撤出时将两个原核吸出 ,这主要是为了减少受精卵内部被破坏的机会 ,利用这种方法得到了一雄鼠和二雌鼠。 发展史 1983年 ,McGrath和 Hoppe发展了一种新的技术。他们先利用显微操作技术将受精卵的核去掉 ,然后 ,将供体细胞插入受
4、精卵的透明带 ,再经过仙台病毒介导的细胞融合作用将细胞核移入。这种技术有效地把显微操作技术和细胞融合技术结合了起来 ,从而避免了利用吸管显微操作时所造成的胚胎质膜的丢失。 在这种技术的基础上 ,1985年又发展了电融合技术 ,胚胎细胞核移植得到了进一步的发展。 发展史 1984年，施特恩 维拉德森用取自羊的未成熟胚胎细胞克隆出一只活产羊，后来在牛、猪、山羊、兔和猕猴等动物上进行了重复实验。 1989年，维拉德森获得连续移核二代的克隆牛。 1994年，尼尔 菲尔斯特用发育到至少有 120个细胞的晚期胚胎克隆牛。 1997年 ,克隆猴应运而生 ,这是首次灵长类动物的克隆。 发展史 1997年 2月
5、英国罗斯林研究所维尔穆特博士科研组公布体细胞克隆羊“多利”，它是世界上第一例经体细胞核移植出生的动物。 其技术突破在于找到了供体核和受体细胞质的细胞周期相互协调的方法。他们利用血清饥饿法选取了处于 G0和 G1期的细胞核作为核供体 ;选取了处于减数分裂 Mo期的卵母细胞作为受体。这样 ,二者在 DNA的复制时间上是一致的。 发展史 1998年 7月，美国夏威夷大学 Wakayama通过“檀香山技术”，利用小鼠卵丘细胞克隆了 27只成活小鼠，其中 7只是由克隆小鼠再次克隆的后代。 他们选取了自然状态处于 G0期的卵丘细胞作为核供体。直接注入去核的卵母细胞中 ,另外 ,不同于Wilmut的电激活同
6、时融合重组胚胎和激活胚胎 ,他们将核移植的重组胚胎放置 06 h再激活 ,这种克隆方法提高了 56倍的成功率。 发展史 1998年 7月至 1999年底，全世界已有 6类体细胞（胎儿成纤维细胞、乳腺细胞、卵丘细胞、输卵管 /子宫上皮细胞、肌肉和耳部皮肤细胞）的克隆后代成功诞生。 发展史 1991年 ,利用 432细胞的胚胎克隆了 5只山羊。 2000年 6月，中国西北农林科技大学利用成年山羊体细胞克隆出两只“克隆羊”。 2012年 3月 18日凌晨，中国农业科学院北京畜牧兽医研究所胚胎工程与繁殖技术室获得体细胞克隆公牛 1头，这是我国首次采用无透明带克隆方法获得的荷斯坦种公牛体细胞克隆后代，也
7、是第三例荷斯坦种公牛体细胞克隆公牛。 发展史 1998年 1月，美国威斯康星一麦迪逊大学的科学家们以牛的卵子为受体，成功克隆出猪、牛、羊、鼠和猕猴五种哺乳动物的胚胎，这一研究结果表明，某个物种的未受精卵可以同取自多种动物的成熟细胞核相结合。虽然这些胚胎都流产了，但它对异种克隆的可能性作了有益的尝试。 发展史 1999年，美国科学家用牛卵子克隆出珍稀动物盘羊的胚胎；中国科学家也用兔卵子克隆了大熊猫的早期胚胎，这些成果说明克隆技术有可能成为保护和拯救濒危动物的一条新途径。 发展史 1997年 ,能表达凝血因子的克隆羊就已经被培育成功。利用胎儿成纤维细胞系 ,经过转染之后再克隆。 1998年 ,携带外源基因的克隆牛再次诞生。 利用原核注射的转基因技术相对简单 ,只需将裸露的 DNA注入受精卵 ,但有效率低和随机整合的缺陷。利用克隆进行转基因 ,一旦核移植成功 ,从理论上讲 ,转基因成功率为 100%。 意义 培育优良畜种和生产实验动物 生产转基因动物 生产人胚胎干细胞 复制和保存濒危物种 Thank you!
