1、0.25%胰酶-EDTA 的配制细胞消化胰酶的配制对一般细胞 0.25% 胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100ml PBS,0.25g 胰酶步骤：1 先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa212H2O/2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl,0.2gPO4H2K 溶于 1000ml 蒸馏水)2 称胰酶 0.25g3 加入 PBS 中，低速搅拌 4h 冰浴中, 或者 4过夜低速搅拌 0.5h 冰浴中4 调 PH7.45 仍在冰浴中6 过滤，分装，-20 保存，4短期内用完tip:低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫，酶就变性了。低
2、温，防止酶失活对难消化的细胞：在上述配方中，加入 0.02g 的 EDTA(0.02%)tip:因为 EDTA 可以络合 Ca2 ，增加消化效力实验常用溶液的配制1.革兰氏碘液：称碘化钾2g 溶于100ml 蒸馏水中，再加1g 碘使其溶解，最后用蒸馏水稀释至300m1，盛于棕色瓶内，保存于暗冷处。2.1.苯酚品红改良液（一）A 液：取3克碱性品红，溶于100ml 70酒精中（此液可长期保存） 。B 液：取 A 液10m1，加入90ml 5苯酚水溶液（一般在两周使用为好） 。C 液：取 B 液45m1，加入 6ml 冰醋酸和6ml 37甲醛。、苯酚品红改良液：取 C 液10m1，加入90ml45
3、冰醋酸和1克山梨醇。 2.2.苯酚品红改良液（二） ：A 液：碱性品红3g100ml 70乙醇。B 液：A 液10ml5苯酚水溶液90m1。C 液：B 液120ml冰醋酯12ml甲醛12ml。D 液：C 液120ml45冰醋酸480ml。在 D 液中加1山梨醇（600mlD 液中加 6g 山梨醇） ，此液配好后至少放4一5天方可使用，可保存几年。 3.1.甲基绿一哌罗宁混合染液（一）：醋酸缓冲液（pH4.8）02mol .L-1醋酸（A.R） （取1.2ml 加蒸馏水至100ml）4份02mol .L-1醋酸钠（A.R） （取272g 加蒸馏水至100ml）6份。2甲基绿染液：甲基绿2g，溶于
4、100ml 醋酸缓冲液（pH48）中，因甲基绿中往往含有剩余甲紫，可用分液漏斗加等量氯仿洗数次，静置一夜，去除甲紫，置4冰箱保存备用。l哌罗宁染液：哌罗宁比罗红 G、焦宁 G， （PyroninG） ，进口分装1g，溶于100ml 醋酸缓冲液中，置 4冰箱保存。甲基绿一 哌罗宁混合液：临用时按5：2比例（甲基绿：哌罗宁）配制。3.2.甲基绿哌罗宁染液（二）A 液：5哌罗宁水溶液4m1，2甲基绿水溶液14m1，蒸馏水 16ml。B 液：0 2M 醋酸缓冲液（pH4. 8）02M 醋酸溶液（12ml 醋酸加蒸馏水至100ml）4份；0. 2M 醋酸钠溶液(272g 醋酸钠加蒸馏水至100m1）16
5、份。使用液：将 A 液与 B 液混合（17：8）即成，不宜久置。4.肝素抗凝剂（500/ml）肝素注射液1支（12500单位）2ml 加23ml 灭菌生理盐水置4C 冰箱保存。5.淀粉肉汤：、6淀粉肉汤：牛肉膏 03g蛋白胨 10gNaC1 05g蒸馏水 100ml可溶液淀粉 60g煮沸灭菌，置4C 冰箱保存，用时水浴融化。l台盼兰染液台盼兰粉1g，溶于100ml 生理盐水中，配制时要加热使之完全溶解，置4冰箱保存。使用时将6淀粉肉汤中加入适量1台盼兰染液混匀。6.Giemsa 染液：将 Giemsa 染料1g 放于洁净干燥的研钵内逐渐加入甘油66ml，细细研磨,使其溶解，倾入烧杯中在水浴锅内
6、加温至60约1小时左右。使染料溶解，继而加入甲醇66ml、充分混合再在水浴锅内加温15分钟）,过滤后置于37温箱中24小时即可使用。7.RPMI1640培养液：取1640 10.4g 加入三蒸水至1000ml， （可加2mM L 一谷氨 酰胺）抽滤除菌，分装置4冰箱保存。8.025蛋白酶：胰蛋白酶0.25g,用0 .85%的 NaCL 溶解后，抽滤灭菌，保存于4冰箱中。9.0.25 mol.L-1蔗糖溶液：蔗糖（C 12H27O11）42.8g蒸馏水500m110.001秋水仙素：取秋水仙素001克加入灭菌生理盐水100ml 即成。11.中性红一詹纳斯绿 B 染液:甲液：将3滴詹纳斯绿饱和水溶
7、液詹纳斯绿 B（Janas Green)溶解度为5.18加到5ml 无水乙醇中，然后再加入 lml 1：15000中性红水溶液中性红（Nentral Red)10mg 溶于150ml 蒸馏水中，将瓶用黑纸包好贮于4冰箱内。乙液：在5ml 无水乙醇中加入2030滴中性红饱和溶液（中性红溶解度为564） 。将甲液和乙液混合在一起，即成中性红一詹纳斯绿 B 染液。此混合液的染料不稳定，将在24小时内发生沉淀，所以要临用前配制。12.pH68磷酸缓冲液：A 液：磷酸二氢钾（KH 2PO4)（A.R） 9.078g 溶于1000ml 蒸馏水中。B 液：磷酸氢二钠（Na 2HP04，2H 2O） （AR）
