1、食品药品检验检测中心 文件编号：SOP-JY-作 业 指 导 书 第1页，共4页食品中合成着色剂测定的标准操作规程 批准人 颁布日期：1目的 为规范食品中合成着色剂测定的具体检测方法及检测要求，确保检验结果准确、可靠，特制定本程序。2适用范围 2.1本规程规定了食品中合成着色剂的测定方法的标准操作。2.2本规程适用于食品中合成着色剂的测定。2.3方法检出限：新红5ng、苋菜红6ng、胭脂红8ng、日落黄7ng、赤藓红18ng、亮蓝26ng，当进样量相当于0.025g时，检出浓度分别为0.2mg/kg、0.16 mg/kg、0.24 mg/kg、0.32 mg/kg、0.28 mg/kg、0.7
2、2 mg/kg、1.04 mg/kg。3操作方法 3.1试剂与标准液3.1.1柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸，加水至100mL，溶解混匀。3.1.2甲醇-甲酸(6+4)溶液：量取甲醇60mL，甲酸40mL，混匀。3.1.3无水乙醇-氨水-水（7+2+1）：量取无水乙醇70mL，氨水20mL，水10mL，混匀。3.1.4氨水-乙酸铵溶液(0.02mol/L)：量取氨水0.5mL，加乙酸铵溶液(0.02mol/L)至1000mL，混匀。3.1.5三正辛胺正丁醇溶液(5)：量取三正辛胺5mL。，加正丁醇至100 mL，混匀。3.1.6pH6的水：水加柠檬酸溶液调pH值到6。3.1.7合成着色剂标准溶液
3、：准确称取按其纯度折算为100质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各0.100g，置100mL容量瓶中，加pH6水到刻度，配成水溶液(1.00mg/mL)。3.1.8合成着色剂标准使用液：临用时将3.1.7溶液加水稀释20倍，经O.45m滤膜过滤，配成每毫升相当于50.Og的合成着色剂。SOP-JY-食品药品检验检测中心 文件编号：SOP-JY-作 业 指 导 书 第2页，共4页食品中合成着色剂测定的标准操作规程 批准人 颁布日期：3.2仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器）3.3分析步骤3.3.1试样处理桔子汁、果味水、果子露汽水等：称取20.Og40.0g，放入100
4、mL烧杯中，含二氧化碳试样加热驱除二氧化碳。配制酒类：称取20.0 g40.0g，放入100mL烧杯中，加小碎瓷片数片，加热驱除乙醇。硬糖、蜜饯类、淀粉软糖等：称取5.00g10.00g粉碎试样，放人100mL小烧杯中，加水30mL，温热溶解，若试样溶液pH值较高，用柠檬酸溶液调pH值到6左右。巧克力豆及着色糖衣制品：称取5.00g10.0Og，放人100mL小烧杯中，用水反复洗涤色素，到试样无色素为止，合并色素漂洗液为试样溶液。3.3.2色素提取聚酰胺吸附法：试样溶液加柠檬酸溶液调pH值到6，加热至60，将1g聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒人试样溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用60pH
5、4的水洗涤3次5次。然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3次5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3次5次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL。经045m滤膜过滤，取10L进高效液相色谱仪。液-液分配法(适用于含赤藓红的试样)：将制备好的试样溶液放入分液漏斗中，加2mL盐酸、三正辛胺正丁醇溶液(5)10mL20mL，振摇提取，分取有机相，重复提取至有机相无色，合并有机相，用饱和硫酸钠溶液洗2次，每次10mL，分取有机相，放蒸发皿中，水浴加热浓缩至10mL，转移至分液漏斗中，加60mL正己烷，混匀，加氨水提取2次3次，每次5mL，合并氨水溶液层(含水溶性酸
6、性色素)，用正己烷洗2次，氨水层加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水定容至5mL经滤膜O.45m过滤，取10L进高效液相色谱仪。SOP-JY-食品药品检验检测中心 文件编号：SOP-JY-作 业 指 导 书 第3页，共4页食品中合成着色剂测定的标准操作规程 批准人 颁布日期：3.3.3高效液相色谱条件色谱柱：C 18 4.6 mm(id)250mm ，10m波长：254nm流速：1mL/min流动相：甲醇：乙酸铵溶液(pH=4，0.02mol/L)梯度洗脱程序：时间 甲醇 乙酸铵溶液 比例变化速率 色谱软件曲线20 805min 35 65 3%/min 612min 98 2 9%/mi
7、n 618min 98 2 0%/min 619min 20 80 125min 20 80 63.3.4测定取相同体积样液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。3.4结果计算试样中着色剂的含量按下式进行计算。10/12VmAX式中：X试样中着色剂的含量，单位为克每千克(gkg)A样液中着色剂的质量，单位为微克(g)V2进样体积，单位为毫升(mL)V1试样稀释总体积，单位为毫升(mL)；SOP-JY-食品药品检验检测中心 文件编号：SOP-JY-作 业 指 导 书 第4页，共4页食品中合成着色剂测定的标准操作规程 批准人 颁布日期：m试样质量，单位为克(g)。3.5要求3.5.1计算结果保留两位有效数字。3.5.2精密度：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10。注：参考色谱图1新红2柠檬黄3苋菜红4靛蓝5胭脂红6日落黄7亮蓝8赤藓红4相关技术依据GB/T 5009.35-2003食品中合成着色剂的测定SOP-JY-
