1、1小鼠发育生物学实验内容实验一：小鼠卵母细胞和精子的形态观察一、实验目的：掌握胚胎体外操作工具的制备、小鼠超数排卵方法以及小鼠精子和不同发育阶段观卵母细胞的收集方法，观察精子结构和运动状态，评估精子活力，观察卵母细胞结构，了解体外授精操作过程。二、操作过程：1 胚胎体外操作工具制备在酒精喷灯上将玻璃管拉成直径 1mm 的细管，连上乳胶管即可。2 小鼠的抓去与保定3 收集精子断颈处死公鼠，打开腹腔，找到睾丸和附睾，剪取附睾尾，剪碎，置 1.5ml 离心管底部，加0.5ml 生理盐水，置 37 度水浴锅 20 分钟，用吸管从离心管上部取 50 微升液体，置细胞计数板，观察精子结构、密度和活力。精子
2、活力计算公式：精子活力视野中直线运动的精子数/视野中总精子数4 收集卵母细胞成熟卵母细胞的收集：母鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素 PMSG（每只 10 单位） ，48 小时后再注射人类绒毛膜促性腺 HCG（每只 10 单位） ，18 小时后断颈处死母鼠，打开腹腔，剪下输卵管，用镊子刺破输卵管壶腹部，释放卵母细胞，用透明质酸酶溶液（10 毫克/毫升生理盐水）处理卵母细胞以除去颗粒细胞，在实体显微镜下观察卵母细胞的结构。未成熟卵母细胞的收集：断颈处死性成熟前母鼠，打开腹腔，剪取卵巢，加入 1 毫升盐水，用刀片或镊子捣碎卵巢，寻找生发泡状态的卵母细胞，观察卵母细胞结构。5 体外授精将卵母细胞与精子共培
3、养（微滴培养法） （演示）三、实验结果各种精子和卵子的形态绘图；精子活力；精子密度四、实验收获与体会，存在问题和改进意见。2实验二：小鼠早期不同发育阶段胚胎的收集、观察以及胚胎移植一、实验目的：掌握小鼠附植前胚胎收集方法，观察不同发育阶段小鼠胚胎的结构，认识小鼠早期胚胎形态学，并了解体内发育阶段与所处生殖器官位置的关系，了解小鼠胚胎移植的基本原理和操作过程。二、操作过程：1 小鼠超数排卵程序中午 12 时腹腔注射 PMSG， 48 小时后腹腔注射 HCG 并与公鼠合笼交配，次日清晨检查阴道栓，如果发现阴道栓则妊娠 0.5 天。2 收集胚胎断颈处死妊娠 0.5 天、1.5 天、2.5 天、3.5 天母鼠，剪取输卵管和子宫，将注射器针头插入输卵管开口或子宫角，用生理盐水冲洗输卵管或子宫角，收集受精卵、2细胞胚胎、8细胞胚胎以及囊胚，观察胚胎形态。3 小鼠胚胎移植结扎公鼠准备（演示） ；假孕母鼠准备（演示） ；输卵管移植（演示）子宫移植：麻醉假孕 2.5 天母鼠，在右侧最后一根肋骨后沿打开腹壁，找到卵巢，用镊子夹住卵巢周围的脂肪组织，拉出子宫角，用小铁夹固定卵巢，用吸胚管吸取囊胚，移入子宫角，手术缝合腹壁，17 天后观察母鼠分娩。三、实验结果各种胚胎的形态绘图四、实验收获与体会，存在问题和改进意见。