8、11876g 溶于1000ml 蒸馏水中。工作液：A 液：B 液（1：1）现用现配即成。13.硫堇染液：、硫堇饱和液：称取20g 硫堇粉剂溶于500ml 50酒精中，滤纸过滤。缓冲液：醋酸钠971g，巴比妥钠14714克，双蒸水500ml。01N HCI 染色液：将上述：按40：28：32ml 比例配成混合液，分装小瓶备用。此液保存数周仍可使用。14. 0075 mol .L-1 KCl 低渗液：氯化钾（KCl） 055克溶于100ml 蒸馏水中。15.001BrdU 液：称取10mgBrdU 粉剂，溶于100ml 无菌生理盐水（一般称5mg BrdU 加50ml 无菌生理盐水即可） ，其浓度
9、相当于100gml。瓶外用黑纸包裹避光保存，置4冰箱备用。16.0.5%双盐酸喹吖因取双盐酸喹吖因0.5克，溶于100毫升蒸馏水中即成。17.0.005%氮介喹吖因取5毫克氮介喹吖因，溶于100毫升蒸馏水中即可。18.Mcllvaine 氏磷酸缓冲液0.1M 柠檬酸水溶液：柠檬酸（C 6H8O7.H2O）21.0克，加蒸馏水1000毫升溶解。0.2M 磷酸氢二钠溶液：磷酸氢二钠（N a2HPO4.12H2O）71.6克，加蒸馏水1000毫升溶解。取上述柠檬酸液8.4毫升、磷酸氢二钠11.6毫升混合，调 pH 至5.6即可。 19.50%聚乙二醇的制备根据实验需要，称取一定量的 PEG（MW=4
10、000）防入刻度离心管中，在酒精灯火焰旁边加热，使其溶化。待冷却至50 。 C 时加入等体积并预热的无血清1640液混合均匀，置37 。 C水浴中保温、待用。20.0.4%酚红液称取酚红4克放在玻璃研钵中，逐渐加入0.1mol/L 的 NaOH 并不断研磨，直到所有颗粒完全溶解，加入的 NaOH 量为11.28毫升，将已溶解的溶液吸入100毫升量瓶中，用重蒸水洗研钵数次，均集中于量瓶中，最后加至100毫升，摇匀后，保存于4 。 C 冰箱中备用。21. Hanks 液原液 A：NaCl 160gKCl 8gMgSO4.7H2O 2gMgCl .6H2O 2g溶于800 ml 重蒸水中CaCl 2
11、.8g溶于100 ml 重蒸水中两液混匀后加氯仿 2ml保存于4 。 C 冰箱内。原液 B：Na 2HPO4.12H2O 3.04gKH2PO4 1.2 g葡萄糖 20g溶于800 ml 重蒸水中0.4%酚红液 100ml重蒸水 加至1000 ml氯仿 2 ml保存于4 。 C 冰箱内。使用时按下列比例配成 Hanks 液：原液 A 1份原液 B 1份重蒸水 18份以610 4Pa（9磅）消毒灭菌10分钟，保存于4 。 C 冰箱内，可用一个月。用前每100ml 加入3.5%NaHCO 31ml。 22.Alsver 液葡萄糖 2.05克，枸橼酸钠 0.8克，NaCl 0.42克，重蒸水加至10
12、0毫升。2302甲酸溶液：用1ml 注射器量取02ml 甲酸溶液加入到998ml 双蒸水中混匀。2450硝酸银溶液：称取1g 硝酸银加入到2m1 02的甲酸溶液中，充分溶解。注意：硝酸银工作液应现配现用，放置时间不要超过20分钟，如出现浑浊即不能再用。配制和使用硝酸银溶液时要格外小心，不要洒在手上、桌上及显微镜等处，以免被硝酸银氧化产生极难除去的黑色污点。 2502 mo1 .L-1盐酸溶液：吸取17m1 12mol/L 盐酸徐徐加入到983ml 的蒸馏水中。261氢氧化钡溶液：称取氢氧化钡1克溶于100m1 蒸馏水中。 275氢氧化钡溶液：称取氢氧化钡5克溶于100m1 蒸馏水中。282SS
13、C 溶液：称取氯化钠1754克和柠檬酸钠8 82克一起溶于1000ml 蒸馏水中。293明胶液：称取明胶015g，加入生理盐水5ml ，沸水浴加热溶解，临用时配制，置于37恒温箱中保温。301瑞氏染液：取05g 瑞氏染料加入甲醇50m1 。配好后若存放2周1月，使用效果更好。3102gm1秋水仙素：称 001g 秋水仙素溶于400m1 085氯化钠溶液中，此为原液。使用时用每毫升50滴的毛细管取2滴原液，滴入5ml 培养液中，最终浓度为02gm1。32ICN 液：氯化钠08g 、氯化钾002g、磷酸氢二钠 03g，磷酸二氢钾002g，加水至100毫升。33GKN 液：葡萄糖 0 1g、氯化钾004g、氯化钠 08g、碳酸氢钠 0035g，加水至100毫升。34002胰蛋自酶液：称取胰蛋自酶025g，溶于10毫升 ICN 溶液中，分装每瓶1毫升，冰冻保存。临用前，将原液1毫升加入120毫升 ICN 溶液中，用3Tris 调 pH 值至70。353Tris 液：称 Tris 3g 溶于100毫升双蒸水中。
