1、第五章 菌种保藏的原理和方法,提纲,菌种保藏的目的和意义 菌种保藏的原理和方法斜面保藏法和穿刺保藏法沙土管干燥保藏法真空冷冻干燥保藏法液氮保藏法菌种复壮种子扩大培养,菌种保藏的目的和意义,目的意义：保持优良菌种优良性状的稳定，满足生产的实际需要。优良菌种丢失（退化）的原因：世代短、易变异、易污染、死亡。 菌种保藏机构：世界现有700多家专门机构。 措施：创造条件，使微生物处于休眠状态，减少变异。低营养、低温、干燥、缺氧低代谢、低生长,菌种保藏的原理和方法,菌种保藏(Culture conservation)原理 挑选优良的菌种，最好是休眠体 创造有利于种子休眠的环境（低温、干燥、缺氧、避光、缺
2、少营养） 菌种保藏方法 斜面(Slant)低温保藏法 传代培养，六个月 砂土管保藏法 适用范围广，两年 冷冻干燥(Freez-drying)保藏法 长达十年 液氮超低温保藏法（-130） (Liquid nitrogen ultra-low temperature storage),一、斜面保藏法和穿刺保藏法,1.斜面保藏法：（短期，3-6个月） 范围：细菌、放线菌、酵母、丝状真菌 方法：适宜培养基适温培养冰箱保藏（4-5）到期转种 优点：设备、方法简单 缺点：转代多，易变异；污染机会多,一、斜面保藏法和穿刺保藏法,2.穿刺保藏法：（好气菌，6-12个月） 方法：小试管或螺口管1琼脂培养基接种
3、针穿刺培养盖2-3mm无菌液体石蜡冰箱保藏 范围：细菌、放线菌、丝状真菌 优点：范围较广，简便实用 缺点：不适用能利用石蜡为碳源的微生物；不同种类，保藏期差异较大。,二、沙土管干燥保藏法,范围：产孢子的放线菌和丝状真菌，形成芽孢的细菌。 方法：沙、土分别洗净烘干、过筛（80-100目）1-2 1沙土混合、装管1cm121灭菌2-3 次无菌检验烘干备用孢子或悬液与沙土混匀真空抽干封口（熔封、石蜡封）干燥器中于冰箱5保藏 特点：设备简单，方法较繁，效果较好（长，2年，有长达10年），但范围受限制。,三、真空冷冻干燥保藏法,方法：1.安瓶管处理：8-10100-150mm，浸洗、烘干、盖口；灭菌、干
4、燥（60）。2.保护剂：减少冷冻干燥对微生物的损伤，常用脱脂牛奶、血清（适当方法灭菌）。3.菌悬液制备：斜面加保护剂 制悬液吸入安管4.冷冻干燥：快冷至-15- -30 ，抽真空，15 分钟内达到66.661Pa ；升到13.3322Pa，升温至20-30 ；真空封口。5.安瓶管保藏： 4-5 ，5-10年。（样品含水量1-3）,四、液氮保藏法,方法：浓菌悬液加保护剂装安管0.2-1cm 封口降温（1/min）至-25 ，入液氮罐，-150 -196 保藏。取出时，应于温水（38-40 ）中震荡1-2min。 特点：效果好（2-3年，长达9年），方法简单，保藏对象广泛。,五、菌种复壮,原理与方
5、法 单细胞分离复壮 改变培养条件复壮,六、种子扩大培养,种子(Seed)扩大培养： 将保藏的生产菌种从斜面试管(Tube slant)接出后，进行摇床(Shaker)培养及种子罐(Seeding tank)逐级培养以获得一定数量和质量的纯种的过程，纯种培养物称作种子。,六、种子扩大培养,种子扩大培养的级数 二【三】级发酵： 斜面菌种-一级种子摇床培养-二级种子罐培养【-三级种子罐培养】-发酵罐生产 影响级数的因素 微生物自身的生长特性 发酵罐的生产规模,六、种子扩大培养,影响种子质量的主要因素 培养基(Culture media)中的成分配比 种龄(Cell age)与接种量(Inoculation concentration) 温度 pH值 通气(Ventilation)和搅拌(Stirring) 泡沫(Foam) 染菌(Infection),本章知识结构,斜面保藏法和穿刺保藏法 斜面保藏法 穿刺保藏法 沙土管干燥保藏法 真空冷冻干燥保藏法 液氮保藏法 悬液保藏法 低温保藏法,预习内容培养基,不同碳源的利用速度 碳氮比例的调节,第1-5章习题,名词解释：微生物工程 自然选育 诱变剂 组成型突变株 次级代谢 初级代谢 途径工程 简答：微生物工业的特点影响诱变的因素常用的菌种保藏方法（四种）微生物自我调节部位 论述：优良菌种应具备的特征微生物分支合成途径有那几种调节，各有何特点？,
