1、RNA 凝胶电泳试验实验基本原理RNA 可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。在非变性电泳中，可以分离混合物中不同分子量的 RNA 分子，凡是无法确定分子量。只有在变性情况下，RNA 分子完全伸展，其泳动率才与分子量成正比。判断 RNA 提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一。完整的未降解的 RNA 制品的电泳图谱应可清晰看到 18s rRNA、28s rRNA、5s rRNA 的三条带，且 28s rRNA 的亮度应为 18s rRNA 的两倍。实验试剂1、0.1%DEPC 水：200ml 双蒸去离子水加 0.2mlDEPC 焦炭酸、二乙酯混匀，室温放置过夜，高压灭菌。2、10x 电泳缓冲液
2、：吗啉代丙烷磺酸（MOPS）0.4mol/L（pH 7.0）；NaAc 0.1mol/L；乙二胺四乙酸 (EDTA) 10mmol/L；3、50mL 变性琼脂糖凝胶（1% ）：10x 电泳缓冲液 5 mL；琼脂糖 0.5 g；0.1%DEPC 水 36.5 mL；加热溶解，稍冷却，加入 8.5 ml 37%甲醛。4、上样缓冲液（染料）：50%甘油，1mmol/LEDTA，0.4% 溴酚兰，0.4% 二甲苯蓝。5、甲酰胺（去离子）。v 电泳槽清洗：去污剂洗干净（一般浸泡过夜） 水冲洗乙醇干燥 3%H2O2 灌满 室温放置 10 分钟 0.1%DEPC 水冲洗。操作步骤1、将制胶用具用 70%乙醇
3、冲洗一遍，晾干备用。2、制胶：称取 0.5g 琼脂糖粉末，加入放有 36.5mL 的 DEPC 水（蒸馏水 40ml）的锥形瓶中，加热使琼脂糖完全溶解。稍冷（6070）却后加入 5ml 的 10x 电泳缓冲液、8.5（ 9）ml 的甲醛（+0.5l 溴化乙锭）。然后在胶槽中灌制凝胶，插好梳子，水平放置待凝固后使用。3、加样：在一个洁净的小离心管（DEPC 处理过的 500l 的）中混合以下试剂：电泳缓冲液（10x）2l、甲醛 3.5ml、甲酰胺 10ml（l）、RNA 样品 3.5（4.5）l。混匀，置 60保温 10min，冰上速冷。加入 3l 的上样缓冲液（染料）混匀，取适量加样于凝胶点样
4、孔内。同时点 RNA 标准样品。4、电泳：打开电泳仪(电泳槽内加入 1XMOPS 缓冲液) ，稳压 7.5V/cm（ml）电泳。5、电泳结束后通过紫外透视仪观察。注意事项本实验中必须保持 RNase 污染以免 RNA 降解。所有试剂用 DEPC 水配制，用具也用 DEPC 水冲洗，并灭菌。电泳 RNA 所用器械如制胶的模具、梳子、电泳槽等用肥皂粉洗干净后用双蒸水冲洗二遍后在室温晾干备用。用新的 1XTBE 配制 1.2%琼脂糖凝胶，倒胶时溴化乙锭（ EB）直接加入凝胶中。制备好的琼脂糖凝胶板放入电泳槽后再加入经高压灭菌过的 1XTBE，液面只能刚好同胶面平齐，缓冲液不要淹过胶面。点样时，样品 RNA 每 10l 加入 2l 上样缓冲液，上样缓冲液是用 DEPC 处理的水配制的 50%甘油，另外单独点一样品孔含有 3l 溴酚蓝的上样缓冲液作为电泳指示剂，电泳电压 4V/cm，电泳时间 2h 左右便可取出凝胶在紫外灯下观看所提取的 RNA 的质量或进行拍照记录。
