1、辛酸硫酸铵沉淀法提取免疫球蛋白 G一、实验目的：1、了解蛋白质纯化的基本技术；2、学习辛酸硫酸铵法纯化抗体的方法。二、实验原理：根据免疫球蛋白的性质利用生物化学各种纯化方法进行抗体的纯化，主要有常规生物化学和特异性亲和层析两类方法。本实验采用辛酸硫酸铵沉淀法从动物血清中纯化抗体，纯度和回收率较高，且抗体活性不被破坏；同时此方法操作简便、周期短、成本低、不需要复杂的仪器设备，不仅使用于小量抗体的纯化，也适合大批量抗体的制备。三、实验材料试剂和器材：1、实验材料：兔血清。2、试剂：乙酸-乙酸钠缓冲液、 10磷酸盐-NaCl 缓冲液、透析液、5 mol/LNaOH、0.1mol/L NaOH。3、器
2、材：电磁搅拌器、离心机、透析袋。四、操作方法：1、动物血清用 4 倍体积乙酸-乙酸钠缓冲液稀释，0.1mol/L NaOH 调整血清稀释液 pH 至4.5。2、室温下用电磁搅拌器边搅拌边缓慢滴加辛酸（加入量为 1L 血清稀释液加 25ml） ，滴加完后继续搅拌 30min。3、离心（10000 转/分，20 分钟） ,收集上清液，弃去沉淀，上清液用滤纸过滤除去悬浮物，量体积。4、按照 10%体积加入 10磷酸盐 -NaCl 缓冲液，用 5 mol/LNaOH 调 pH 至 7.4。5、上清液 4预冷 10min，测量溶液总体积，在 4按 277g/L 缓慢加入硫酸铵粉末（终浓度达到 45%饱和度） ，边加边搅拌，加完后继续搅拌 30min。6、离心（5000 转/分，15 分钟）,弃去上清液，收集沉淀。7、沉淀用少量透析液溶解（一般为原血清体积的 1/10） ，透析并更换两次透析液。8、透析后的抗体溶液在 5055水浴中加热 20min，离心（5000 转/分，20 分钟）,上清液于-20保存。
