1、本实验的主要目的是掌握 RNA 琼脂糖凝胶电泳的操作技术，总结了 RNARNA 琼脂糖凝胶电泳的原理、实验材料、试剂及器具、操作步骤及注意事项。一、实验目的学习 RNA 琼脂糖凝胶电泳的使用技术。二、实验原理RNA 可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。在非变性电泳中，可以分离混合物中不同分子量的 RNA 分子，凡是无法确定分子量。只有在变性情况下， RNA 分子完全伸展，其泳动率才与分子量成正比。判断 RNA 提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一。完整的未降解的 RNA 制品的电泳图谱应可清晰看到 18s rRNA、28s rRNA、5s rRNA 的三条带，且 28s rRNA 的亮度应
2、为 18s rRNA 的两倍。三、材料、试剂及器具1、 材料总 RNA 提取物。2、 试剂(1)0.1%DEPC 水： 200ml 双蒸 去离子水加 0.2mlDEPC 焦炭酸、二乙酯混匀，室温放置过夜，高压灭菌。(2)10x 电泳缓冲液。吗啉代丙烷磺酸(MOPS) 0.4mol/L(pH 7.0)NaAc 0.1mol/L乙二胺四乙酸(EDTA) 10mmol/L(3)50mL 变性琼脂糖凝胶(1%)(4)10x 电泳缓冲液 5 mL琼脂糖 0.5 g0.1%DEPC 水 36.5 mL加热溶解，稍冷却，加入 8.5 mL 37%甲醛。(5)上样缓冲液：50%甘油，1mmmol/LEDTA，
3、0.4% 溴酚兰， 0.4%二甲苯蓝。(6)甲酰胺(去离子)。3、器具(1)电泳系统(2)紫外透视仪四、操作步骤1、 将制胶用具用 70%乙醇冲洗一遍，晾干备用。2、 制胶：称取 0.5g 琼脂糖粉末，加入放有 36.5mL 的 DEPC 水的锥形瓶中，加热使琼脂糖完全溶解。稍冷却后加入 5mL 的 10x 电泳缓冲液、8.5mL 的甲醛。然后在胶槽中灌制凝胶，插好梳子，水平放置待凝固后使用。3、 加样：在一个洁净的小离心管中混合以下试剂：电泳缓冲液(10x)2l、甲醛 3.5mL、甲酰胺10mL、RNA 样品 3.5l。混匀，置 60保温 10min，冰上速冷。加入 3l 的上样缓冲液混匀，取适量加样于凝胶点样孔内。同时点 RNA 标准样品。4、 电泳：打开电泳仪，稳压 7.5V/cm 电泳。5、 电泳结束后通过紫外透视仪观察。五、注意事项本实验中必务必要去除 RNase 污染，防止 RNA 降解。所有试剂和器具需要用 DEPC 水配制和处理，并灭菌。此外可通过 18s rRNA、28s rRNA、5s rRNA 的三条带的亮度判定 RNA 的完整性。
