1、交流：大鼠 PK 取血操作,2012-5-5,交流提纲,实验环境实验材料,动物处理,取血容量时间安排,具体操作,.,血样处理,问题讨论,环境 材料,B 毛细管,0.9mm 100mm，看个人习惯使用，经常一管三断，30mm/管，弃去中间段。,EP 管 加入0.1% 肝素钠 （150U/mg） 0.1 mL，均匀润湿， 50以下干燥；适用 1mL 全血的抗凝，效果良好。 取血时必须提前检查管的质量，标号分组，适当多备。,C 抗凝EP管,D 计时工具,A 通风台面,长时间操作，透气通风 宽敞台面，便于多组多步骤同时操作,Page 3,Page 4,动物处理,实验期间 ，补充体液 ，目前常规为：取血
2、后灌胃给予等统计生理盐水/葡萄糖溶液。,动物 体重要求 一般 不低于250g,给药前 禁食12-24h，给药前 提前 0.5-1.0h 按0.5-1.0%（V/W）给水,实验之后，外用消炎药涂布眼部,Page 5,容量 时间,注射 一般 呈现 降低 趋势，给药后较短时间内采集的点数适当增加；灌胃 存在Cmax-tmax，需通过考察tmax，根据一般原则，适当调整时间间隔。,取血 容量 时间 安排,选点一般原则,预实验建立,药物性质,给药途径,分布相 3-4个点,吸收相 3-4个点,吸收相 3-4个点,一般12h内取血 不超过动物质量 2.0% （v/w）,每次0.25- 0.5 mL,Page
3、 6,大鼠眼眶取血流程,6样品摇匀,1.将大鼠按压在鼠笼上，拇+中+食指固定住头部,3.右手持毛细管从眼内眦部，与鼠面成45 夹角，旋转刺入,2.紧握颈部，压迫颈两侧，使眼突出，眶后静脉丛充血,4.固定身体，压住后肢，放松手指，调整毛细管，流畅出血。,5.取血完成，立即除去颈部压力，将采血器拔出，按压止血。,6血样管轻轻混匀，防止凝血、溶血。,2压迫颈部,3旋转刺入,4固定采血,5去管止血,1左手保定,Step 1A 建议笼子内放置重物 防止摇晃；B 一定要带手套；C 开始必须牢牢固定住头部 头部乱动，扎位置容易得偏离，且易被咬伤； D 可在此时将大鼠取血侧的胡须剪掉，防止接触凝血。,Page
4、 7,大鼠眼眶取血流程,Step2A 可用管试探性触碰眼球是否已经突出；B 此时大鼠反抗挣扎最厉害，保证抓紧的同时，不能太过，使其窒息死亡。,Page 8,大鼠眼眶取血流程,Step3 A 针头斜面先向眼球，刺入后再转一定角度使斜面对着眼眶后界； B 刺入深度，小鼠约2-3mm，大鼠约4-5mm。当感到有阻力时即停止推进，同时，管退出约0.1-0.5mm，边退边旋转； C 不要使用管的尖锐锋利端插入，易留玻璃碎片在眼内，造成持续伤害，使得下次反抗增加； D 拿管的手要保持干净，带血渍的手指不要接触管的两端，易造成凝血，可用醇水擦洗。,Page 9,大鼠眼眶取血流程,Step 4A 一般血流速度
5、快，证明插破了眼眶动脉，如果血流速度慢，证明要调整毛细管的位置，血液都流到组织中了，没顺毛细管流出来；B 出血过程中如遇到出血不畅 不用着急拔毛细管 可以调整一下毛细管的扎入位置 或深或浅的挑正一下 血会重新流出；C 如看见血液已经在毛细管中凝固 必须迅速拔除毛细管，再搽干净眼睛，重新换管扎针；D 等到出血后 将力道转移到大鼠的身体上 大鼠出现乱动的情况很大的一部分力是他的后肢使出来的 保证她的后肢无法乱蹬就能很好的保定大鼠，然后将中指和食指处解除一半的力道，可以保证血液的顺畅,Page 10,大鼠眼眶取血流程,Step 5 A 当得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时，将采血器拔出，以
6、防止术后穿刺孔出血。 B 尽量把眼睛周围的血渍搽干净，避免结块影响下次取血。,Page 11,大鼠眼眶取血流程,大鼠眼眶取血流程,Page 12,大鼠眼眶取血流程,Page 13,大鼠眼眶取血流程,Page 14,Page 15,大鼠眼眶取血流程,Page 16,Page 17,大鼠眼眶取血流程,Page 18,大鼠眼眶取血流程,Page 19,大鼠眼眶取血流程,大鼠眼眶取血流程,Page 20,大鼠眼眶取血流程,Page 21,血样处理,血样处理,血清 不抗凝,血浆 肝素钠抗凝,A全血37水浴0.51h，,短时间内（ 30 min）,低速（ 4000） 离心（10min）,离心，取上清液， 低温保存,B全血 室温静置 0.5-1h，低温冰箱 过夜）,离心，取上清液， 低温保存,Page 22,血浆/全血（V/V）前五点低于40%-后续60%,汇报完毕，谢谢！,
