1、Cell Counting Kit（ CCK 试剂盒）目录号 产品名称 规格 包装025 Cell Counting Kit 100 次 1mL026 Cell Counting Kit 500 次 5mL027 Cell Counting Kit 1000 次 10mL028 Cell Counting Kit 3000 次 30mL产品简介：Cell Counting Kit 简称 CCK 试剂盒，为 MTT 法的替代方法，是一种基于 WST（水溶性四唑盐，化学名：2-(2- 甲氧基 -4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞
2、毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。CCK 法与其它检测方法之间的比较：CCK 用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验操作说明：一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。2、按比例（例如：1/2 比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 3-5 个细胞浓度梯度，每组 3-6 个复孔。3、接种后培养 2-4 小时使细胞贴壁，然后加 CCK 试剂培养一定时间后测定 OD 值，制作出一条以细胞数细胞计数方法 MTT 法 XTT 法 WST-1 法 CCK 法形成的 formazan 的水溶性 差 好 好 好产品性
3、状 粉末 2 瓶溶液 溶液 1 瓶溶液使用方法 配成溶液后使用 现配现用 无需预制 无需预制检测灵敏度 高 很高 很高 高检测时间 较长 较短 较短 最短检测波长 560-600nm 420-480nm 420-480nm 430-490nm细胞毒性 高，细胞形态完全消 失 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变试剂稳定性 一般 较差 一般 很好大批量样品检测 可以 非常适合 非常适合 非常适合便捷程度 一般 便捷 便捷 非常便捷量为横坐标（X 轴） ，OD 值为纵坐标（Y 轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，
4、便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK 后的培养时间。）二、细胞活性检测1、在 96 孔板中接种细胞悬液（100L/ 孔） 。将培养板放在培养箱中预培养（在 37,5% CO 2 的条件下） 。2、向每孔加入 10 L的 CCK 溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数） 。3、将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。4、用酶标仪测定在 450nm 处的吸光度 。5、如果暂时不测定 OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 L 0.1M 的 HCL 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。三、细胞增值-
5、毒性检测1、在 96 孔板中配置 100L的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时（在 37，5% CO 2 的条件下） 。2、向培养板加入 10L不同浓度的待测物质。3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24 或 48 小时） 。12 后/24h4、想每孔加入 10L CCK 溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数） 。5、将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。 （2h 后）6、用酶标仪测定在 450nm 处的吸光度。7、如果暂时不测定 OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 L 0.1M 的 HCL 溶液或者 1% w/v SDS 溶液
6、，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK 之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基） ，去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。备注：建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入 CCK 试剂后的培养时间。 （怎么判断哪个时间好？）有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔减的差异。加入 CCK 试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基页面下加，容易产生气泡，会干扰 OD 值读数。白细胞可能需要培养较长时间。
7、当使用标准 96 孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为 1,000 个/孔 (100 L 培养基) 。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于 2,500 个/孔 (100 L 培养基) 。如果要使用 24 孔板或 6 孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的 10%加入 CCK 溶液。如果没有 450nm 的滤光片，可以使用吸光度在 430-490 nm 之间的滤光片，但是 450nm 滤光片的检测灵敏度最高。培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。活力计算：细胞活力*（）=A(加药)-A（空白）/A（0 加药）-A（空白） 100A（加药）：具有细胞、CCK 溶液和药物溶液的孔的吸光度A（空白）：具有培养基和 CCK 溶液而没有细胞的孔的吸光度A（0 加药）：具有细胞、CCK 溶液而没有药物溶液的孔的吸光度*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力保存条件：4干燥避光保存，有效期一年。
