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游离脂肪酸测定方法.doc

游离脂肪酸检测(Fatty Acids Content)游离脂肪酸检测试剂盒(FFA Assay Kit.Kit content Cu Reagent,Color reagent and standard)实验准备1. 抽提剂配制:自备氯仿、正庚烷、甲醇,按照体积(氯仿:正庚烷:甲醇=28 :21:1)配制抽提剂200ml,4储存。2. 标准品配制:精确称取 82.06mg 标准品(Palmitic acid,分子量=256.44),溶于抽提剂中,终体积50ml,终浓度 64mM,密封 4保存。测定方案1. 用抽提剂将 64mM 标准品新鲜稀释为 6.4、3.2、1.6、0.8、0.4、0.2、0.1mM 。现用现配。2. 取 1.5mlAxygen 进口离心管,加入 50l 样品、标准品、空白对照。3. 向管中加 1.2ml 抽提剂,盖紧盖子,悬涡混合器振荡 30 秒。4. 加 0.2ml 铜试剂 Cu Reagent,振荡 30 秒,各管混匀强度时间保持一致。5. 室温放置 20min。6. 室温 2000g 离心 5min。7. 取 1ml 上层相转移到新离心管。8. 向新管内加 0.5ml 显色试剂 Color Reagent。混匀,室温孵育 5min。9. 用 1-cm 光径玻璃比色杯读取 550nmOD 值。10. 做标准曲线,计算 FFA 浓度。

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